Wraz z wprowadzeniem nowoczesnych technologii w medycynie rosną możliwości immunochemicznych metod diagnostycznych, które są w stanie szybko i dokładnie rozpoznać chorobę, gdy inne metody są bezsilne. Zrozumienie, że wirus zapalenia wątroby typu B jest zdolny do przebywania w organizmie w bardzo niskim stężeniu, w którym nie można go wykryć nawet dzięki tak wiarygodnej metodzie jak PCR, wymaga świeżego spojrzenia na problem diagnozowania tej choroby i docenienia możliwości testu immunologicznego.
W tym materiale przeanalizujemy szczegółowo wszystko, co dotyczy tego typu badań laboratoryjnych. Dowiesz się, czym jest test immunoenzymatyczny i jak się go wykonuje, czym jest antygen australijski i jak się go określa, jakie są niezrozumiałe skróty Hbs ag, Hbcor i ich rola w odszyfrowaniu analizy, a także wiele przydatnych i interesujących informacji.
Treść artykułu:
Ogólne informacje o ELISA
ELISA (skrócona ELISA) jest laboratoryjną metodą diagnostyczną, która może wykryć zarówno antygeny, jak i przeciwciała z szerokiej gamy infekcji, w tym wirusowego zapalenia wątroby typu B. Aktualna wiedza o właściwościach wirusa i właściwościach odpowiedzi immunologicznej organizmu, pozwala nie tylko wykryć infekcję, ale także ją zidentyfikować etap, skuteczność szczepienia i ocenić skuteczność leczenia.
Istota enzymatycznego testu immunologicznego
Test ELISA opiera się na reakcji „antygen-przeciwciało”, a raczej na jego właściwościach.
W odpowiedzi na inwazję obcych substancji (antygenów), które w szczególności są białkami wirusa, organizm wytwarza białka ochronne - przeciwciała. Przeciwciała wchodzą w złożoną reakcję z antygenem, blokując jego aktywność.
Omówimy więcej o antygenach i przeciwciałach poniżej, ale teraz zauważymy, że dla każdego antygenu istnieją ściśle indywidualne, lub jak mówią lekarze, przeciwciała homologiczne. Tak więc, jeśli chcemy wykryć specyficzny antygen we krwi, użyjemy tabletki diagnostycznej z przeciwciałami. Jeśli we krwi znajduje się antygen, reaguje on z przeciwciałami, które można wykryć na różne sposoby. I odwrotnie. Jeśli chcemy znaleźć jakiekolwiek przeciwciała, potrzebujemy tabletki z odpowiednim antygenem.
Najczęściej wartość diagnostyczna ponosi tylko przeciwciała, dzięki którym można zdiagnozować niemal każdą infekcję. Specyfiką wirusa zapalenia wątroby typu B jest jednak to, że główną rolę w diagnozie odgrywa jeden z antygenów - australijski antygen.
Jak działa IFA
Rozważ typową procedurę ELISA dla konkretnego przykładu, gdy chcesz zidentyfikować przeciwciała przeciwko patogenowi.
Do diagnostyki stosuje się tabletkę z 96 dołkami, które są wstępnie nasycone odpowiednim antygenem. Ponadto procedura jest następująca:
surowica jest stosowana do wszystkich komórek;
homologiczne przeciwciała reagują z antygenem i przyłączają się do płytki;
tabletka myta, usuwanie niezwiązanych przeciwciał;
następnie do komórek wprowadzana jest etykieta enzymatyczna - substancja, która reaguje z przeciwciałami i powoduje zabarwienie zawartości komórki.
Jest to standardowa procedura ELISA z barwieniem, która jest stosowana, na przykład, w immunochromatograficznych paskach testowych.
ELISA nie ogranicza się do jakościowego oznaczania przeciwciał lub antygenów patogenu. Im więcej przeciwciał jest zawartych w komórkach tabletki, tym bardziej intensywny jest barwiony roztwór. Porównując gęstość optyczną z kontrolą, nowoczesny sprzęt może dość dokładnie obliczyć stężenie przeciwciał na jednostkę objętości. Zatem przeprowadza się ilościowy test ELISA, miarą pomiaru, przy której najczęściej są jednostki gęstości optycznej (EOP).
Analiza immunochemiluminescencyjna
Dzisiaj istnieje kilkadziesiąt typów ELISA, z których każdy ma preferowany zakres. Najpopularniejszą w diagnostyce zapalenia wątroby typu B jest analiza immunochemiluminescencyjna.
Etykieta enzymatyczna dla tej analizy nie jest chromatyną, jak w standardowym teście ELISA, ale specjalnymi substancjami - luminoforami, które powodują, że kompleks świeci w świetle ultrafioletowym.
Za pomocą specjalnego urządzenia - luminometru, można dokładnie określić poziom emisji iw konsekwencji stężenie pożądanej substancji.
Stosowanie metod ELISA określa prawie wszystkie istniejące antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B i przeciwciała na nie.
Antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B: Hbs, Hbe i Hbc
Termin antygen (antygen) pochodzi od dwóch angielskich słów: przeciwciało - przeciwciało i generator - producent. Tak więc pod antygenem rozumie się każdą substancję, która powoduje powstawanie przeciwciał w organizmie. Najczęstszymi antygenami są związki białkowe.
Obecnie znane są trzy antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B: hbsag, hbc i hbe.
Australijski antygen
Białko, które jest częścią zewnętrznej powłoki patogennego zapalenia wątroby typu B, wykryto na długo przed odkryciem samego wirusa. Antygen ten otrzymał swoją nazwę, ponieważ po raz pierwszy został zidentyfikowany przez rdzennych mieszkańców Australii. Jednak początkowo białko nie było uważane za antygen, ale całkowicie normalny element krwi wśród tubylców, a świadomość jego związku z chorobami wątroby pojawiła się nieco później.
Długotrwałe zachowanie antygenu we krwi i brak przeciwciał wskazuje na możliwość powstania przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu B HBeAg
Dzisiaj w literaturze fachowej nazwa „antygen australijski” praktycznie nie występuje i została zastąpiona przez międzynarodowy skrót - HbsAg (antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu b - antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B). Ponadto można znaleźć skróty hbs antygen lub tylko hbs. Każdy z tych skrótów jest akceptowalny i może zostać uzupełniony poprzez rejestrację HBV lub HBV - wirusa zapalenia wątroby typu B (wirus zapalenia wątroby typu B).
Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B ma jedną niezwykłą cechę, która czyni go niezastąpionym markerem diagnostycznym - jego stężenie we krwi może osiągnąć bardzo wysoki poziom, do pół miligrama na mililitr krwi. Dzieje się tak dlatego, że tylko niewielka część nowych HBsAg, które powstają podczas reprodukcji wirusa zapalenia wątroby typu B, przechodzi do budowy błon nowych cząstek wirusowych, a reszta - swobodnie krąży we krwi. W rezultacie liczba cząstek hbs we krwi może przekroczyć liczbę wirionów setki tysięcy razy.
Ta cecha czyni australijski antygen głównym markerem w diagnostyce przesiewowej wirusowego zapalenia wątroby typu B, która znajduje się we krwi już 4-6 tygodni po zakażeniu. Gdy tworzą się przeciwciała, antygen powierzchniowy jest stopniowo zastępowany przez nie. Jeśli po 6 miesiącach HBsAg utrzymuje się, oznacza to przejście zakażenia do postaci przewlekłej.
Ostatnio, kiedy stało się możliwe określenie stężenia hbs hbv, jego rola w diagnostyce wzrosła jeszcze bardziej, ponieważ poleganie na poziomie antygenu może odróżnić przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B (HBV) od stanu zdrowego nosiciela, a także monitorować skuteczność leczenia.
Antygeny rdzeniowe
W rdzeniu wirusa - nukleokapsydu - znajdują się białka kontrolujące rozmnażanie wirusa HBcoreAg i HBeAg.
HBcoreAg, który może być również nazywany antygenem HBCore, hbc lub antygenem rdzeniowym, można znaleźć tylko w tkankach wątroby, bezpośrednio w jądrach hepatocytów. Antygen ten nie jest wykrywany we krwi i nie ma wartości diagnostycznej.
Struktura wirusa zapalenia wątroby
HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - przeciwnie, odgrywa ważną rolę w diagnozie. HBeAg i HBcoreAg są bliskimi krewnymi. Mają duże podobieństwo struktury i różnią się głównie przestrzennym położeniem cząsteczek. W przeciwieństwie do HBcore, HBe nie jest częścią ściany nukleokapsydu i krąży swobodnie we krwi.
Rola HBe w procesie zakaźnym nie jest wystarczająco jasna, jednak cechy jej zachowania i ich związek z przebiegiem procesu zakaźnego zostały już wystarczająco zbadane. HBeAg wskazuje na aktywną reprodukcję wirusa i pozwala na wiarygodne określenie fazy przewlekłej CHB - HBeAg-dodatniej lub HBeAg-ujemnej.
HBe można wykryć we krwi już w okresie inkubacji ostrego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV), podczas gdy wysokie stężenie HBeAg przez 3 tygodnie najprawdopodobniej wskazuje na zagrożenie przewlekłym procesem. Stężenie HBe jest bezpośrednio związane z zawartością cząstek Dane (tak zwane cząsteczki wirusa zapalenia wątroby typu B) - im wyższa ilość HBe, tym wyższe stężenie DNA HBV we krwi.
HBeAg jest głównym markerem zakaźności choroby. Krew pacjentów z dodatnim mianem HBeAg jest znacznie bardziej zaraźliwa niż HBeAg-ujemna. Na przykład u kobiet ciężarnych z dodatnim wynikiem oznaczenia HBe i Hbs prawdopodobieństwo przeniesienia zakażenia na dziecko osiąga 50%, podczas gdy prawdopodobieństwo wystąpienia takiego zdarzenia w HBe-ujemnym, ale Hbs pozytywnych matek wynosi 10-30%.
Hbe określa przebieg przewlekłego zapalenia wątroby. HBeAg-dodatnie przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B ma znacznie gorsze rokowanie pod względem rozwoju marskości wątroby.
To prawdopodobnie wszystko, co musisz wiedzieć o antygenach HBV i przechodzimy do drugiej grupy markerów zapalenia wątroby typu B - przeciwciał.
Metoda ELISA do wykrywania zapalenia wątroby
Współczesna medycyna jest znana z wielu chorób wątroby. HCV (wirusowe zapalenie wątroby typu C) jest jednym z najczęstszych i najbardziej niebezpiecznych, ponieważ ta infekcja często rozwija się bezobjawowo i prowadzi do krytycznych komplikacji, nawet śmierci. Dlatego właśnie najwcześniejsza diagnoza choroby, przeprowadzana przy użyciu różnych metod, w tym testu immunoenzymatycznego (ELISA) w celu wykrycia przeciwciał przeciwko wirusowi we krwi, ma ogromne znaczenie.
Oświadczenie o zakażeniu HCV w diagnostyce zapalenia wątroby
W diagnostyce laboratoryjnej wykrywania wirusowego zapalenia wątroby typu C (zakażenie HCV) stosuje się dwa rodzaje metod:
- Serologiczny, oparty na wykrywaniu przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (anty-HCV), zwany także ELISA (test immunoenzymatyczny). Jego celem jest wykrycie anty-HCV (markerów IgM i IgG) stosowanych do badań przesiewowych i diagnozowania zapalenia wątroby typu C. Oba te markery można wykryć we krwi (osoczu) w różnych kombinacjach, co wymaga odpowiedniej interpretacji klinicznej. Aby potwierdzić obecność anty-HCV, wykonuje się test RIBA (immunoblot rekombinacyjny).
- Biologiczne molekularne, mające na celu wykrycie wirusa RNA. Test HCV RNA jest zalecany dla następujących kategorii pacjentów:
- ze zidentyfikowanym anty-HCV;
- bez wykrytego anty-HCV, ale z ustalonymi danymi epidemiologicznymi i klinicznymi wymagającymi wykluczenia ostrej postaci HCV.
RNA wirusa można wykryć we krwi już 14 dni po zakażeniu, to znaczy przed pojawieniem się anty-HCV, które występuje w ciągu pierwszych 2-3 miesięcy.
W celu ostatecznego potwierdzenia diagnozy (zwłaszcza gdy wykryto tylko jeden z dwóch markerów zakażenia HCV), eksperci zalecają, aby po pewnym czasie powtórzyć testy anty-HCV i HCV RNA.
Wykrywanie zapalenia wątroby za pomocą testu ELISA
W celu wczesnego rozpoznania wirusowego zapalenia wątroby, zwłaszcza bezobjawowego, w postaci anicteric, w surowicy, wykrywa się obecność białek wirusowych (antygenów) lub przeciwciał przeciwko nim (wytwarzanych przez układ odpornościowy, gdy wirusy przedostają się do organizmu) za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Jest to uniwersalna metoda diagnozy immunologicznej, jej istota polega na badaniu interakcji „przeciwciała antygenowego”. Jest szeroko stosowany w wielu krajach świata.
Oznaczenie zapalenia wątroby metodą ELISA pozwala nie tylko ustalić dokładną diagnozę, ale także ocenić charakter choroby, a także wybrać kompetentne i skuteczne leczenie przy użyciu tradycyjnych leków (interferon, rybawiryna), leków o działaniu bezpośrednim (Sofosbuwir, Daklataswir) i ich leków generycznych produkcji indyjskiej i chińskiej.
W miarę możliwości diagnoza wirusowego zapalenia wątroby za pomocą testu ELISA jest uzupełniana przez PCR (reakcję łańcuchową polimerazy), która pozwala określić obecność wirusów zapalenia wątroby w RNA.
Jak dokładna jest metoda immunoenzymatyczna
Według szacunków ekspertów dokładność metody ELISA wynosi 95%, to znaczy u 95 na 100 pacjentów stosujących immunooznaczenie enzymatyczne, obecność i ilość przeciwciał HCV - IgM i IgG można wykryć we krwi. Jeśli wynik jest pozytywny, możliwe jest zdiagnozowanie kontaktu HCV z ciałem (nie samego wirusa, a mianowicie obecności przeciwciał we krwi, które mogą być wynikiem już przeniesionej choroby).
Jednak pomimo wysokiej czułości testu immunoenzymatycznego (ELISA), u 40% pacjentów z wynikiem dodatnim wirus może nie zostać wykryty, co wskazuje na wątpliwy lub fałszywie dodatni wynik.
Aby potwierdzić poprawność wyników testu ELISA, stosuje się metodę RIBA (immunoblotting rekombinacyjny) w celu dokładniejszego badania wykrywania przeciwciał przeciwko HCV.
Podstawowy test Anti NCV
Skuteczne badania w celu określenia obecności przeciwciał przeciwko wirusom zapalenia wątroby obejmują rdzeń anty-HCV, który jest stosowany jako test potwierdzający, gdy uzyskuje się „niepewne” wyniki.
Jeśli rdzeń anty-HCV zostanie wykryty w surowicy w rozcieńczeniu 1: 1000, prawdopodobnie zostanie zdiagnozowany wynik dodatni, to znaczy choroba jest obecna.
Jeśli próbki o rozcieńczeniu 1: 1000 są ujemne, przy rozcieńczeniu 1: 200 są dodatnie, potrzebne są badania na obecność wirusowego RNA. W tym przypadku najprawdopodobniej nie ma zakażenia HCV.
Ważne jest, aby zrozumieć, że w przewlekłych postaciach HCV przeciwciała są stale wykrywane, a podczas eliminacji (usuwania z komórek organizmu) wirusa utrzymują się przez 4–8 lat lub dłużej. Dlatego obecność anty-HCV nie zawsze wskazuje na infekcję organizmu i nie pozwala na obiektywne wnioski na temat aktywności procesu Aby uzyskać dokładne dane dotyczące miana wirusa, stopnia uszkodzenia wątroby, czasu trwania zakażenia i różnicy między ostrymi i przewlekłymi postaciami choroby, zaleca się stosowanie definicji spektrum przeciwciał dla różnych HCV peptydy. Ważne jest również, aby obserwować ich dynamikę ilościową i jakościową.
ELISA na zapalenie wątroby typu C
EIA wirusowe zapalenie wątroby typu C określa skutecznie, jest to jedna z metod diagnozowania choroby, oparta na interakcji antygenów i przeciwciał. Reakcja immunochemiczna metodą ELISA (test immunoenzymatyczny) pozwala na wykrycie przeciwciał anty-HCV w organizmie. Metoda pozwala na zróżnicowane diagnozowanie zapalenia wątroby typu C u ludzi, określenie stadium rozwoju choroby, przewidywanie jej przebiegu. Identyfikacja specyficznych markerów serologicznych pozwala również wybrać skuteczne leczenie przeciwwirusowe patologii.
Cechy metody
Analizę wykrywania w ludzkiej krwi przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C przeprowadza się przez przyłączenie obcego mikroorganizmu (antygenu) do cząsteczki immunoglobuliny. Dołączony enzym enzymatyczny odgrywa rolę pewnego rodzaju etykiety. Pozwala śledzić reakcję immunochemiczną, a także jeden z jej składników.
Jako składniki enzymatycznego testu immunologicznego można:
- przeciwciała;
- przeciwciała znakowane specjalnym enzymem;
- antygeny;
- substraty enzymatyczne;
- barwniki wskaźnikowe.
Kiedy szkodliwe obce mikroorganizmy dostają się do ludzkiego ciała, siły ochronne zaczynają wytwarzać immunoglobuliny (przeciwciała). Następnie działają na antygeny i neutralizują je. To oddziaływanie prowadzi do powstania przeciwciała-antygenu, który ma swoje własne wskaźniki ilości i jakości. Wskazują na obecność lub brak w organizmie zakażenia HCV. Jeśli wynik testu immunoenzymatycznego jest dodatni, występuje wirus zapalenia wątroby typu C.
Nowoczesne technologie w medycynie mogą znacznie skrócić czas wykrywania wirusa zapalenia wątroby, który występuje w ostrej postaci. Dzięki systemom diagnostycznym trzeciej generacji możliwe jest również zwiększenie swoistości i czułości reakcji immunochemicznej.
Głównym materiałem badanym podczas ELISA jest krew żylna (w tym krew dawcy). Według zeznań może wytworzyć płyn do pobierania próbek płynu rdzeniowego lub płyn owodniowy.
Pozytywny wynik metody ELISA dla zapalenia wątroby typu C nie zawsze wskazuje na obecność infekcji wirusowej w organizmie. W ponad 35% przypadków antygeny wirusowe nie są wykrywane we krwi, co prowadzi do fałszywie dodatniego wyniku.
Metoda pozwala monitorować zmiany ilościowe i jakościowe, rozróżnienie między ostrymi i przewlekłymi postaciami zapalenia wątroby typu C. Jednak jest nieskuteczne w określaniu aktywności procesu patologicznego. Aby dokładniej potwierdzić obecność zakażenia HCV, należy również zastosować inne metody diagnozowania patologii.
Wskazania do testu ELISA
Metoda wykrywania specyficznego i ilościowego stężenia obcych mikroorganizmów (antygenów) za pomocą immunoglobulin i enzymów jest przeprowadzana w kilku etapach. Na podstawie zmiany koloru i ilościowego pomiaru enzymu lekarz może zdiagnozować zapalenie wątroby typu C u ludzi.
Następujące kategorie ludzi są bardziej podatne na chorobę:
- Pacjenci, którzy przeszli interwencje chirurgiczne, a także choroby narządów i układów wewnętrznych.
- Zakażony HIV (zakażony ludzkim wirusem niedoboru odporności). Duży odsetek osób w tej grupie to narkomani.
- Specjaliści medyczni.
- Funkcjonariusze organów ścigania.
- Kobiety w ciąży.
Pochodzenie wirusowe zapalenia wątroby często prowadzi do rozwoju raka (na przykład raka wątroby). Dlatego oddawanie krwi do testu immunoenzymatycznego powinno być przeznaczone przede wszystkim dla osób z głównej grupy ryzyka, a także dla pacjentów z ostrym lub przewlekłym zapaleniem wątroby.
Według wskazań lekarz może przepisać metodę ELISA pacjentom z rozpoznaniem:
- STI (infekcje przenoszone drogą płciową);
- choroby pochodzenia wirusowego (wirus brodawczaka, zakażenie wirusem opryszczki, zapalenie wątroby itp.);
- alergiczny charakter patologii;
- niedobór odporności;
- onkologia
Zalety i wady
Wirusowe zapalenie wątroby typu C w teście ELISA można wykryć we wczesnym stadium, jak również w postaci bezobjawowej i anicterycznej. Jak każda metoda diagnostyczna ma kilka zalet i wad.
Wśród pozytywnych cech testu ELISA eksperci wskazują:
- Dokładność wskaźników jakościowych i ilościowych. Czułość metody przewyższa inne badania dotyczące identyfikacji zapalenia wątroby dziesiątki razy.
- Znaczące zmniejszenie czasu wykrywania infekcji wirusowej dzięki nowoczesnym systemom diagnostycznym.
- Niska cena w porównaniu z innymi badaniami dotyczącymi identyfikacji zapalenia wątroby u ludzi.
- Możliwość diagnozowania choroby wątroby na wczesnym etapie przy braku wyraźnych objawów.
- Badania stopniowe z wykorzystaniem zautomatyzowanych procesów.
Pomimo wysokiej dokładności testu ELISA, w ponad 35% przypadków, z wynikiem pozytywnym, pacjent nie wykrywa wirusa zapalenia wątroby. Często test nie potwierdza patologii, co wskazuje na wątpliwy lub negatywny wynik.
Rzetelność badania w takim czy innym stopniu wpływa na:
- Leki.
- Naruszenia procesów metabolicznych w organizmie.
- Obecność pewnych patologii o charakterze chronicznym, które przyczyniają się do aktywnej produkcji immunoglobulin.
Biorąc pod uwagę wady wyników testu ELISA in vitro, pacjenta przydzielono do dodatkowych badań. W celu wiarygodnego wykrywania przeciwciał przeciwko zakażeniu wirusem zapalenia wątroby typu C stosuje się PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) lub RIBA (immunoblotting rekombinacyjny).
Co identyfikuje i jak prowadzone jest badanie
Analiza metodą ELISA może wykryć szeroki zakres chorób u ludzi.
Oprócz wykrywania wszystkich rodzajów przeciwciał przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, dodatni wynik testu może wskazywać na obecność następujących patologii w organizmie:
- ludzki wirus niedoboru odporności;
- zakażenie opryszczką;
- kiła;
- STI (ureaplazmoza, chlamydia itp.);
- wirus brodawczaka;
- wirus cytomegalii.
Badanie jest także rodzajem markera do wykrywania nowotworów złośliwych, patologii genetycznych, zaburzeń hormonalnych, a także zakłóceń w funkcjonowaniu układu hormonalnego.
Przygotowanie do dostarczenia materiału biologicznego do wykrywania wirusa zapalenia wątroby typu C obejmuje odrzucenie żywności i leku na 12 godzin przed badaniem. Warunkiem koniecznym jest również powstrzymanie się od spożywania alkoholu, tłustych, smażonych i słonych potraw.
Bezpośredni test ELISA
Główne kroki podczas bezpośredniego testu są następujące:
- Najpierw technik laboratoryjny pobiera krew z żyły (lub innego materiału biologicznego), a następnie umieszcza ją w specjalnych pojemnikach.
- Obce mikroorganizmy (antygeny) w ciągu 20 minut zaczynają się do nich przyczepiać.
- Specjalista dodaje immunoglobuliny (przeciwciała) do antygenów, które wykrywają odpowiedź immunologiczną. W tym przypadku składniki są pozostawione na kilka godzin.
- Niezwiązane antygeny usuwa się przez wlanie zawartości z pojemników.
- Materiał płucze się roztworem, a następnie przetwarza enzymami i pozostawia na godzinę.
- Kolor i stężenie zawartości analizuje się za pomocą kolorymetrii.
Jeśli wskaźnik ilościowy zawartości przekracza dopuszczalne normy, oznacza to obecność wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie człowieka.
Pośredni test ELISA
Implikuje interakcję nieznakowanych immunoglobulin z antygenami, do których dołączone są następnie wyznakowane przeciwciała.
Na początku krew pacjenta pobierana jest z żyły. Następnie materiał biologiczny umieszcza się w specjalnych pojemnikach na około pół godziny. W tym przypadku nieznakowane przeciwciała są przymocowane do ścian pojemników. Następnie dodaje się do nich znakowane przeciwciała. W wyniku ich interakcji powstaje kompleks immunologiczny przeciwciało-antygen.
Po 4 godzinach zawartość pojemników wylewa się, a luźne mikroelementy usuwa się. Technik laboratoryjny dołącza oznaczone przeciwciała do już utworzonego kompleksu i pojawia się odpowiedź immunologiczna „przeciwciało-przeciwciało-antygen”.
Po wielokrotnym usuwaniu luźnych mikroelementów do pojemnika dodaje się specjalny enzym, który zmienia kolor i ilościowe wskaźniki zawartości. Na podstawie uzyskanych wyników specjalista sprawdza dane i wyciąga wniosek.
Wyniki dekodowania
Podczas przeprowadzania testu ELISA zwraca się uwagę na obecność lub brak przeciwciał klasy IgA, IgG i IgM. Ilościowe wskaźniki tych przeciwciał są porównywane z danymi specjalnej tabeli.
Według niej interpretacja wyników jest następująca:
- Jeśli wszystkie trzy typy wskaźników nie są zdefiniowane, osoba odzyska pełną sprawność.
- Przy jednoczesnym pozytywnym wyniku we wszystkich trzech wskaźnikach występuje ostra postać infekcji wirusowej.
- Jeśli określone zostaną przeciwciała klasy IgG, podczas gdy inne klasy nie zostaną zidentyfikowane, wówczas osoba rozwinęła odporność poinfekcyjną.
- Pozytywne wskaźniki przeciwciał klasy IgG i IgA wskazują na przewlekły charakter choroby. Jednak pozostają one niezmienione nawet po leczeniu.
- Po pozytywnym wykryciu wszystkich trzech typów przeciwciał można zaobserwować nawrót przewlekłego zapalenia wątroby.
Według statystyk poziom IgM zaczyna rosnąć kilka dni po zakażeniu w organizmie, co wskazuje na wczesny etap patologii. Przeciwciała IgG pojawiają się zwykle 2 tygodnie po wystąpieniu choroby i pozostają we krwi przez długi okres czasu (nawet po wyzdrowieniu). Przeciwciała IgA wykrywa się po 2 tygodniach, a ich stężenie w organizmie zmniejsza się po terapii lekowej.
Pamiętaj, że pozytywny wynik testu ELISA na wirusowe zapalenie wątroby typu C nie zawsze wskazuje na obecność zakażenia. Często test uznaje się za fałszywie dodatni, co wymaga ponownego oddania krwi. W niektórych przypadkach pacjentowi przepisuje się dodatkowe badania, aby dokładniej określić parametry krwi.
Głównym kryterium testu jest dokładna identyfikacja wskaźników ilościowych i typowych. Pozwalają one określić nie tylko obecność wirusa, ale także formę choroby. Rozpoznanie zapalenia wątroby typu C za pomocą nowoczesnych metod pozwoli Ci rozpocząć terapię lekową na czas i zminimalizować negatywne konsekwencje.
Co oznacza pozytywny lub negatywny wynik EIA dla wirusowego zapalenia wątroby typu C?
Aby dokładnie określić rodzaj zapalenia wątroby po wstępnej diagnozie, przewidzieć przebieg choroby, ustalić etap jej rozwoju, stosując różne badania serologiczne. Najbardziej dokładne dane uzyskuje się po teście immunoenzymatycznym. Stosując test ELISA na wirusowe zapalenie wątroby typu C, rozpoznano w 95% przypadków. To właśnie ta analiza umożliwia wykrycie przeciwciał antywirusa zapalenia wątroby typu C (antywirus HCV) i ocenę nie tylko stopnia aktywności procesu patologicznego, ale także poziomu skuteczności terapii przeciwwirusowej przepisanej przez lekarza prowadzącego i przeprowadzanej pod jego kontrolą.
Kiedy potrzebne są badania i ich cechy
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest najbardziej niebezpiecznym typem tej choroby, ponieważ ma długi utajony okres i niebezpieczne konsekwencje. Aby uniknąć pojawienia się i rozwoju prawidłowej i terminowej diagnozy, jedną z najbardziej pouczających metod jest uznany test immunologiczny.
Możliwe jest potwierdzenie obecności zakażenia HCV we krwi pacjenta za pomocą markerów serologicznych, a analiza oparta na kompleksie strukturalnych i niestrukturalnych peptydów wirusowych umożliwia uzyskanie najbardziej kompletnych i wiarygodnych danych na temat istnienia przeciwciał. U zdrowych ludzi nie ma przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C we krwi pacjenta, a ich wykrycie wskazuje na obecność patogenu i rozwój procesu patologicznego.
W trakcie badania eksperci identyfikują przeciwciała klasy IgM i IgG, które są bezpośrednio związane z białkami strukturalnymi i niestrukturalnymi HCV. Przeprowadzenie tego badania pozwala nam zidentyfikować pacjentów zakażonych wirusem zapalenia wątroby typu C we wczesnym stadium choroby Obecność całkowitych przeciwciał we krwi pacjenta wskazuje na początek choroby lub wcześniejszą infekcję.
Na początek choroby wskazuje obecność przeciwciał klasy IgM, a zapalenie wątroby typu C można ocenić na podstawie wykrytych przeciwciał klasy IgG. Stają się one potwierdzeniem rekonwalescencji (końcowy etap choroby), w tym okresie charakterystyczna jest anatomiczna i funkcjonalna regeneracja zaatakowanych narządów.
Przeprowadzony w odpowiednim czasie test ELISA (ELISA) pozwala zidentyfikować proces patologiczny na wczesnym etapie rozwoju, zdiagnozować chorobę z dużą dokładnością i zwiększyć szanse szybkiego powrotu do zdrowia. Test ELISA umożliwia określenie nie tylko obecności wirusa, ale także liczby specyficznych całkowitych przeciwciał antywirusowych.
- Kobiety w ciąży podczas rejestracji w poradni przedporodowej.
- Pacjenci z objawami ostrego lub przewlekłego zapalenia wątroby.
- Specjaliści medyczni, którzy stale mają kontakt z materiałami biologicznymi.
- Pacjenci z rozpoznaniem AIDS.
- Obywatele uzależnieni od narkotyków.
- Pacjenci z alkoholizmem i ci, którzy prowadzą aspołeczny tryb życia.
Skierowanie do testu ELISA (test immunoenzymatyczny) i przyjęcie funkcjonariuszy organów ścigania lub pracowników służb publicznych. Potrzeba testu ELISA występuje, jeśli podejrzewasz naruszenie funkcjonalności wątroby lub otrzymujesz wątpliwe dane dotyczące stanu narządu po badaniu USG. Lekarz może skierować pacjenta na badanie krwi ELISA, jeśli ma on przejść złożoną interwencję chirurgiczną. Jeśli kobieta (zwłaszcza powyżej 30 lat) planuje ciążę, w badaniu krwi stwierdza się podwyższone wartości bilirubiny lub transferazy (ALT, AST).
Specyficzne przeciwwirusowe przeciwciała IgG wykryto przez kilka lat. Ich stężenie stopniowo maleje, co potwierdza pozytywną dynamikę. Jeśli chodzi o przewlekłe zapalenie wątroby typu C, w tym przypadku liczba całkowitych przeciwciał anty-HCV nie zmienia się. Dokładna diagnoza opiera się na określeniu poziomu przeciwciał IgM.
Przebieg zapalenia wątroby typu C zależy od genotypu wirusa, który spowodował rozwój choroby. Znanych jest 11 nowoczesnych odmian medycyny. W najtrudniejszych sytuacjach możliwe jest zakażenie kilkoma genotypami wirusa, a jeden z nich zawsze okazuje się dominujący. Tylko dokładna diagnoza pomoże wybrać najskuteczniejsze leki do skutecznej terapii, wybrać ich dawkowanie i ustalić czas trwania interwencji terapeutycznych.
Ocena wyników badań
Aby postawić diagnozę podejrzenia zapalenia wątroby typu C i uzyskać orientacyjne informacje na temat ilości i jakości patogenu, przeprowadza się test immunoenzymatyczny (ELISA), podczas którego specjaliści otrzymują potwierdzenie obecności wirusa w organizmie i mogą ocenić jego aktywność.
Dzięki temu badaniu możemy wyciągnąć wnioski na temat:
- obciążenie wirusem;
- ryzyko rozwoju przewlekłego procesu;
- aktywność rozmnażania (replikacji) cząsteczki RNA HCV;
- czas trwania procesu patologicznego;
- stopień uszkodzenia wątroby.
Oceniany jest również poziom ryzyka wystąpienia choroby przewlekłej. Zidentyfikowane za pomocą antywirusowego testu ELISA przeciwciała HCV wskazują replikację wirusa. Ostateczne wyniki wymagają potwierdzenia z dokładniejszymi badaniami.
Jakościowa ocena wyniku testu immunoenzymatycznego jest wyrażana jako wynik pozytywny lub negatywny. ELISA pozwala na wykrycie wirusowego zapalenia wątroby typu C we wczesnym stadium rozwoju choroby, a także w przebiegu choroby w postaci znieczulenia.
Analiza ma pewne zalety, w tym:
- Dokładność wskaźników jakościowych i ilościowych.
- Minimalny czas nauki.
- Test stopniowy.
Test immunoenzymatyczny jest jednym z badań wyróżniających się wysoką dokładnością, ale pomimo wszystkich zalet, w niektórych przypadkach nie pozwala zidentyfikować patogenu obecnego w organizmie człowieka.
Do badań asystent laboratorium pobiera krew żylną pacjenta i umieszcza ją w specjalnych pojemnikach. Po pewnym czasie antygeny (obce mikroorganizmy) są przymocowane do ścian naczynia. Specjalista wprowadza immunoglobuliny (przeciwciała) do naczynia i szuka odpowiedzi immunologicznej.
Uzyskane wyniki są porównywane z danymi specjalnie skompilowanej tabeli. Wynik jest oceniany jako:
Pozytywne, wskazujące na obecność ostrej postaci choroby, jeśli obecność przeciwciał klasy IgA, IgG, IgM jest określana podczas badania krwi.
Negatywny - nie wykryto wszystkich trzech rodzajów przeciwciał, są nieobecne.
Fałszywie dodatni - wynik testu ELISA jest dodatni, ale nie został potwierdzony po PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy).
Wątpliwe - markery we krwi nie są wykrywane w obecności wirusowego zapalenia wątroby typu C. Jest to możliwe przy zbyt wczesnej diagnozie. Wymagana jest wielokrotna analiza po 2-3 tygodniach. Aby uzyskać dokładną diagnozę, wykonaj analizę PCR.
Fałszywie negatywny wynik analizy jest możliwy u pacjentów przyjmujących leki, które mają działanie hamujące na system obronny organizmu.
Zarówno fałszywie pozytywne, jak i fałszywie negatywne wyniki analizy są możliwe z kilku powodów. Przede wszystkim jest to minimalne obciążenie wirusem na bardzo wczesnym etapie rozwoju choroby. Równie ważny jest stan układu odpornościowego pacjenta i indywidualne cechy jego ciała. Wyniki badania znacząco wpływają na podawanie leków spośród leków immunosupresyjnych.
Nie można być całkowicie pewnym dokładności wyniku testu immunoenzymatycznego, jeśli pacjentka jest kobietą w ciąży. Fałszywe wyniki są możliwe w przypadkach, gdy analiza jest przeprowadzana dla pacjentów cierpiących na choroby autoimmunologiczne, choroby onkologiczne z łagodnymi nowotworami.
Dodatkowe badania są prowadzone, jeśli pacjent niedawno doznał poważnej choroby zakaźnej, zdiagnozowano u niego zaburzenie metaboliczne lub wadliwe działanie układu hormonalnego. Jeśli skład krwi podwyższył poziom heparyny lub znacząco zmniejszył poziom pierwiastków śladowych.
Dokładność analizy można zwiększyć, przestrzegając obowiązujących zasad przygotowania do jej dostarczenia:
- Krew oddawana jest tylko na pusty żołądek. Ostatni posiłek jest dozwolony co najmniej 8-10 godzin przed pobraniem materiału.
- Wieczorem przed analizą należy odmówić jedzenia produktów tłustych, smażonych, pikantnych, wędzonych i potraw.
- Nie można mówić o piciu alkoholu.
- Lepiej rzucić palenie na dzień przed oddaniem krwi.
Test immunoenzymatyczny może być przeprowadzony tylko dla tych pacjentów, którzy obecnie nie cierpią na nieżyt, choroby zapalne lub zakaźne i nie skarżą się na niedyspozycję.
Naruszenie wymienionych zasad i wymogów prowadzi do tego, że wynik analizy jest oceniany jako fałszywie dodatni. Ta sytuacja rozwija się w 15-20% przypadków. Jednak dla pełnego zaufania lekarze kierują pacjentów na dodatkowe badania, podczas których muszą oddać krew do PCR.
Reakcja łańcuchowa polimerazy
Diagnoza nie jest możliwa tylko na podstawie wyników analizy ELISA. Obecność przeciwciał nie świadczy o obecności patogennego wirusa w organizmie w czasie badania. Błędne testowanie może spowodować załamanie nerwowe lub jeszcze ostrzejszą reakcję pacjenta. Diagnoza oparta na wynikach testu ELISA nie jest dokładna. Potrzebne są dodatkowe badania, których wyniki przyniosą ostateczny werdykt lekarzy.
Ważne jest, aby pamiętać, że fałszywie dodatni wynik testu jest możliwy u osób, które obecnie cierpią na inne choroby zakaźne, ale ich układ odpornościowy nie reaguje prawidłowo na przenikanie patogenów lub wirusów do organizmu.
Zdiagnozowane wirusowe zapalenie wątroby typu C pozwala na przeprowadzenie szeregu badań laboratoryjnych, wśród których szczególnym miejscem jest test immunoenzymatyczny (ELISA). Jakościowa ocena wskaźników jest definiowana jako wynik pozytywny lub negatywny. Brak wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi pacjenta jest normą, ale w niektórych przypadkach po badaniu eksperci stwierdzają, że w materiale biologicznym stwierdzono nieznaczne stężenia niektórych fragmentów RNA (kwasu rybonukleinowego). Zidentyfikuj je za pomocą PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy).
To badanie krwi pozwala zidentyfikować czynnik sprawczy wirusowego zapalenia wątroby typu C na wczesnym etapie rozwoju choroby i dokonać diagnozy z dużą dokładnością. Badanie opiera się na fakcie, że wirusy mają w swojej strukturze cząsteczki DNA (wirusowe zapalenie wątroby typu B) lub RNA (wirusowe zapalenie wątroby typu C).
Podczas analizy PCR za pomocą specjalnego traktowania próbek krwi pacjenta:
- zwiększyć stężenie cząsteczek kwasu nukleinowego;
- określić ich typ;
- ustalić rodzaj patogenu.
Jeśli w ludzkiej krwi znajduje się niewielka ilość fragmentów RNA patogenu, wszystkie z nich zostaną wykryte przez PCR. Umożliwia to postawienie dokładnej diagnozy. Główna różnica między tą analizą a wszystkimi innymi metodami badawczymi jest w 100% dokładna.
Analiza ta jest przeprowadzana w badaniu krwi kobiet w ciąży, które zgłosiły się do kliniki prenatalnej w celu rejestracji, z podejrzeniem zapalenia wątroby typu C z długim okresem utajonym (utajonym), z trudnością w dokonaniu dokładnej diagnozy za pomocą testu ELISA. PCR jest niezbędna w przypadkach, gdy wątpliwy wynik uzyskano po teście immunoenzymatycznym.
Wirus zapalenia wątroby typu C w tej sytuacji znajduje się w ciele pacjenta, ale nie wywołał jeszcze szybkiego rozwoju choroby. To jest ukryty przebieg choroby. Analiza jest przeprowadzana dość szybko, ponieważ nie ma potrzeby hodowania patogenu przy użyciu pożywki, aby uzyskać wynik. Główna różnica między PCR a testem immunoenzymatycznym (ELISA) polega na tym, że w tym badaniu nie ma czegoś takiego, jak wynik fałszywie dodatni lub wątpliwy.
Badania nad wirusowym zapaleniem wątroby metodą ife
ELISA w diagnostyce wirusowego zapalenia wątroby. Test immunoenzymatyczny
Konkretna diagnostyka laboratoryjna wirusowego zapalenia wątroby opiera się na zastosowaniu metod badań immunochemicznych i molekularnych. Główne metody immunochemiczne to radioizotop lub radioimmunologiczny (RIA) i test immunologiczny (ELISA). Immunochemiczne metody diagnostyczne opierają się na specyficznej interakcji antygenu - przeciwciała z późniejszą identyfikacją kompleksu za pomocą specjalnych etykiet. Najbardziej powszechny test immunoenzymatyczny.
Pierwsze doniesienia o zastosowaniu testu immunoenzymatycznego. jako metodę oznaczania dowolnych substancji opublikowano w 1971 r. jednocześnie przez dwie grupy badawcze - B. Van Weemen, A. Schuurs i E. Engvall, P. Perlmann. Test immunoenzymatyczny opiera się na następującej zasadzie: na fazie stałej, która głównie wykorzystuje powierzchnię studzienek tabletki polistyrenowej, ustala się antygen czynnika zakaźnego lub przeciwciała (często mieszaniny przeciwciał) na antygeny, które mają być wykryte. Ten antygen lub przeciwciała, które są utrwalone na fazie stałej, nazywane są immunosorbentem.
W wyniku inkubacji immunosorbentu i surowicy testowej w obecności wykrywalnego czynnika, są one związane z kompleksem antygen-przeciwciało. Po procedurze płukania, podczas której usuwa się niezwiązane antygeny i przeciwciała, przeprowadza się inkubację z koniugatem. Jako koniugat do wykrywania HBsAg stosuje się anty-HBs w wykrywaniu przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C - przeciwciał przeciwko ludzkim immunoglobulinom (koniugat antywirusowy) znakowanych peroksydazą chrzanową. W wyniku tej inkubacji następuje przyłączenie do już istniejących kompleksów antygenów - przeciwciała dodatkowo wprowadzonego koniugatu. Po usunięciu niezwiązanego koniugatu (przemywanie) podłoże wprowadza się do studzienek. Gdy stosuje się koniugat peroksydazy, nadtlenek wodoru stosuje się jako substrat w połączeniu ze wskaźnikiem, który jest najczęściej stosowany jako ortofenylenodiamina (OPD) lub tetrametylobenzydyna (TMB). Wynik szacuje się fotometrycznie.
Jakość i niezawodność możliwości analitycznych metody immunoenzymatycznej charakteryzuje się szeregiem kryteriów, które obejmują czułość, specyficzność, dokładność i odtwarzalność.
Czułość to minimalna ilość substancji, którą można wykryć za pomocą testu immunoenzymatycznego. W tym przypadku dolną granicą czułości tej metody jest stężenie substancji badanej w próbce, co odpowiada najmniejszemu dodatniemu wynikowi oznaczenia, który jest statystycznie znacząco różny od wskaźników próbek celowo negatywnych. Czułość IFTS zależy od wielu okoliczności związanych zarówno z konstrukcją systemu testowego (powinowactwo immunosorbentu, jakość systemów ekstrakcyjnych i buforowych), jak i rozdzielczości i dokładności metody rejestracji.
Swoistość - zdolność do dokładnego zidentyfikowania składników do określenia, który z tych enzymatycznych testów immunologicznych został zaprojektowany. Specyficzność testu ELISA jest determinowana w dużej mierze przez reakcję krzyżową przeciwciał lub antygenów (tj. Kompozycję stosowaną jako immunosorbent) z blisko spokrewnionymi związkami, jak również skład podłoża inkubacyjnego (efekt macierzy).
Poprawność - zgodność średniej wartości wyników powtarzanych oznaczeń tej samej próbki kontrolnej z prawdziwą wartością mierzonego parametru. Dokładność oznaczenia w teście ELISA zależy od jakości systemu testowego i próbki kontrolnej. Dla dobrych systemów testów immunologicznych wskaźniki poprawności mieszczą się w przedziale 90-110%. Osobliwością badań biomedycznych w teście ELISA jest niemożność ustalenia dokładnej wartości, dlatego też średnia kilku laboratoriów ekspertów jest traktowana jako wartość prawdziwa. Kryterium statystyczne poprawności jest średnią arytmetyczną i stopniem jej odchylenia od wartości rzeczywistej, wyrażonej w procentach.
Odtwarzalność - zdolność systemu testowego do pokazywania tych samych wartości przy powtarzanych badaniach tej samej próbki. Odtwarzalność zależy zarówno od losowych błędów (błędów) podczas procedury reakcji, jak i od jakości systemów testowych oraz dokładności metody zapisywania wyników. Uważa się, że odtwarzalność tych samych próbek kontrolnych tej samej firmy w różnych laboratoriach nie powinna przekraczać wartości współczynnika zmienności 15%.
Istnieje kilka specyficznych schematów ELISA do oznaczania wirusowych markerów zapalenia wątroby: a) bezpośredni test immunoenzymatyczny; b) pośredni test immunoenzymatyczny; c) hamowanie konkurencyjne; c) metoda „pułapki” lub „przechwytywania”.
Spośród metod biologii molekularnej do diagnostyki wirusowego zapalenia wątroby częściej stosuje się reakcję łańcuchową polimerazy i hybrydyzację. Metody te, zwłaszcza PCR, umożliwiają wykrycie bardzo małych ilości specyficznego wirusowego DNA lub RNA, a zatem ocenę replikacji, aw niektórych przypadkach aktywności replikacji.
Badanie krwi zapalenia wątroby typu C.
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest jedną z najczęstszych chorób wątroby, która występuje, gdy jest zakażona wirusem zapalenia wątroby typu C (HCV), który przedostaje się do organizmu przede wszystkim, gdy wchodzi w kontakt z krwią osoby zakażonej. Występuje przewlekłe i ostre zapalenie wątroby typu C. U 70–80% pacjentów z ostrym zapaleniem wątroby typu C nie występują objawy choroby, tylko w niektórych przypadkach, po pewnym czasie po zakażeniu, występują objawy choroby, które przejawiają się zmęczeniem, bólem brzucha, utratą apetytu, ciemnieniem mocz, wymioty, nudności, rozjaśnienie kału, żółtaczka, ból stawów. Z reguły objawy występują 6-7 tygodni po zakażeniu, ale czas wystąpienia objawów choroby waha się od 2 tygodni do sześciu miesięcy. Jeśli wystąpią powyższe objawy, należy skonsultować się z lekarzem chorób zakaźnych i wykonać badanie krwi na zapalenie wątroby typu C. Diagnostyka zapalenia wątroby, przeprowadzona w odpowiednim czasie, może wykryć chorobę na wczesnym etapie i znacznie zwiększyć szanse na wyzdrowienie.
Kiedy zaplanowano test na zapalenie wątroby typu C.
Sytuacje, w których wymagany jest test zapalenia wątroby typu C:
- podczas ciąży i planowania rodziny;
- pacjenci z objawami przewlekłego lub ostrego zapalenia wątroby;
- osoba jest zagrożona. Są to pracownicy medyczni, osoby w więzieniach, funkcjonariusze organów ścigania, ludzie używający narkotyków, duża liczba partnerów seksualnych, chorzy na AIDS, hemodializa i inni.
Przygotowanie do analizy zapalenia wątroby typu C.
Specjalne przygotowanie do analizy zapalenia wątroby typu C nie jest wymagane. Do analizy krew pobierana jest z żyły na pusty żołądek, a po ostatnim posiłku powinno upłynąć co najmniej osiem godzin.
Testy ELISA na zapalenie wątroby typu C
Pierwsza analiza, zwykle zalecana do diagnozy testu zapalenia wątroby typu C - ELISA (test immunoenzymatyczny). Testy ELISA na wirusowe zapalenie wątroby typu C umożliwiają wykrycie obecności przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (anty-HCVAb) we krwi. Jeśli wynik testu ELISA jest pozytywny, wskazuje on na obecność kontaktu organizmu z wirusem zapalenia wątroby typu C. Jednak 40% osób, które mają pozytywny wynik testu ELISA, nie wykrywa wirusa we krwi. Zjawisko to nazywane jest wynikiem fałszywie dodatnim. Ponadto za pomocą testu ELISA sprawdzana jest krew dawcy.
RIBA na zapalenie wątroby typu C
Analiza RIBA dla wirusowego zapalenia wątroby typu C jest stosowana do potwierdzenia pozytywnego wyniku testu ELISA. Metoda rekombinacji immunoblottingu (RIBA) jest dokładniejszym badaniem obecności przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C. Obecność wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie również nie determinuje wyniku dodatniego, ale tylko potwierdza obecność przeciwciał.
Testy zapalenia wątroby typu C PCR
Aby wykryć obecność wirusów zapalenia wątroby typu C we krwi (RNA HCV) i postawić diagnozę, najczęściej wykorzystują analizę metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Badanie to umożliwia wykrycie z dużą dokładnością obecności we krwi nawet niewielkiej ilości wirusa. Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C może ujawnić obecność wirusa już 5 dni po zakażeniu, na długo przed pojawieniem się przeciwciał. Gdy wynik analizy PCR jest dodatni, oznacza to obecność aktywnej infekcji.
Istnieją takie warianty analizy PCR:
- ilościowa PCR, która pozwala określić nie tylko fakt obecności wirusa, ale także obciążenie wirusem (ilość wirusa). Wskaźnik ten ma ogromne znaczenie dla określenia skuteczności leczenia;
- genotypowanie, które ustanawia genotyp wirusa zapalenia wątroby typu C, co jest ważne dla określenia czasu trwania i taktyki leczenia. Istnieje ponad 10 genotypów wirusa zapalenia wątroby typu C, ale w praktyce klinicznej wystarczy zdefiniować pięć z najczęstszych typów: 1a, 1b, 2,3a / 3b.
Przeprowadza się ilościową analizę PCR:
- z jakościowym pozytywnym testem na obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w surowicy;
- do dokładnej oceny skuteczności leczenia;
- określić taktykę leczenia pacjenta.
Nie ma bezpośredniego związku między nasileniem wirusowego zapalenia wątroby typu C a ilością wirusa we krwi. Stężenie wirusa wpływa na zakaźność choroby, tzn. Im większa ilość wirusa we krwi pacjenta, tym większe ryzyko przeniesienia wirusa, na przykład poprzez kontakt seksualny lub z matki na dziecko. Ponadto skuteczność leczenia zależy od stężenia wirusa. Podczas terapii korzystnym czynnikiem jest niska wiremia, a bardzo wysoka jest niekorzystna.
Wykonywana jest analiza genotypowania:
- z jakościowym pozytywnym testem na obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w surowicy;
- do dokładnej oceny skuteczności leczenia;
- określić taktykę leczenia pacjenta;
- przewidzieć chronologię procesu zakaźnego;
- określić postęp choroby.
Wykrywanie genotypu wirusa ma ogromne znaczenie dla określenia czasu trwania leczenia, co jest ważne, ponieważ interferon ma szeroki zakres skutków ubocznych i niską tolerancję pacjenta.
Analiza dekodowania zapalenia wątroby typu C
Zwykle RNA wirusa, przeciwciała przeciwko nim i antygeny są całkowicie nieobecne. Obecność przeciwciał we krwi wskazuje na obecność przewlekłego lub ostrego zapalenia wątroby typu C lub okresu powrotu do zdrowia. Jeśli HCV RNA jest obecny we krwi, co określa się za pomocą analizy PCR, wskazuje to na obecność wirusa we krwi.
Przy niewłaściwej technice testowej, transporcie i nieprawidłowościach w krwi analiza PCR może czasami wykazywać fałszywie dodatnie wyniki. Analizy ELISA i RIBA we wczesnych stadiach choroby, gdy organizm nie wytworzył jeszcze wystarczającej ilości przeciwciał, mogą wykazywać wynik fałszywie ujemny.
Jeśli podczas rozszyfrowywania testu na wirusowe zapalenie wątroby typu C uzyskuje się pozytywne wyniki, należy skontaktować się z lekarzem chorób zakaźnych i gastroenterologiem w celu dalszej diagnostyki i leczenia.
Obniżone segmentowe neutrofile
Płytki dziecka są normalne, podwyższone, obniżone
TGT - hormon stymulujący tarczycę
Diagnoza zapalenia wątroby
Nie można natychmiast stwierdzić obecności zapalenia wątroby w organizmie, ponieważ okres inkubacji choroby może trwać do czterech tygodni. Gdy pojawiają się pierwsze oznaki choroby, w dotkniętym chorobą organizmie występują radykalne zmiany w składzie krwi: analiza biochemiczna informuje o poważnym problemie zdrowotnym i obecności wirusa chorobotwórczego. Aby jednak postawić ostateczną diagnozę, nie wystarczy oddać krew na zapalenie wątroby, a także szczegółowa diagnoza zapalenia wątroby.
Diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby
Pożądane jest przeprowadzenie go po zakończeniu okresu inkubacji, aby lekarz z najwyższą precyzją mógł określić chorobę wątroby obecną w organizmie. W przeciwnym razie przepisane leczenie nie przyniesie pożądanego efektu terapeutycznego, a nawet zaostrzy dominującego obrazu klinicznego.
Diagnoza zapalenia wątroby typu A
Zazwyczaj rozpoznanie zapalenia wątroby typu A rozpoczyna się od szczegółowego przesłuchania pacjenta i wyznaczenia szeregu testów, które należy wykonać jak najszybciej. To jest:
- biochemiczne badanie krwi;
- całkowita liczba krwinek;
- Metoda PCR;
- ELISA;
- koagulogram.
Jeśli choroba Botkina postępuje, wówczas nieprawidłowy skok bilirubiny, AlAT i AsAT, próbka tymolu jest obserwowana zgodnie z wynikami biochemicznej analizy krwi. Ponadto wytwarzane są specyficzne IgM anty-HAV, które są niepodważalnym faktem obecności wirusowego zapalenia wątroby typu A.
Ogólnie rzecz biorąc, analiza krwi jest określona przez spadek leukocytów, skok w ESR i limfocytozę. Niemniej jednak najbardziej wiarygodna jest metoda PCR, która określa wskaźnik RNA wirusa patogennego.
Ponadto lekarz bada objawy choroby, po czym może dokonać ostatecznej diagnozy i przebić się do najbardziej skutecznej terapii. Potrzeba egzaminu instrumentalnego jest niezwykle rzadka. Po skutecznym leczeniu zachowawczym w warunkach hospitalizacji i kwarantanny pacjenta oczekuje się ostatecznego wyzdrowienia, a wirusowe zapalenie wątroby typu A nie powraca ponownie.
Diagnoza zapalenia wątroby typu B
W celu ustalenia obecności wirusa zapalenia wątroby typu B jest również możliwe zgodnie z wynikami badań laboratoryjnych, a do tego potrzebna jest pierwsza dawka krwi na zapalenie wątroby. Z natury patogenny wirus ma trzy główne antygeny - HBsAg, HBcAg i HBeAg, na które wytwarzane są przeciwciała w organizmie. Główną cechą tego obrazu klinicznego jest ELISA - ELISA, który ujawnia tylko specyficzne markery wirusowego zapalenia wątroby typu B.
Natychmiast należy wyjaśnić, że antygen HBsAg pojawia się we krwi jeszcze przed pierwszymi objawami zapalenia wątroby i jest niezawodnie oznaczany w okresie żółtaczki. Jednak negatywny test nie wyklucza obecności wirusowego zapalenia wątroby typu B, a zatem wymaga zastosowania równie skutecznej metody reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR).
Jeśli podejrzewasz, że wirusowe zapalenie wątroby typu B jest obowiązkowe, to biochemiczne badanie krwi, które zaleca się przejść w pierwszej kolejności. Przeprowadzanie biopsji wątroby i ultradźwięków narządów otrzewnowych jest omawiane indywidualnie, ale gdy historia choroby jest bardzo wyraźna, nie ma potrzeby stosowania metod badania klinicznego.
Echogram wątroby w autoimmunologicznym zapaleniu wątroby w stadium przewlekłego zapalenia wątroby
Diagnoza zapalenia wątroby typu C
Aby postawić tę diagnozę, nie wystarczy oddać krew na zapalenie wątroby, ponieważ wirus może przeważać w ciele w formie ukrytej. Niemniej jednak główne testy laboratoryjne to wszystkie analizy przedstawione powyżej, a także dodatkowe wyniki biopsji wątroby. To badanie mikroskopowe materiału biologicznego (w naszym przypadku kawałka tkanki wątroby) określa zakres procesu patologicznego i zwłóknienia tkanek. Pobieranie próbek materiału odbywa się w znieczuleniu miejscowym, powikłania takiej procedury są niezwykle rzadkie w praktyce medycznej.
Jeśli podejrzewa się zapalenie wątroby typu C, główną metodą badania klinicznego jest ultrasonografia narządów otrzewnowych. Powód jest prosty: choroba często objawia się wizualną zmianą chorej wątroby, zmianami jej struktury i wielkości. W ten sposób możesz określić:
- wielkość wątroby, śledziony, trzustki i woreczka żółciowego;
- zmiany patologiczne w tych narządach;
- ogólny przepływ krwi w narządach otrzewnowych;
- optymalny obszar do wykonania biopsji wątroby.
Ta metoda badania klinicznego określa wszystkie patologie ogniskowe narządu na poziomie mikroskopowym. Jeśli wątroba jest reprezentowana na ekranie w skali szarości, wymagana jest natychmiastowa biopsja, ponieważ szary kolor wizualizuje zaatakowane tkanki „ludzkiego filtra”.
Zapobieganie wirusowemu zapaleniu wątroby
Ponieważ choroba nie objawia się natychmiast, jest to dalekie od wszystkich obrazów klinicznych, które przechodzą do natychmiastowego leczenia. Pacjent może po prostu nie być świadomy istnienia patogennego wirusa w organizmie, który z kolei szybko rozprzestrzenia się do krwiobiegu i infekuje zdrowe komórki wątroby.
Aby uniknąć tak tragicznego losu, zaleca się przestrzeganie wszystkich środków zapobiegawczych. Taka czujność znacznie zmniejszy ryzyko zachorowalności i uchroni cię przed poważnymi problemami zdrowotnymi w przyszłości. Podstawowe zasady zapobiegania przedstawiono poniżej:
- umyć ręce po ulicy;
- poddawać wysokiej jakości obróbce świeżych warzyw i owoców;
- do przeprowadzenia wszystkich szczepień ochronnych określonych w rocznym planie kalendarza;
- selektywna postawa wobec partnerów seksualnych;
- unikać kontaktu z chorymi ludźmi;
- używać tylko jednorazowych strzykawek i być szczególnie czujnym na stacjach transfuzji krwi.
Zaleca się również regularne (raz na sześć miesięcy) oddawanie krwi na zapalenie wątroby, aby upewnić się, że wirus nie przenika do organizmu i nie infekuje zdrowych komórek raz. Jeśli diagnoza zostanie ustalona, wymagane jest natychmiastowe założenie konta i stosowanie się do wszystkich zaleceń specjalisty.
Autor publikacji:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Wykształcenie: Państwowy Uniwersytet Medyczny w Rostowie (Państwowy Uniwersytet Medyczny w Rostowie), Zakład Gastroenterologii i Endoskopii.
Gastroenterolog
Doktor nauk medycznych