Dostępność nowoczesnych leków przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby typu B (HBV) z wyraźnymi wskazaniami do ich podawania wymaga dokładnej i szybkiej weryfikacji diagnozy. Jednak ze względu na ograniczone dane kliniczne w pierwszych tygodniach choroby i ograniczone metody analizy immunologicznej, tempo diagnozy maleje.
Obecność markerów anty-HBc IgM, HBsAg, anty-HBc, HBeAg, anty-HBe pozwala potwierdzić HBV lub ustalić fakt poprzedniej choroby. Ale możliwe jest określenie obecności aktywnych cząstek wirusa we krwi i policzenie ich liczby w czasie badania metodą PCR - ilościowy test w czasie rzeczywistym do wykrywania zapalenia wątroby typu B. Metoda ta, w porównaniu z metodami diagnostycznymi ELISA, rozwiązuje problemy diagnostyczne i pozwala przewidzieć przebieg choroby podczas przyjmowania leki przeciwwirusowe.
Podstawy diagnozy choroby
Rozpoznanie zapalenia wątroby typu B opiera się na ocenie objawów klinicznych, immunooznaczeń enzymatycznych i instrumentalnych metod badań. Choroba występuje w ostrej fazie po okresie inkubacji i, w zależności od dawki zakażenia i skuteczności leczenia, wchodzi w stadium przewlekłe. Głównym celem leczenia jest zapobieganie chronizacji, czyli eliminacji wszystkich cząstek wirusowych z krwi. Przebieg kliniczny choroby jest lekarstwem bez następczej wiremii.
Fakt wyeliminowania infekcji musi być udowodniony ilościową metodą badań.
Ponieważ każdy jakościowy immunooznaczenie enzymatyczne umożliwia diagnozowanie HBV pośrednio, to znaczy nie wykazuje obecności patogenu w wewnętrznym środowisku ciała, ale charakteryzuje odpowiedź immunologiczną na infekcję, monitorowanie skuteczności terapii i fakt wyleczenia staje się trudny do udowodnienia. Dlatego pacjent z wirusowym zapaleniem wątroby typu B lub z obecnością kryteriów diagnostycznych na jego korzyść powinien zostać poddany reakcji łańcuchowej polimerazy w celu ilościowego określenia liczby cząstek wirusowych we krwi. Częstotliwość diagnostyczna to brak kopii DNA zakażenia.
Opis metody diagnostycznej
Bardzo czuła metoda diagnostyki zapalenia wątroby typu B PCR należy do kategorii genetycznie modyfikowanych badań biologicznych. Przez to określa się ilość wirusowego DNA w materiale biologicznym pacjenta i dopuszczalną szybkość. Zgodnie z uzyskanymi wynikami ustalono liczbę cząstek wirusa na jednostkę objętości. Materiałem do testu diagnostycznego jest krew żylna pacjenta. Pożądane jest przyjmowanie na pusty żołądek ze względu na możliwy wpływ surowicy chylowej na wynik badania.
Uzyskane wyniki należy przekazać lekarzowi w celu interpretacji i określenia dalszych taktyk. Niezależne dekodowanie nie reprezentuje wartości diagnostycznej.
Znaczenie wyniku liczby cząstek wirusowych uzyskanych metodą PCR przewyższa wartość enzymatycznych testów immunologicznych. Ponieważ analiza w trybie czasu rzeczywistego pokazuje obecność czynnika chorobotwórczego we krwi, jego zawartość informacyjna jest wyższa niż innych. Jeśli test ELISA wskazuje jedynie na obecność przeciwciał, które obserwuje się od 4 tygodni okresu inkubacji i trwa dłużej niż 8 tygodni po eliminacji wirusa z krwi, wówczas reakcja łańcuchowa polimerazy wyraźnie potwierdza aktywny przebieg choroby lub jej wyleczenie, charakteryzuje dynamikę przepisanej terapii.
Reakcja łańcuchowa polimerazy z ilościowym oznaczeniem cząstek patogenu rozwiązuje pytania diagnostyczne na korzyść zaprzestania leczenia z powodu powrotu do zdrowia lub kontynuacji leczenia ze względu na brak skuteczności. Metoda jest jak najbardziej specyficzna dla wirusa HBV i wyróżnia się dopuszczalnym błędem.
Wskazania i cele wydajności
Analiza ilościowa wirusowego zapalenia wątroby typu B jest najbardziej wiarygodna i pozwala potwierdzić dane uzyskane metodami ELISA. Jest mianowany, gdy:
- uzyskanie pozytywnego wyniku diagnostycznego testu ELISA;
- leczenie pacjenta z ustaloną diagnozą wirusowego uszkodzenia wątroby;
- w diagnostyce mieszanej etiologii zapalenia wątroby;
- w razie potrzeby określ obciążenie wirusem u pacjenta.
Ponieważ metoda immunoenzymatyczna jest stosowana w szerszym zakresie w praktyce specjalisty chorób zakaźnych, niektórzy pacjenci z łagodną chorobą mogą być leczeni bez konieczności liczenia obciążenia wirusem. Ale PCR jest ogólnie uważany za „złoty standard” diagnostyki w hepatologii, ponieważ ze względu na wyjątkowość jego wyniku usuwa wiele problemów organizacyjnych. Dlatego kierunek pacjenta do analizy ilościowej ma następujące cele:
- uzyskiwanie danych o liczbie cząstek wirusowych we krwi pacjenta;
- potwierdzenie ostrego przebiegu zapalenia wątroby i terminowej weryfikacji choroby przewlekłej;
- stałe wykrywanie ukrytych nosicieli wirusów za pomocą pozytywnych testów ELISA, monitorowanie ich wiremii;
- podejmowanie decyzji o wyborze leczenia przeciwwirusowego, jego połączeniu i zakończeniu.
Najważniejszym celem zastosowania ilościowego testu PCR do wykrywania HBV jest zidentyfikowanie możliwych kombinacji leczenia. W przypadkach wysokiego obciążenia wirusem wynik analizy daje specjaliście możliwość kontynuowania połączenia leków. Podczas terapii łatwo jest określić skuteczność przepisanego leczenia farmakologicznego na podstawie wyniku PCR. Kierując się jedynie danymi z metod testów immunologicznych, niemożliwe jest terminowe określenie faktu leczenia i jego aktualnej skuteczności. Dlatego ilościowy test w czasie rzeczywistym jest konieczną analizą przed rozpoczęciem leczenia ostrego zapalenia wątroby, utajonego zakażenia wirusem z wysoką wiremią i przewlekłym HBV.
Interpretacja wyników testu ilościowego PCR
Interpretacja wyników testu ilościowego PCR powinna zostać przeprowadzona przez lekarza prowadzącego pacjenta. Konieczna jest ocena wskaźnika diagnostycznego i określenie taktyk terapeutycznych.
Standardowy analizator jest w stanie wytworzyć wskaźnik ilościowy, który odzwierciedla liczbę kopii wirusowego DNA obecnego w badanej krwi żylnej. Jednostki miary - kopie / ml, IU / ml (kopie na mililitr, jednostki międzynarodowe na mililitr). Interpretacja wyników podana jest w tabeli ze wskazaniem różnych jednostek miary.
Rodzaje PCR dla zapalenia wątroby typu B i interpretacja wyników
Reakcja łańcuchowa polimerazy jest rodzajem badania krwi, które może dokładnie wykryć wirus zapalenia wątroby typu B. Cechą tej metody jest to, że jest w stanie wykazywać HBV we wczesnych stadiach - jeden miesiąc po zakażeniu, podczas gdy specyficzny antygen jest wykrywany u pacjenta dopiero po 2 miesiącach. PCR może wykryć nie tylko normalny wirus DNA, ale także zmutowane szczepy, których nie widzi żadna inna analiza.
Podczas dekodowania PCR dla zapalenia wątroby typu B wyniki są porównywane ze standardowymi wartościami. Na tej podstawie wyciąga się wnioski dotyczące obecności choroby (wynik pozytywny), stężenia wirusa (aktywność) lub braku choroby (wynik ujemny). Przetwarzanie danych trwa 2 tygodnie.
Rodzaje PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu B
Istnieją 2 rodzaje diagnostyki, które są zalecane dla zapalenia wątroby typu B. Wysokiej jakości PCR umożliwia, z dokładnością do 100%, stwierdzenie, czy HBV jest we krwi, czy nie. Ilościowa PCR pokazuje aktywność wirusa, to znaczy, ile DNA HBV jest zawarte w 1 ml krwi.
Wysokiej jakości PCR i jego interpretacja
Badanie krwi na wirusowe zapalenie wątroby typu B metodą PCR może wykryć jedynie obecność fragmentów DNA. Wyznaczeni w przypadku, gdy pacjent podejrzewa zakażenie HBV (HBV) lub gdy inne metody diagnozy, na przykład testy serologiczne, nie dają jasnej odpowiedzi. Dekodowanie wyników podczas przeprowadzania analizy jakościowej jest bardzo proste:
- wynik negatywny - brak wirusa;
- wynik pozytywny - wykryto wirusa.
Celem wysokiej jakości PCR jest potwierdzenie lub zaprzeczenie obecności wirusa zapalenia wątroby typu B, a także przeprowadzenie wczesnej diagnozy. Jeśli HBV zostanie wykryty w ciągu 1-2 tygodni po zakażeniu, leczenie będzie tak skuteczne, jak to możliwe. Wraz z aktywnym rozwojem HBV przez 2 miesiące i dłużej, choroba staje się przewlekła i nie można jej całkowicie wyleczyć.
W przypadku, gdy obecność wirusa wskazuje na wysokiej jakości PCR dla zapalenia wątroby, następnym krokiem jest przeprowadzenie diagnostyki ilościowej.
Ilościowa PCR
W celu skutecznego leczenia lub oceny wyników terapii nie wystarczy po prostu wiedzieć, że pacjent ma HBV. Konieczne jest ilościowe określenie wartości DNA wirusa zapalenia wątroby typu B w 1 ml krwi, czyli ładunku wirusa na ciele. Ten rodzaj PCR dla zapalenia wątroby typu B jest wykonywany w następujących przypadkach:
- Przed przepisaniem leczenia.
- Aby ocenić skuteczność terapii.
- Aby określić rozwój oporności wirusa na przyjmowane leki.
- Aby określić etap, na którym choroba się znajduje.
Jednostką miary wirusa jest jednostka międzynarodowa (IU / ml) lub liczba kopii DNA / ml, czyli liczba fragmentów DNA na 1 ml krwi. Stosunek między dwoma jednostkami zależy od wybranego systemu testowego i wynosi od 2 do 7 kopii / ml w 1 IU / ml. Jeśli system jest nieznany, uśredniona wartość jest używana do konwersji:
1 IU / ml = 5 kopii / ml
Jeśli analiza ilościowa jest wykonywana natychmiast, marginalna stopa diagnostyczna choroby wynosi 75 IU / ml. Gdy wynik jest powyżej tego wskaźnika, dokonuje się diagnozy HBV poniżej - HBV nie jest wykrywany.
Leczenie ilościowej PCR
W zapaleniu wątroby typu B następujące wartości wiremii (wiremia), kopie / ml, są standardami PCR:
- 10 ^ 5 kopii / ml. Gdy przy dużej aktywności wirusowej występuje wzrost poziomu ALT częściej 2 razy w ciągu sześciu miesięcy, natychmiast zaleca się leczenie przeciwwirusowe.
Aby dowiedzieć się, jak zachowuje się wirusowe zapalenie wątroby pod względem przewlekłości, czyli przejścia do ostrej postaci przewlekłej, stosuje się również wyniki diagnostyki PCR:
- DNA HBV 2 x 10 ^ 6 kopii / ml oznacza, że nabycie przewlekłej postaci choroby jest nieuniknione.
Przygotowanie do ankiety
Aby określić obecność HBV metodą PCR, krew pobierana jest z żyły. Procedura jest zawsze przeprowadzana wyłącznie na czczo i najlepiej jest dostać się do laboratorium rano, gdy naturalny czas odpoczynku od jedzenia wynosi 8 godzin. Aby wyniki badania były prawidłowe, należy wcześniej wiedzieć, jak przygotować się do prawidłowego udania się do kliniki. Dodatkowe kroki są następujące:
- Odmowa spożywania tłustych potraw, palenia, alkoholu i uprawiania sportu przez 12 godzin przed zabiegiem.
- Odpocznij przez 20 minut bezpośrednio przed oddaniem krwi.
- Przed rozpoczęciem zabiegu pielęgniarka powinna zostać ostrzeżona o przyjmowanych lekach.
Uwaga! Jeśli diagnoza zostanie przeprowadzona na dziecku poniżej 5 lat, a następnie na pół godziny przed zabiegiem, powinien pić 1 szklankę przegotowanej wody co 10 minut.
Podsumowując
Do tej pory diagnostyka PCR do wykrywania zapalenia wątroby typu B jest najdokładniejszą metodą. Metoda pozwala zobaczyć ukryte i zmutowane formy choroby, zidentyfikować chorobę w pierwszych tygodniach po zakażeniu i odpowiednio przeprowadzić skuteczne leczenie. W zależności od sytuacji przeprowadzana jest jakościowa lub ilościowa reakcja PCR, której celem jest wykrycie HBV i ustalenie jego aktywności. Aby zostać poddanym badaniu, musisz skontaktować się z wirologiem, specjalistą chorób zakaźnych lub hepatologiem.
DNA wirusa zapalenia wątroby typu B i PCR
Testy DNA i PCR wirusa zapalenia wątroby typu B są najbardziej czułymi testami wykrywającymi śladowe ilości DNA w wątrobie, które identyfikują obecność wirusa. Istota metody polega na wielokrotnym kopiowaniu fragmentu DNA należącego do czynnika chorobotwórczego.
PCR typu zapalenia wątroby typu B jest reakcją łańcuchową polimerazy zewnętrznego odczynnika chemicznego z badanym materiałem biologicznym, mającą na celu identyfikację wirusowych cząsteczek DNA we krwi i ich ilościowych wskaźników na jednostkę objętości. Analiza jest przypisywana w następujących przypadkach:
- jeśli u pacjenta występują objawy zapalenia wątroby typu B;
- podczas czynności diagnostycznych mieszanego zapalenia wątroby;
- wyjaśnić skuteczność terapii.
Do analizy PCR pobiera się krew żylną. Przed badaniem należy powstrzymać się od jedzenia około 8 godzin.
Normalny wynik wykrywania DNA u wirusa uznaje się za „niewykrywany”. Oznacza to, że wirus jest nieobecny we krwi lub jego zawartość jest nieznaczna. Ostateczną diagnozę może przeprowadzić wyłącznie specjalista na podstawie kompleksowej analizy biochemicznej i immunologicznej osocza krwi dla zapalenia wątroby typu B. Lekarz przepisuje przebieg terapii. Samoleczenie wiąże się ze zbyt dużym ryzykiem.
Próbki krwi żylnej wykonuje się w celu analizy PCR.
Metoda PCR umożliwia wykrycie DNA patogenu nawet przy minimalnej jego obecności w wybranej próbce krwi. Ponadto analiza pozwala wykryć antygeny, które zostały już opracowane dla wirusa. Każdy z antygenów wskazuje na konkretny etap choroby:
- HBsAg - wirus jest obecnie obecny.
- Obecnie nie ma anty-HBcor - patogenu, ale był w przeszłości.
- Anty-HBs - we krwi znajdują się przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B (opcjonalnie - opryszczka, HIV, chlamydia, mykoplazmoza, kandydoza, gruźlica, kleszczowe zapalenie mózgu i wiele innych chorób).
Patologia i jej znaki
Wirusowe zapalenie wątroby typu B lub HBV jest infekcją wirusową, która atakuje komórki wątroby. Jest niebezpieczny nie tylko przez bezpośrednie działanie na miąższ narządu, który osłabia funkcję bariery i ogólną odporność. Możliwe są poważniejsze konsekwencje, takie jak marskość wątroby i występowanie nowotworów złośliwych.
HBV jest przenoszony przez krew osoby zakażonej wirusem zapalenia wątroby, jego odchodów, poprzez kontakt z błonami śluzowymi, zwłaszcza podczas stosunku płciowego, zmian skórnych, przez niesterylne strzykawki podczas transfuzji krwi lub podczas operacji brzusznych. Noworodek może zostać zainfekowany przez swoją chorą matkę, gdy dotyka pęknięć w jej sutkach.
Następujące objawy są charakterystyczne dla wirusowego zapalenia wątroby typu B:
Niezwykłe zmęczenie
- zwiększenie zmęczenia przy niskich obciążeniach;
- niezwykłe zmęczenie;
- ciężkość w prawym hipochondrium;
- zmniejszony apetyt, nudności;
- zażółcenie skóry, twardówka oczu;
- jasne odchody;
- ciemny mocz;
- ból stawów.
Okres inkubacji, po którym objawy te zaczynają się pojawiać, wynosi od jednego do sześciu miesięcy. Jest to okres akumulacji komórek wirusa w krwiobiegu wątroby. Gdy ich stężenie osiągnie masę krytyczną, wirus przebija się przez błony hepatocytów i kontynuuje namnażanie wewnątrz komórek. W rezultacie umierają komórki wątroby, rozwija się marskość wątroby, która przy braku odpowiednich środków terapeutycznych powoduje, że pacjent jest śmiertelny. Terminowe badanie krwi w kierunku PCR i DNA wirusa zapalenia wątroby typu B pomaga uniknąć negatywnych.
Wskazania do PCR to:
- pozytywny test DNA potwierdzający rozpoznanie zapalenia wątroby typu B;
- ostre i przewlekłe zapalenie wątroby;
- mieszane zapalenie wątroby;
- ilościowe oznaczanie wirusa w surowicy krwi;
- rozwój taktyki skutecznej terapii.
Przygotowanie do analizy
Przygotowanie do diagnozy za pomocą PCR zależy od rodzaju biomateriału. Więc krew i mocz oddają tylko rano, na pusty żołądek. Pobrano również rozmazy i zadrapania z obszaru moczowo-płciowego. Jedynym ograniczeniem dla kobiet jest miesiączka. Seks jest ograniczony dla obu płci w przededniu badań.
Wyniki PCR można uznać za wiarygodne tylko wtedy, gdy pacjent jest odpowiednio przygotowany do zabiegu. Badanie to zakłada następujące warunki:
- pełen duchowego komfortu, braku podniecenia. Aby zapewnić, że ta analiza może zostać przekazana nawet w domu. Wystarczy zadzwonić do lekarza z odpowiednim sprzętem;
- powstrzymanie się od jedzenia, alkoholu, palenia, aktywności fizycznej co najmniej 8-12 godzin przed analizą, w przeciwnym razie dane badawcze zostaną zniekształcone;
- 15-20 minut pełnego relaksu przed pobraniem krwi;
- przerwanie przyjmowania leków (jeśli nie jest to możliwe, należy ostrzec laboratorium);
- dzieciom poniżej piątego roku życia na pół godziny przed analizą należy podać przegotowaną wodę do picia w małych porcjach.
Jak wygląda badanie
Analiza PCR opiera się na zasadach stosowanych w biologii molekularnej. Polegają one na wykorzystaniu specjalnych enzymów, które rozszczepiają i replikują części DNA i RNA czynnika zakaźnego znajdującego się we krwi. Po tej operacji uzyskane próbki są identyfikowane przez bazę danych dostępną w laboratorium. Jednocześnie wykrywany jest rodzaj zakażenia i stężenie we krwi patogenu.
Do badań wykorzystano wzmacniacz - termostat zdolny do ogrzewania i chłodzenia rur z biomateriałem. Jest to konieczne do aktywacji procesów replikacji. Dokładność analizy zależy od dokładności parametrów temperatury.
Wyniki dekodowania
Pozytywnym wynikiem dla pacjenta jest wniosek laboratoryjny „nie wykryty”. Oznacza to brak DNA wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi, w kategoriach liczbowych jest to około 120 IU / ml lub 200 kopii na tę samą jednostkę objętości krwi. Ta wartość jest normą. Wymóg dotyczący materiału biologicznego polega na tym, że nie powinien być zanieczyszczony.
Dekodowanie innych wyników analizy umożliwia wykonanie następujących diagnoz:
- Stężenie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi wynosi ponad 200 kopii, ale poniżej poziomu krytycznego. Ciężka patologia jest nieobecna.
- Wiremia w łagodnej postaci, do 500 kopii na ml. Wybór leczenia zależy od wskaźników biopsji wątroby i stopnia pogorszenia jego funkcji.
- Zwiększone stężenie wirusa (ponad 500 kopii / ml). Proces zapalny w fazie aktywnej i wymaga intensywnej terapii przeciwwirusowej.
- Maksymalne obciążenie wirusem (ponad 800 kopii na ml). Środki terapeutyczne są opracowywane w oparciu o stan pacjenta i są w całości ukierunkowane na maksymalną możliwą poprawę.
Określenie wskaźników ilościowych zawartości DNA w wirusowym zapaleniu wątroby typu B podczas PCR jest podstawą wyboru kursu terapeutycznego. Po trzech lub sześciu miesiącach ponownie wykonuje się testy w celu sprawdzenia skuteczności terapii przeciwwirusowej.
Funkcja reakcji łańcuchowej polimerazy
W metodzie PCR wykorzystuje dwa podejścia do oznaczania DNA należącego do wirusa: jakościowy i ilościowy.
Podejście jakościowe potwierdza lub zaprzecza obecności wirusowego zapalenia wątroby typu B. PCR jest przepisywany na wniosek pacjenta podejrzewającego, że jest zakażony zakażeniem HBV lub w przypadku, gdy wczesna diagnoza nie daje jednoznacznych wyników w żaden inny sposób.
Jeśli wirus zapalenia wątroby typu B może zostać wykryty nie później niż dwa tygodnie po jego wejściu do organizmu, najprawdopodobniej wystąpi pozytywna prognoza leczenia. W przyszłości choroba zacznie się rozwijać. Po około dwóch miesiącach wejdzie w fazę przewlekłą. Całkowite wyleczenie w tym przypadku stanie się niemożliwe.
Ilościowe podejście do PCR jest stosowane tylko wtedy, gdy wykryty zostanie wirus. Ocenia:
- specyficzne obciążenie wirusowe wątroby;
- intensywność postępu choroby;
- odporność na leki przeciwwirusowe;
- skuteczność leczenia.
Wskaźniki te mają bezpośrednie znaczenie praktyczne. Szczególnie ilościowy wskaźnik DNA. Rokowanie w ostrej fazie zapalenia wątroby typu B zależy od stężenia wirusa w krwiobiegu wątroby, dlatego niskie stężenie komórek wirusowych prawie całkowicie wyklucza przejście ostrego do przewlekłego zapalenia wątroby. Tacy pacjenci nie stanowią zagrożenia dla innych. Wysoki poziom wiremii przyczynia się do chronizacji procesu patologicznego i możliwości zakażenia wirusem zapalenia wątroby u osób mających kontakt z pacjentem.
Istnieje również związek między stężeniem genów wirusowych we krwi a degeneracją marskości wątroby oraz występowaniem raka w miąższu.
Testy PCR pomagają lekarzowi wykryć nosicieli wirusów.
Skuteczność terapii przeciwwirusowej zależy od stopnia zmniejszenia stężenia DNA wirusa zapalenia wątroby typu B w krążeniu wątrobowym. Wystarczającym wynikiem jest zmniejszenie obciążenia wirusem o 1-2 razy przy intensywnym leczeniu od trzech miesięcy do sześciu miesięcy. Niższe stawki wymagają zmiany leczenia.
Prognozy rozwoju patologii i wyznaczenia odpowiedniej terapii pochodzą z:
- ilościowa objętość DNA wirusa wątrobowego w surowicy krwi;
- pokrewne parametry biochemiczne (na przykład poziom leukocytów we krwi i zawartość bilirubiny tam);
- wirusowe markery infekcji;
- wyniki biopsji wątroby.
PCR ogólnego przeznaczenia
Analizy za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy pomagają lekarzowi:
- wykryć nosicieli wirusa;
- przewidzieć rozwój zapalenia wątroby typu B;
- upewnij się, że choroba staje się przewlekła;
- monitorować aktywność wirusa we wszystkich fazach rozwoju;
- zidentyfikować zmutowane i ukryte szczepy wirusa zapalenia wątroby typu B;
- ocenić skuteczność leczenia wirusa przy wyborze określonej taktyki i zmienić ją w przypadku niewystarczającego sukcesu.
Zalety metody
W przeciwieństwie do innych testów używanych do diagnozowania zapalenia wątroby typu B, PCR ma:
Analiza PCR jest niezwykle wrażliwa.
- Wyjątkowa wrażliwość. Technika ta pozwala badaczowi wykryć czynnik chorobotwórczy, nawet jeśli stężenie jego cząsteczek DNA we krwi jest minimalne. Pozwala to na podjęcie środków zapobiegawczych i leczniczych na wczesnym etapie choroby, gdy najwyraźniej nie jest jeszcze wyrażona żadnymi objawami.
- Szeroki zakres możliwości. PCR może wykryć nie tylko czynnik sprawczy wirusowego zapalenia wątroby typu B, ale także szereg innych patologii.
- Uniwersalność podejść. Biomateriałem do badań mogą być krew, ślina, komórki śluzowe i skóra.
- Wydajność. Wniosek będzie gotowy dokładnie jeden dzień po pobraniu krwi (wynik samej analizy uzyskuje się nie później niż 7 godzin).
- Wiarygodność. We wszystkich warunkach metody PCR nigdy nie pokazuje fałszywych danych.
- Badanie dostępności cen. Po kosztach PCR jest tylko nieznacznie wyższy niż zwykłe testy, w których wykorzystuje się krew jako biomateriał.
Jedynym kosztem badań jest ich złożoność technologiczna. Do wysokiej jakości wykonania PCR potrzebny jest wyjątkowo czysty biomateriał, nowoczesny sprzęt i dobrze wyszkolony personel. Zaleca się, aby zastosować tę metodę do diagnostyki w wyspecjalizowanych laboratoriach.
Wirusowe zapalenie wątroby typu B odnosi się do chorób, których całkowite wyleczenie jest możliwe tylko na najwcześniejszych etapach rozwoju. Rozpoznanie choroby w tej fazie pomaga w diagnostyce nadwrażliwości metodą PCR. Pierwsze objawy, które powodują podejrzenie uszkodzenia wątroby przez wirusa, powinny być powodem do konsultacji ze specjalistą. Jeśli diagnoza zostanie potwierdzona, leczenie należy rozpocząć natychmiast. Poprawi to rokowanie i zwiększy prawdopodobieństwo utrzymania wątroby w dobrym stanie przez wiele lat.
Rozszyfrowanie badania krwi na zapalenie wątroby typu B
Wirusowe zapalenie wątroby typu B jest jedną z najniebezpieczniejszych chorób naszych czasów.
Jest to spowodowane przez wirus, który dostaje się do organizmu, gdy krew wchodzi w kontakt z zakażonym materiałem biologicznym, w tym krew pozostającą na akcesoriach do manicure, instrumentach medycznych, maszynach do tatuowania, które nie zostały odpowiednio zdezynfekowane. Wirus może być również przenoszony przez kontakty seksualne.
Wirusowe zapalenie wątroby typu B jest analizowane w celu zdiagnozowania choroby poprzez pobranie krwi pacjenta.
Zakażenie następuje drogą płciową i domową, rodzaj rozprzestrzeniania się jest krwiotwórczy (przez krew). Po zainfekowaniu wirus przenika do hepatocytów (komórek wątroby), które są wytwarzane w przyszłości. W krwiobiegu choroba szybko rozprzestrzenia się w całym ciele. Wirus B (HBV) charakteryzuje się wysoką odpornością na działanie temperatury i kwasu i jest w stanie utrzymać jego szkodliwe właściwości przez sześć miesięcy.
Jakie masz badania krwi na zapalenie wątroby typu B?
Jeśli wirusowe zapalenie wątroby typu B wykazało pierwsze objawy, konieczne jest przeprowadzenie testów przed rozpoczęciem leczenia i leczenia. Badanie krwi jest niezawodną metodą instalowania zakażenia wirusem zapalenia wątroby. Przeprowadzone w laboratorium. Materiał testowy na zapalenie wątroby typu B podaje się na pusty żołądek: minęło co najmniej 8 godzin od ostatniego posiłku.
Aby wykryć wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi, stosuje się testy trzech typów, które charakteryzują obecność wirusa we krwi:
- analiza obecności DNA HBV w materiale przez badanie reakcji łańcuchowej polimerazy;
- badanie jakościowe obecności białka IgG anty-HBc i antygenu HBsAg (występującego u zdrowych, zakażonych i chorych);
- analiza wykrywania białek HBeAg i anty-HBc IgM (charakteryzują pogorszenie choroby).
Dla kompletności zaleca się jednoczesne prowadzenie badań na kilku znacznikach.
Testy immunologiczne na zapalenie wątroby typu B
Najczęstsze testy na wirusowe zapalenie wątroby typu B są immunologiczne. Ich istotą jest wykrywanie przeciwciał we krwi wytwarzanej przez organizm lub wątrobę. Próbki są jakościowe i ilościowe. Testy i transkrypty zapalenia wątroby typu B zwykle zawierają informacje o kilku charakterystycznych białkach. Podczas testu testowane są następujące przeciwciała:
Występuje we wczesnych stadiach zakażenia przed wystąpieniem objawów klinicznych.
Dodatni znacznik wskazuje na obecność wirusa, ale występuje także u całkowicie zdrowych ludzi. Jeśli we krwi jest mniej niż 0,05 IU / ml, wynik uważa się za negatywny. Jeśli stężenie przeciwciała jest wyższe, analizę uznaje się za pozytywną.
Występuje u praktycznie każdego zakażonego pacjenta. Utrzymywanie wskaźników na wysokim poziomie może wskazywać na przejście choroby w przewlekłą formę kursu. Dodatni znacznik wskazuje na obecność choroby w okresie zaostrzenia, przedłużony powrót do zdrowia. HBeAg to bardzo zły znak. Pacjent jest bardzo zaraźliwy. Zazwyczaj białko nie jest wykrywane we krwi.
Istnieją dwa rodzaje przeciwciał anty-HBc: IgG i IgM. Obecność IgM we krwi jest oznaką przebiegu ostrej postaci, wysokiej zakaźności pacjenta i możliwości pererohody w postaci przewlekłej. Zazwyczaj obecność IgM nie jest dozwolona. IgG jest korzystnym wskaźnikiem. Marker wskazuje na odporność organizmu na zapalenie wątroby typu B.
Jeśli marker zostanie wykryty we krwi, można wyciągnąć wniosek o korzystnym przebiegu choroby i tworzeniu ochronnej odporności u pacjenta.
- Anty-HBs.
Marker sygnalizuje powrót do zdrowia i tworzenie odporności.
Wykrywanie DNA HBV metodą PCR
Do badań laboratoryjnych i wykrywania obecności rozpoznania zapalenia wątroby typu B we krwi stosuje się metodę PCR. Sposób, w jaki uważa się reakcję łańcuchową polimerazy, jest najbardziej aktualny w dziedzinie wykrywania chorób.
Ostateczne dekodowanie pokazuje, czy w komórkach wątroby są ślady obecności genu patogenu.
Jeśli podczas badania przestrzegane są wszystkie zasady, wynik jest absolutnie dokładny. Metodę stosuje się w diagnostyce, stosowaniu w procesie leczenia i terapii przeciwwirusowej.
- Wysokiej jakości PCR na całości ma tylko dwa znaczenia: „wykryty” i „nie wykryty”. Procedura jest wykonywana dla każdego pacjenta z podejrzeniem zapalenia wątroby. Przy średniej czułości testu PCR w zakresie od 10 do 500 IU / ml, przy niskim poziomie DNA wirusa we krwi, nie zostanie wykryty żaden materiał genowy.
- Ilościowa PCR. W przeciwieństwie do jakościowego, wskazuje nie tylko zapalenie wątroby typu B. Analiza ilościowa wskazuje, jak daleko norma osoby zdrowej jest daleka od wskaźników pacjenta w ujęciu liczbowym. Metoda pozwala ocenić stan choroby i przepisać leczenie. Czułość testu PCR pod względem ilościowym jest wyższa niż w metodzie jakościowej. Podstawą jest liczba wykrytego DNA, która jest wyrażona w kopiach na mililitr lub IU / ml.
Ponadto ilościowa PCR zapewnia wgląd w efekty leczenia i poprawność wybranej terapii. W zależności od ilości materiału genu wirusa, może zostać podjęta decyzja o skróceniu czasu trwania leczenia lub, przeciwnie, przedłużeniu i wzmocnieniu go.
Biochemiczne badanie krwi na zapalenie wątroby typu B
Metoda analizy biochemicznej jest wymagana do uzyskania pełnego obrazu klinicznego przebiegu choroby. Ta metoda diagnostyczna pozwala zrozumieć pracę narządów wewnętrznych (wątroby, nerek, pęcherzyka żółciowego, tarczycy i innych). Dekodowanie pozwala zrozumieć tempo przemiany materii w organizmie, możliwe patologie metabolizmu. Szczegółowe wskaźniki będą wskazywać na brak witamin, makroskładników i minerałów niezbędnych dla ludzkiego zdrowia i życia.
Możesz wykonać test na zapalenie wątroby w dowolnym innym ośrodku diagnostycznym (Invitro, Gemotest itp.). Biochemiczne badanie krwi do wykrywania zapalenia wątroby typu B obejmuje następujące składniki.
Analiza ilościowa enzymu ALT (AlAt)
Enzym ten najczęściej występuje w podwyższonych stężeniach w ostrym i przewlekłym zapaleniu wątroby. Substancja jest zawarta w komórkach wątroby, a wraz ze zmianami narządowymi w krwiobiegu wpływa do naczyń krwionośnych.
Ilość i stężenie we krwi podczas choroby wirusowej stale się zmienia, więc badania są prowadzone co najmniej raz na kwartał. ALT odzwierciedla nie tylko aktywność wirusa zapalenia wątroby, ale także stopień upośledzenia spowodowanego przez ten wirus w wątrobie. Poziom ALT wzrasta wraz ze wzrostem ilości substancji toksycznych pochodzenia wątrobowego iw obecności wirusa.
Analiza ilościowa enzymu AST
Białko jest składnikiem najważniejszych narządów człowieka: wątroby, tkanki nerwowej, tkanki nerkowej, szkieletu i mięśni. Enzym bierze udział w budowaniu najważniejszego mięśnia - serca. Wysoka AST u pacjenta z wirusowym zapaleniem wątroby typu B może sygnalizować zwłóknienie wątroby. Podobna sytuacja ma miejsce, gdy alkohol, lek lub jakiekolwiek inne toksyczne uszkodzenie komórek wątroby.
Wskaźniki przegrzania są oznaką uszkodzenia wątroby na poziomie komórkowym. Podczas diagnozy należy wziąć pod uwagę stosunek AST i ALT (współczynnik de Rytisa). Jednoczesny wzrost stężenia obu enzymów jest oznaką martwicy wątroby.
Bilirubina
Substancja powstaje w śledzionie i wątrobie w wyniku rozpadu hemoglobiny w ich tkankach. Ten składnik jest częścią żółci. Istnieją dwie frakcje białkowe: bilirubina bezpośrednia (wiązana) i bilirubina pośrednia (wolna). Wraz ze wzrostem stężenia bilirubiny związanej z krwią sensowne jest podejrzenie zapalenia wątroby lub innych uszkodzeń wątroby. Jest to bezpośrednio związane z cytolizą komórek wątroby.
Jeśli ilość pośredniej bilirubiny wzrasta, najprawdopodobniej występuje uszkodzenie tkanki miąższowej lub zespołu Gilberta. Wysoki poziom bilirubiny zgodnie z wynikami analizy może być konsekwencją niedrożności dróg żółciowych. Gdy poziom bilirubiny jest większy niż 30 mikromoli na litr, pacjent wykazuje lodowaty odcień skóry, mocz staje się ciemny, a białka oczu zmieniają kolor.
Albumina
Synteza tego białka zachodzi w wątrobie. Jeśli jego ilość jest zmniejszona, wskazuje to na zmniejszenie syntezy enzymów w organizmie z powodu występowania poważnych uszkodzeń komórek wątroby.
Całkowite białko
Jeśli ilość białka całkowitego stanie się znacznie niższa niż przyjęta norma, oznacza to spowolnienie funkcjonowania wątroby.
GGT (GGTP)
Enzym stosowany w wykrywaniu żółtaczki obturacyjnej i zapalenia pęcherzyka żółciowego. Wzrost poziomu GGT jest sygnałem toksycznego uszkodzenia wątroby. Może być wywołany chronicznym alkoholizmem i niekontrolowanym używaniem narkotyków. Białko jest szczególnie wrażliwe na toksyny i alkohol, pod ich wpływem jego aktywność szybko rośnie. Utrzymywanie wysokiego stężenia GGT we krwi przez długi czas mówi o poważnym uszkodzeniu wątroby.
Kreatynina
Jest produktem metabolizmu białek, który występuje w wątrobie. Ostry spadek poziomu jest sygnałem, że organ zwalnia.
Frakcje białkowe
Spadek poziomu frakcji białkowych jest oznaką patologii wątroby.
Analiza dekodowania zapalenia wątroby typu B i wartości są prawidłowe
Diagnozowanie wirusowego zapalenia wątroby typu B jest zbiorczym badaniem wskaźników. Tylko ich kompleksowa analiza pozwala wyciągnąć wnioski na temat zakażenia pacjenta. Rozważmy analizę dekodowania zapalenia wątroby typu B. Dla porównania, szybkość substancji we krwi.
Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu B
Wirus DNA z rodziny Hepadnaviridae jest bezpośrednim czynnikiem sprawczym zapalenia wątroby typu B. Analiza PCR zapalenia wątroby typu B umożliwia wykrycie zakażonego wirusa DNA we krwi pacjenta. Wynik typu pozytywnego na DNA HBV pokazuje obecność infekcji we krwi pacjenta. Należy zauważyć, że diagnoza za pomocą analizy PCR pozwala nie tylko określić obecność infekcji, ale także jej ilościowe obciążenie i aktywność. Ta metoda jest niezawodna, dokładna i powtarzalna. Ilościowe oznaczenie DNA HBV za pomocą qPCR można wykorzystać do monitorowania skuteczności terapii HBV i być przydatne do zrozumienia naturalnej historii HBV w obszarze endemicznym.
Proces zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B zachodzi poprzez kontakt domowy lub seksualny - poprzez bezpośredni kontakt z zakażoną krwią. Po infekcji wirus przenika do komórek wątroby, w których kontynuuje aktywną reprodukcję. Przez krwiobieg komórki chorobotwórcze rozprzestrzeniają się po całym ciele. Warto zauważyć, że komórki zapalenia wątroby typu B są wysoce odporne na działanie kwasów i wysokiej temperatury. Jest w stanie utrzymać jego szkodliwe właściwości przez sześć miesięcy.
Rodzaje PCR dla zapalenia wątroby typu B
Do tej pory istnieją dwa rodzaje diagnostyki, które są zalecane, jeśli podejrzewasz obecność wirusa zapalenia wątroby typu B: jakościowa PCR (pozwala określić ze 100% dokładnością obecności wirusa we krwi) i ilościową PCR (pozwala określić stopień aktywności wirusa).
W przypadku podejrzenia zakażenia HBV lub jeśli inne metody diagnostyczne nie przyniosły jednoznacznych wyników, przepisuje się wysokiej jakości PCR. Ten typ analizy PCR jest niezwykle łatwy do rozszyfrowania: negatywny (nie wykryto wirusa we krwi), dodatni (wirus wykryty we krwi). Głównym zadaniem analizy jakościowej jest określenie obecności zakażonych komórek we wczesnych stadiach choroby. Jeśli wirus został zdiagnozowany dwa tygodnie po rzekomej infekcji, skuteczność leczenia będzie znacznie wyższa. Jeśli wirus we krwi wynosi około dwóch miesięcy, choroba staje się przewlekła, dlatego nie można całkowicie wyleczyć.
Jeśli diagnoza jakościowa potwierdzi obecność HBV we krwi, lekarz przepisze analizę ilościową.
Analiza ilościowa pozwala określić aktywność rozwoju wirusa w ciele pacjenta. Ten typ analizy PCR jest przypisany do:
- określić stadium choroby;
- do monitorowania skuteczności zastosowanej terapii;
- określić poziom odporności wirusa na dany lek;
- do wyboru leków.
Ilościowe wskaźniki wirusa we krwi są mierzone w IU na mililitr lub DNA na mililitr.
Jeśli lekarz zaleci natychmiastową diagnozę ilościową, bez sprawdzania jakościowego, wówczas 75 IU na mililitr uznaje się za normę. W przypadku wykrycia mniejszej liczby jednostek międzynarodowych, HBV nie jest wykrywane, gdy liczby są powyżej normy, stwierdza się obecność wirusowego zapalenia wątroby typu B.
Interpretacja diagnozy ilościowej
Następujące wskaźniki (w kopiach / mililitrach) uważa się za normę CRP w wirusowym zapaleniu wątroby typu B: mniej niż 10 3 - wirus nieaktywny; od 10 4 do 10 5 - wirus jest zazwyczaj nieaktywny; 10 6 - aktywny wirus; 10 7 - wirus na wysokim poziomie aktywności.
Na podstawie wskaźników ilościowych można określić ze 100% dokładnością formę choroby (nosiciel, ostry lub przewlekły), reakcję wirusa na leczenie, potrzebę dodatkowej diagnostyki.
Przewlekła postać zapalenia wątroby typu B jest ustalana, jeśli aktywność wirusa wynosi 10 5 kopii na mililitr. Nośnik jest diagnozowany, jeśli wyniki są poniżej 10 5 kopii na mililitr.
W okresie leczenia konieczne jest regularne (raz na trzy miesiące) powtarzanie diagnostyki ilościowej w celu uwzględnienia w czasie okresu, w którym wirus rozwija odporność na stosowane leki i zmienia metodę. Jeśli wszystkie badania zostały przeprowadzone prawidłowo i wybrano skuteczne leczenie, powtórzona analiza (po trzech dniach leczenia) pokaże spadek aktywności komórek chorobotwórczych o co najmniej osiemdziesiąt pięć procent.
Biopsja wątroby jest wykonywana tylko w przypadku, gdy sześć miesięcy leczenia wykazało, że poziomy ALT są dwa razy wyższe niż normalnie, a diagnostyka PCR wykazuje częstości niższe niż 105 kopii na mililitr krwi.
Przygotowanie do ankiety
Do analizy wymagana jest krew żylna. Aby uzyskać jak najdokładniejsze wyniki, konieczne jest przygotowanie się do procedury: odmów jedzenia co najmniej 8 godzin przed pobraniem krwi; przez dwa dni odmówić leczenia lekami (konieczne jest ostrzeżenie lekarza o zażywaniu narkotyków); przed oddaniem krwi musisz spędzić dwadzieścia minut w trybie odpoczynku; Dwanaście godzin przed zabiegiem zrezygnuj z ćwiczeń sportowych, napojów alkoholowych, palenia i jedzenia tłustych potraw.
Ważne jest: jeśli diagnoza jest konieczna dla dziecka poniżej piątego miesiąca życia, musi podawać szklankę przegotowanej wody co dziesięć minut sześćdziesiąt minut przed procedurą pobierania krwi.
Podsumowując
Analiza PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu B jest dziś najdokładniejszą metodą diagnozowania wirusa. Metoda pozwala określić zmutowane i ukryte formy choroby, aby zdiagnozować chorobę w pierwszych dniach infekcji, a zatem wybrać najskuteczniejsze leczenie. Asystent laboratoryjny porównuje wyniki analizy z normą, a następnie doprowadza je do konkluzji. Dane są przetwarzane w ciągu dwóch tygodni. Aby uzyskać skierowanie na analizę PCR, należy skontaktować się z hepatologiem, specjalistą od chorób zakaźnych lub wirusologiem. Ważne jest, aby pamiętać, że im szybciej dotrzesz do lekarza, tym szybciej uzyskasz wyniki, tym skuteczniejsze będzie leczenie.
Istota analizy PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu B i jego wyników
Wirusowe zapalenie wątroby typu B jest skutecznie leczone, jeśli zostanie wykryte na czas, a liczba przeciwciał i antygenów we krwi pacjenta jest prawidłowo określona. Za pomocą testu immunoenzymatycznego na zapalenie wątroby można wykryć obecność markerów wirusowych, ale nie można określić dokładnego etapu procesu.
Do oceny ilościowej użyto diagnostyki PCR. Za pomocą testu można policzyć liczbę markerów, przewidzieć przebieg choroby i prawdopodobieństwo wyleczenia za pomocą leków przeciwwirusowych.
Główną zaletą badania jest możliwość wykrycia nawet minimalnych stężeń wirusa, aby zidentyfikować patogen na etapie gatunku.
Diagnoza zapalenia wątroby typu B
Wirus zapalenia wątroby typu B jest wysoce zaraźliwy i odporny na wpływy zewnętrzne. Pozostaje aktywny we krwi pacjenta przez kilka tygodni. Dlatego każda osoba jest narażona na zakażenie, nawet jeśli obserwuje się profilaktykę.
Aby zdiagnozować chorobę, przepisz następujące badania:
Istota metody PCR
Amerykański chemik K.Mullis otrzymał Nagrodę Nobla, a jego metoda diagnostyczna jest nadal stosowana.
Przodek metody PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) uważany jest za naukowca z Norwegii H. Kleppe. Najpierw zaczął przeprowadzać amplifikację (odzyskiwanie) DNA za pomocą krótkiego łańcucha DNA, czyli syntetycznego startera (rodzaj kopii).
Jednak naukowiec nie zrealizował swojego pomysłu. Podobne badania przeprowadził amerykański chemik K.Mullis, który w 1993 r. Otrzymał Nagrodę Nobla za swój wynalazek. Od tego czasu PCR wykorzystano do ustalenia ojcostwa, diagnozowania chorób genetycznych i wykrywania wirusów.
Istotą reakcji jest to, że za pomocą enzymów kopiowany jest pewien fragment DNA. Możesz skopiować tylko obszar, który odpowiada określonym parametrom i jeśli jest w prezentowanej próbce. Następujące składniki są używane do rozpoczęcia reakcji:
- Matrycowy DNA z miejscem do skopiowania.
- Startery o podobnej strukturze do DNA.
- Polimeraza, czyli enzym, który wyzwala reakcję. Powinno być termostabilne, to znaczy wytrzymywać ekstremalne temperatury.
- Rozwiązanie o określonych parametrach, zapewniające przejście reakcji.
Reakcja przebiega w kilku etapach:
Do wykrywania wirusowego zapalenia wątroby typu B stosuje się dwa rodzaje reakcji: ilościową i jakościową.
Ilościowa PCR
Metoda ilościowa określa ilość genomu HBV
Ilościowa PCR obejmuje równoczesne tworzenie kopii fragmentów DNA i określenie liczby cząsteczek. Pomiar jest przeprowadzany po każdym etapie, czyli w czasie rzeczywistym. Osiąga się to za pomocą sond fluorescencyjnych, które są zawarte w łańcuchu cząsteczek i świecą w pewnym okresie badania.
Ta metoda służy do wykrywania fragmentów DNA, które są markerami wirusa zapalenia wątroby. Korzystając z metody ilościowej, można dokładnie wyizolować genotyp wirusa. Innymi słowy, oblicza się liczbę kopii genomu HBV na liczbę komórek pacjenta.
Analiza ilościowa dostarcza odpowiedzi na następujące pytania:
- Z jaką intensywnością postępuje choroba.
- Jak skuteczne jest leczenie.
- Czy rozwinęła się oporność na leki?
Również pomiar ilościowy jest konieczny do rozpoznania przewlekłego stadium zakażenia. Jeśli ilość DNA jest niższa niż 100 sztuk / ml przy normalnym poziomie transaminazy, osoba ta jest nosicielem wirusa.
W fazie ostrej ilość przeciwciał jest znacznie większa: w terapii przeciwwirusowej wzrost liczby przeciwciał wskazuje na rozwój oporności na leki, jest to sygnał do dostosowania leczenia.
Wysokiej jakości PCR
Wysokiej jakości PCR daje mniej informacji, ale może wyeliminować infekcję.
Wysokiej jakości PCR może tylko ustalić obecność patogenu we krwi. Jeśli są nieobecne, pacjent nie jest zakażony, jeśli patogen dostanie się do krwi, wynik będzie pozytywny.
Jednak z pomocą reakcji jakościowej nie jest możliwe wyjaśnienie genomu wirusa, stadium choroby. Dlatego w diagnostyce HBV przeprowadzono zarówno pomiar ilościowy, jak i jakościowy.
Przygotowanie do ankiety
Do analizy PCR wymagana jest krew żylna. Należy to zrobić rano na czczo.
Pacjent powinien właściwie przygotować się do badania:
- Przez 10 godzin, aby odmówić jedzenia, możesz pić tylko czystą wodę.
- W przeddzień przerwania przyjmowania alkoholu przez 4 godziny nie palić.
- Przed badaniem należy unikać stresu fizycznego i emocjonalnego.
- Przestań stosować leki przez 2 dni, jeśli nie jest to możliwe, należy powiadomić technika laboratoryjnego. Niektóre leki mają wpływ na wynik końcowy.
Interpretacja danych
W reakcji ilościowej uzyskane wskaźniki są oceniane w zależności od liczby kopii DNA.
Łatwo jest interpretować dane pomiaru jakości. Daje odpowiedź pozytywną lub negatywną.
W reakcji ilościowej można ocenić uzyskane wskaźniki w zależności od liczby kopii DNA. Jednostką miary są kopie / ml.
Dane są dekodowane w następujący sposób:
- Jeśli ilość DNA HBV jest mniejsza niż 90, infekcja jest nieobecna. Pacjent rozwinął odporność poszczepienną lub został wyleczony z choroby.
- Gdy liczba kopii 2x100 mówi o nosicielu wirusa.
- Liczba 2x106 wskazuje na przewlekły stan choroby.
- Z DNA większym niż 2x109, pacjent ma ostry etap zapalenia wątroby.
Błędne wyniki
Zalety metody diagnostycznej wykorzystującej reakcje polimerazy są następujące:
- Bezpośrednie wykrywanie patogenów. W przeciwieństwie do tego ELISA dostarcza informacji o obecności przeciwciał przeciwko wirusowi.
- Specyfika. Oznacza to, że region DNA jest obecny w próbce biomateriału, która jest kopiowana.
- Nadwrażliwość. Metoda może nawet wykryć pojedyncze fragmenty komórek.
- Diagnoza chorób w stadiach ostrych i utajonych. Oznacza to, że możliwe jest zdiagnozowanie choroby na etapie przedklinicznych objawów.
Metoda ma wady, które prowadzą do fałszywych wyników. Najważniejszą wadą jest prawdopodobieństwo zanieczyszczenia materiału. Głównym źródłem zanieczyszczeń są źle przetworzone probówki, ręce laboratoryjne, odczynniki.
Część DNA z poprzedniej reakcji może dostać się do krwi. Dlatego na laboratoria nakładane są zwiększone wymagania sanitarne: oddzielne pomieszczenia, rury z tworzyw sztucznych, ultrafioletowe traktowanie laboratoriów itp.
Fałszywie negatywne wyniki mogą wynikać ze zmniejszonej wrażliwości reakcji. Dzieje się tak w następujących sytuacjach:
- pacjent przyjmuje leki, na przykład antykoagulanty;
- osoba cierpiała na stres fizyczny przed analizą (uprawianie sportu, ciężka praca);
- infekcja wystąpiła niedawno.
Jeśli pacjent ma wysokie prawdopodobieństwo zakażenia, a wynik badania jest negatywny, należy go ponownie zbadać.
Zobacz także:
Wniosek
Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy jest głównym i najbardziej pouczającym dla diagnozy HBV. Umożliwia nie tylko ustalenie statusu zakażenia, ale także wyjaśnienie stadium choroby, ocenę wyników leczenia.
W celu dokładniejszej diagnozy stosuje się pomiar jakościowy i ilościowy. Wady tej metody obejmują prawdopodobieństwo zanieczyszczenia, zmniejszoną czułość i raczej wysoką cenę.
Aby wyniki były jak najbardziej wiarygodne, należy odpowiednio przygotować się do badania i przeprowadzić je w klinice z odpowiednią licencją i dobrą reputacją.
Badania nad wirusem zapalenia wątroby typu B (ELISA i PCR)
Antygen „s” wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg)
Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B w surowicy zwykle nie występuje.
Wykrycie antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg) w surowicy potwierdza ostre lub przewlekłe zakażenie wirusem zapalenia wątroby typu B.
W ostrej chorobie HBsAg wykrywa się w surowicy w ciągu ostatnich 1-2 tygodni okresu inkubacji i pierwszych 2-3 tygodni okresu klinicznego. Krążenie HBsAg we krwi może być ograniczone do kilku dni, dlatego należy dążyć do wczesnego wstępnego badania pacjentów. Metoda ELISA pozwala wykryć HBsAg u ponad 90% pacjentów. Prawie u 5% pacjentów najbardziej czułe metody badawcze nie wykrywają HBsAg, w takich przypadkach etiologię wirusowego zapalenia wątroby typu B potwierdza obecność antygenu HBcAg JgM lub PCR.
Stężenie HBsAg w surowicy we wszystkich postaciach ciężkości zapalenia wątroby typu B na wysokości choroby ma znaczny zakres wahań, jednak istnieje pewien wzorzec: w okresie ostrym występuje odwrotna zależność między stężeniem HBsAg w surowicy a ciężkością choroby.
Wysokie stężenia HBsAg występują częściej w łagodnych i umiarkowanych postaciach choroby. W ciężkich i złośliwych postaciach stężenie HBsAg we krwi jest często niskie, a u 20% pacjentów z ciężką postacią i 30% ze złośliwym antygenem we krwi może nie być w ogóle wykrywane. Pojawienie się na tym tle u pacjentów z przeciwciałami przeciwko HBsAg jest uważane za niekorzystny znak diagnostyczny; określa się ją w złośliwych postaciach zapalenia wątroby typu B.
W ostrym przebiegu wirusowego zapalenia wątroby typu B stężenie HBsAg we krwi stopniowo zmniejsza się aż do całkowitego zaniku tego antygenu. HBsAg znika u większości pacjentów w ciągu 3 miesięcy od wystąpienia ostrej infekcji.
Zmniejszenie stężenia HBsAg o ponad 50% do końca trzeciego tygodnia ostrego okresu, co do zasady, wskazuje na zakończenie procesu infekcji. Zwykle u pacjentów z wysokim stężeniem HBsAg na wysokości choroby, jest wykrywany we krwi przez kilka miesięcy.
U pacjentów z niskim stężeniem HBsAg zanika znacznie wcześniej (czasami kilka dni po wystąpieniu choroby). Ogólnie czas wykrywania HBsAg wynosi od kilku dni do 4-5 miesięcy. Maksymalny okres wykrywania HBsAg przy łagodnym przebiegu ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B nie przekracza 6 miesięcy od początku choroby.
HBsAg można znaleźć u ludzi zdrowych, co do zasady, w badaniach profilaktycznych lub przypadkowych. W takich przypadkach bada się inne markery wirusowego zapalenia wątroby typu B, anty-HBcAg JgM, anty-HBcAg JgG, anty-HBeAg i bada się czynność wątroby.
W przypadku wyników negatywnych konieczne są powtarzane badania HBsAg.
Jeśli powtarzane badania krwi przez ponad 3 miesiące ujawnią HBsAg, pacjent ten jest klasyfikowany jako przewlekły pacjent z wirusowym zapaleniem wątroby typu B.
Obecność HBsAg jest dość powszechna. Na świecie jest ponad 300 milionów przewoźników, aw naszym kraju jest około 10 milionów przewoźników.
Zakończenie krążenia HBsAg z następującą potem serokonwersją (tworzenie anty-HBs) zawsze wskazuje na wyzdrowienie - sanację ciała.
Badanie krwi na obecność HBsAg stosuje się w następujących celach:
- okres inkubacji;
- ostra choroba;
- wczesne wyleczenie;
- przewlekłe przewlekłe zapalenie wątroby;
- marskość wątroby;
do badań przesiewowych i identyfikacji pacjentów w grupach ryzyka:
Ocena wyników badań
Wyniki badania są wyrażone jakościowo - pozytywne lub negatywne. Wynik negatywny wskazuje na brak HBsAg w surowicy. Wynik pozytywny - identyfikacja HBsAg wskazuje na inkubację lub ostry okres ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B, a także na przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B.
Przeciwciała przeciwko jądrowemu antygenowi wirusa zapalenia wątroby typu B JgG (anty-HBcAg JgG)
Zwykle w surowicy nie ma przeciwciał anty-HBcAg.
U pacjentów z anty-HBcAg JgG pojawia się w ostrym okresie wirusowego zapalenia wątroby typu B i utrzymuje się przez całe życie. Anty-HBcAg JgG jest wiodącym markerem przenoszonego HBV.
Testy krwi na anty-HBcAg JgG są wykorzystywane do diagnozowania:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Negatywny wynik wskazuje na brak surowicy anty-HBcAg JgG. Wynik pozytywny - identyfikacja JgG anty-HBcAg wskazuje na ostrą infekcję, rekonwalescencję lub wcześniej przeniesione wirusowe zapalenie wątroby B.
Antygen „e” wirusa zapalenia wątroby typu B (HBeAg)
Zwykle nie ma HBeAg w surowicy.
HBeAg można znaleźć w surowicy większości pacjentów z ostrym wirusowym zapaleniem wątroby typu B. Zwykle znika we krwi przed antygenem HBs. Wysoki poziom HBeAg w pierwszych tygodniach choroby lub jej wykrycie przez ponad 8 tygodni daje powód do podejrzenia przewlekłego zakażenia.
Antygen ten jest często wykrywany w przewlekłym aktywnym zapaleniu wątroby o etiologii wirusowej. Szczególnie interesujące w definicji HBeAg jest fakt, że jego wykrywanie charakteryzuje aktywną fazę replikacyjną procesu zakaźnego. Ustalono, że wysokie stężenia HBeAg odpowiadają wysokiej aktywności polimerazy DNA i charakteryzują aktywną replikację wirusa.
Obecność HBeAg we krwi wskazuje na jego wysoką zakaźność, tj. obecność aktywnego zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B w badanym ciele i jest wykrywana tylko w obecności antygenu HBs we krwi. U pacjentów z przewlekłym czynnym zapaleniem wątroby leki przeciwwirusowe stosuje się tylko wtedy, gdy we krwi wykryto HBeAg. HBeAg - antygen - marker ostrej fazy i replikacji wirusa zapalenia wątroby typu B.
Do diagnozy stosuje się badanie krwi na obecność antygenu HBe:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Negatywny wynik wskazuje na brak HBeAg w surowicy. Wynik pozytywny - wykrycie HBeAg wskazuje na inkubację lub ostry okres ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B lub ciągłą replikację wirusa i zakaźność pacjenta.
Przeciwciała na antygen „e” wirusa zapalenia wątroby typu B (anty-HBeAg)
Anty-HBeAg w surowicy zwykle nie występuje. Pojawienie się przeciwciał anty-HBeAg zazwyczaj wskazuje na intensywne usunięcie z organizmu wirusa zapalenia wątroby typu B i niewielkie zakażenie pacjenta.
Przeciwciała te pojawiają się w okresie ostrym i utrzymują się do 5 lat po zakażeniu. W przewlekłym przewlekłym zapaleniu wątroby anty-HBeAg znajduje się we krwi pacjenta wraz z HBsAg. Serokonwersja, tj. przejście HBeAg na anty-HBeAg, z przewlekłym aktywnym zapaleniem wątroby, częściej korzystne pod względem prognostycznym, ale ta sama serokonwersja nie poprawia rokowania ciężkiej marskości wątroby.
Badania krwi na obecność anty-HBeAg są stosowane w następujących przypadkach w diagnostyce wirusowego zapalenia wątroby typu B:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Wynik negatywny wskazuje na brak przeciwciał przeciwko HBeAg w surowicy. Pozytywnym wynikiem jest wykrycie przeciwciał przeciwko HBeAg, które mogą wskazywać na początkowy etap ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B, ostry okres zakażenia, wczesny etap rekonwalescencji, rekonwalescencję, niedawno przeniesione wirusowe zapalenie wątroby typu B lub uporczywe wirusowe zapalenie wątroby typu B.
Kryteriami obecności przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu B są:
Wykrywanie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR (jakościowo)
Wirus zapalenia wątroby typu B we krwi zwykle nie występuje.
Jakościowe oznaczenie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR we krwi pozwala potwierdzić obecność wirusa w ciele pacjenta i tym samym ustalić etiologię choroby.
Badanie to dostarcza użytecznych informacji do diagnozy ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B w inkubacji i wczesnych stadiach rozwoju choroby, gdy główne markery serologiczne pacjenta we krwi mogą być nieobecne. DNA wirusa w surowicy wykrywa się u 50% pacjentów przy braku HBeAg. Czułość analityczna metody PCR wynosi nie mniej niż 80 cząstek wirusowych w 5 μl, ostatnia próbka do wykrywania DNA, swoistość - 98%.
Ta metoda jest ważna dla diagnozowania i monitorowania przebiegu przewlekłego HBV. Około 5-10% przypadków marskości wątroby i innych przewlekłych chorób wątroby jest spowodowanych przewlekłym nosicielem wirusa zapalenia wątroby typu B. Markerami aktywności takich chorób są obecność HBeAg i DNA wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi.
Metoda PCR umożliwia oznaczenie we krwi DNA wirusa zapalenia wątroby typu B zarówno pod względem jakościowym, jak i ilościowym. Określony fragment w obu przypadkach jest unikalną sekwencją DNA genu białka strukturalnego wirusa zapalenia wątroby typu B.
Wykrywanie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B w biomateriałach za pomocą PCR jest konieczne dla:
Zniknięcie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B z krwi jest oznaką skuteczności terapii
Wykrywanie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR (ilościowe)
Ta metoda dostarcza ważnych informacji o intensywności rozwoju choroby, skuteczności leczenia i rozwoju oporności na aktywne leki.
Do diagnozy wirusowego zapalenia wątroby metodą PCR w surowicy stosuje się systemy testowe, których czułość wynosi 50-100 kopii w próbce, co umożliwia wykrycie wirusa w stężeniu 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopii / ml. PCR w wirusowym zapaleniu wątroby typu B jest zdecydowanie niezbędny do oceny replikacji wirusa.
DNA wirusa w surowicy wykrywa się u 50% pacjentów przy braku HBeAg. Surowica krwi, limfocyty i hepatobiopsja mogą służyć jako materiał do wykrywania DNA wirusa zapalenia wątroby typu B.
- Ocena poziomu wiremii jest następująca:
- mniej niż 2,10 ^ 5 kopii / ml (mniej niż 2,10 ^ 5 IU / ml) - niska wiremia;
- od 2,10 ^ 5 kopii / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) do 2,10 ^ 6 kopii / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - średnia wiremia;
- ponad 2,10 ^ 6 kopii / ml - wysoka wiremia.
Istnieje związek między wynikiem ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B a stężeniem DNA HBV we krwi pacjenta. Przy niskim poziomie wiremii proces chronizacji infekcji jest bliski zeru, przy średniej, proces jest chroniczny u 25-30% pacjentów, a przy wysokim poziomie wiremii, ostre wirusowe zapalenie wątroby typu B najczęściej staje się przewlekłe.
Wskazania do leczenia przewlekłego interferonu-alfa HBV należy uznać za obecność markerów aktywnej replikacji wirusa (wykrywanie HBV HBV, HBeAg i DNA HBV w surowicy krwi w ciągu ostatnich 6 miesięcy).
Kryteriami oceny skuteczności leczenia jest zanik HBEAg i DNA HBV we krwi, któremu zwykle towarzyszy normalizacja poziomów transaminaz i długotrwała remisja choroby, DNA HBV znika z krwi do 5 miesiąca leczenia u 80% pacjentów. Zmniejszenie poziomu wiremii o 85% lub więcej w trzecim dniu od rozpoczęcia leczenia w porównaniu z wartością wyjściową jest szybkim i dość dokładnym kryterium przewidywania skuteczności terapii.