Liczenie liczby białych krwinek

Zasada Liczenie leukocytów podczas mikroskopii w pewnej liczbie kwadratów komory zliczającej i obliczanie ich liczby w 1 litrze krwi, z uwzględnieniem rozcieńczenia krwi i objętości komory zliczającej.

Odczynnik: 3-5% roztwór kwasu octowego, zabarwiony do barwienia jąder leukocytów kilkoma kroplami roztworu błękitu metylenowego. Rozwiązanie ma niebieski kolor, może być przechowywane przez długi czas.

Przebieg determinacji. W suchej probówce zalać 0,4 ml roztworu kwasu octowego. Z palca pobiera się 0,02 ml krwi (można użyć stabilizowanej antykoagulantem krwi żylnej). Wytrzyj końcówkę pipety, a następnie wdmuchuj krew z dna probówki, wymieszaj, ponownie wybierz i przedmuchaj mieszaninę krwi i odczynnika (pipetowanie). Oznakuj probówkę i pozostaw ją do zliczenia. Zaleca się przechowywać mieszaninę krwi z roztworem kwasu octowego nie dłużej niż 2-4 godziny.

Krew rozcieńczono w probówce kwasem octowym, dokładnie wymieszano i napełniono komorą zliczającą. Napełnioną komorę pozostawia się w pozycji poziomej na 1 minutę, aby osiąść białe krwinki. Bez zmiany położenia kamery w poziomie, umieszczają ją na stole mikroskopu i przy małym powiększeniu (okular 10 ×, obiektyw 8 ×) zliczają białe krwinki w 100 dużych kwadratach, co odpowiada 1600 małym.

Dla większej dokładności leukocyty są liczone w poprzek siatki w dużych kwadratach, nie podzielonych na małe kwadraty i paski, począwszy od lewego górnego rogu siatki. Aby uzyskać lepszy kontrast, przyciemnij pole widzenia, upuść skraplacz i zamknij otwór. Komórki znajdujące się wewnątrz kwadratu i leżące na dowolnych dwóch liniach są liczone, aby nie liczyć tej samej komórki dwukrotnie.

Obliczanie liczby leukocytów przeprowadza się według wzoru:

gdzie X oznacza liczbę leukocytów w 1 μl krwi; oraz - liczba leukocytów w 100 dużych kwadratach; 20 - rozcieńczenie krwi; 100 to liczba dużych kwadratów; 250 jest współczynnikiem konwersji na 1 μl, ponieważ objętość jednego dużego kwadratu wynosi 1/250 μl (bok kwadratu wynosi 1/5 mm, wysokość 1/10 mm).

W praktyce, aby obliczyć liczbę leukocytów w 1 μl krwi, ich liczba w 100 dużych kwadratach jest mnożona przez 50, aw 1 litrze - wynikowa wartość jest mnożona przez 106.

Uwaga Podczas liczenia leukocytów błąd jest nieunikniony w 6–8% przypadków.

1. Przy dużej liczbie normocytów we krwi obwodowej są one liczone w liczbie leukocytów (zarówno leukocytów, jak i normocytów - komórek jądrzastych). Aby prawidłowo ustalić liczbę leukocytów, z całkowitej liczby jądrzastych komórek krwi należy odjąć liczbę normocytów.
2. Pozostałe błędy są podobne do tych, które powstają przy obliczaniu liczby czerwonych krwinek w komorze zliczającej.

Liczba leukocytów

Zbieranie krwi w mikserze leukocytów do znaku 0,5. Natychmiast dodać do krwi rozcieńczający roztwór 3% kwasu octowego do oznaczenia 11. Dokładnie wymieszać zawartość kapilary i napełnić nią komorę Goryjewa. Liczenie odbywa się w co najmniej 100 dużych kwadratach. Są to duże, nieliniowe linie, które są zgrupowane w cztery w siatce kamery Goryaev. Oblicz liczbę leukocytów w 1 l krwi według wzoru:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

gdzie: N jest liczbą leukocytów w stu dużych kwadratach; 4000 to mnożnik, który zmniejsza objętość małego kwadratu do objętości 1 μl krwi; 20 - korekta stopnia rozcieńczenia krwi; 1600 - liczba leukocytów w małych kwadratach; 10 6 - liczba mikrolitów w 1 l.

Zalecenia dotyczące rejestracji

Podsumowując, porównaj uzyskane wyniki z wartościami normalnymi.

Laboratorium 7.3

Określanie ilości hemoglobiny we krwi

194.48.155.245 © studopedia.ru nie jest autorem opublikowanych materiałów. Ale zapewnia możliwość swobodnego korzystania. Czy istnieje naruszenie praw autorskich? Napisz do nas | Opinie.

Wyłącz adBlock!
i odśwież stronę (F5)
bardzo konieczne

Liczenie liczby białych krwinek

Leukocytoza może być absolutna (prawdziwa) i względna (redystrybucyjna).

Absolutną leukocytozę obserwuje się w ostrych procesach zapalnych, martwicy tkanek, ostrych zakażeniach bakteryjnych (z wyjątkiem duru brzusznego, brucelozy, tularemii itp.), Stanach alergicznych, nowotworach złośliwych (z niszczeniem tkanek), zamkniętych urazach głowy i krwotokach w mózgu, cukrzycy. śpiączka mocznicowa, wstrząs, ostra utrata krwi, jako podstawowa reakcja - z chorobą popromienną. Znaczący wzrost liczby leukocytów występuje w przypadku białaczki.

Względna (redystrybucyjna) jest konsekwencją odbioru leukocytów w przepływie krwi z narządów, które służą jej magazynowi. Występuje po jedzeniu (leukocytoza pokarmowa), gorących i zimnych kąpielach, silnych emocjach (leukocytoza wegetatywna), intensywnej pracy mięśniowej (leukocytoza miogenna) itp.

Leukopenia Leukopenia jest uważana za wskaźnik zahamowania zdolności funkcjonalnej szpiku kostnego w wyniku ekspozycji na substancje toksyczne (arsen, benzen itp.), Niektóre leki (sulfanilamidy, chloramfenikol, butadion, immuno, cyklofosfamid itp.), Wirusy (grypa, wirusowe zapalenie wątroby, odra itd.), drobnoustroje (dur brzuszny, bruceloza itp.), promieniowanie jonizujące, promieniowanie rentgenowskie i hipersplenizm (zwiększona funkcja śledziony).

Leukocytoza i leukopenia rzadko charakteryzują się proporcjonalnym wzrostem (zmniejszeniem) całkowitej liczby wszystkich typów leukocytów (na przykład leukocytozy z pogrubieniem krwi); w większości przypadków stosuje się wzrost (spadek) liczby dowolnego typu komórek, dlatego stosuje się określenia „neutrofilia”, „neutropenia”, „limfocytoza”, „limfopenia”, „eozynofilia”, „eozynopenia”, „monocytoza”, „monocytopenia”, „Basofilia”.

W ocenie klinicznej zmian liczby leukocytów dużą wagę przywiązuje się do stosunku procentowego poszczególnych postaci leukocytów, to znaczy formuły leukocytów.

Liczba krwinek leukocytów zdrowej osoby:

Kwota względna Kwota bezwzględna

Bazofile ……………………….0-1% 0-0,0650 x 109 / l

Eozynofile …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neutrofile: - mielocyty............ 0% nieobecne

- dźgnięty nożem... 1-6% 0,040-0,300 x 109 / l

- segmentowane….47–72% 2,0–5,5 x 10 9 / l

Limfocyty ……………………….19-37% 1,2-3,0 x 109 / L

Monocyty ………………………….3-11% 0.09-0.6 x 109 / L

Liczenie leukocytów wykonuje się w wybarwionych rozmazach krwi obwodowej. W celu prawidłowej interpretacji wyników badania formuły leukocytów zaleca się liczyć w ilościach bezwzględnych, ale nie we względnych. Najczęstsze metody malowania rozmazów przez Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Po zanurzeniu zlicza się co najmniej 200 komórek, a następnie uzyskuje się stosunek procentowy pewnych typów leukocytów. Analiza leukogramu z uwzględnieniem innych parametrów krwi i obrazu klinicznego jest cenną metodą badania, pomaga w diagnostyce i określeniu rokowania choroby.

Główne przyczyny neutrofilii.

Ostre zakażenia bakteryjne - zlokalizowane i uogólnione.

Zapalenie lub martwica tkanki.

Efekty lecznicze (kortykosteroidy).

Główne przyczyny neutropenii.

Zakażenia - bakteryjne (dur brzuszny, bruceloza, tularemia, gorączka paratyfusowa) i wirusowe (zakaźne zapalenie wątroby, odra, grypa, różyczka i inne).

Działanie mielotoksyczne i tłumienie granulocytopoezy (promieniowanie jonizujące; czynniki chemiczne - benzen, anilina, DDT; działanie lecznicze - cytostatyki i leki immunosupresyjne; witamina B)₁₂-niedokrwistość z niedoboru kwasu foliowego, ostra białaczka aleukemiczna, niedokrwistość aplastyczna).

Ekspozycja na przeciwciała (formy immunologiczne) - nadwrażliwość na leki, choroby autoimmunologiczne (SLE, reumatoidalne zapalenie stawów, przewlekła białaczka limfatyczna), objawy izoimmunologiczne (choroba hemolityczna noworodka).

Redystrybucja i odkładanie w narządach - warunki wstrząsu, choroby z powiększeniem śledziony i hipersplenizmem.

Postacie dziedziczne (rodzinna łagodna przewlekła neutropenia).

Główne przyczyny eozynofilii.

Inwazje pasożytnicze (włośnica).

Przewlekłe zmiany skórne - łuszczyca, pęcherzyca, wyprysk.

Guzy (eozynofilowe warianty białaczki).

Inne choroby - fibroplastyczne zapalenie wsierdzia Lefflera, szkarłatna gorączka.

W fazie zdrowienia infekcji i chorób zapalnych (korzystny znak prognostyczny).

Przyczyny eozynopenii (aneozynofilia).

Zwiększona aktywność adrenokortykosteroidów w organizmie.

Główne przyczyny bazofilii:

Przewlekła białaczka szpikowa i erytremia.

Główne przyczyny monocytozy.

Podostre i przewlekłe zakażenia bakteryjne.

Zakażenia pasożytnicze - leiszmanioza, malaria.

Hemoblastoza - białaczka monocytowa, limfogranulomatoza, chłoniaki.

Inne stany to SLE, sarkoidoza, reumatoidalne zapalenie stawów, zakaźna monocytoza; w okresie powrotu do zdrowia po infekcjach, po opuszczeniu agranulocytozy, po splenektomii.

Zmniejszenie liczby monocytów jest ważne głównie w ocenie stosunku limfocytów-monocytów w gruźlicy płuc.

Główne przyczyny limfocytozy.

Zakażenia - ostre wirusowe (mononukleoza zakaźna, odra, różyczka, ospa wietrzna), przewlekłe bakterie (gruźlica, kiła, bruceloza), pierwotniaki (toksoplazmoza).

Hemoblastoza (białaczka limfocytowa, chłoniak).

Inne choroby - nadczynność tarczycy, choroba Addisona, witamina B₁₂-niedokrwistość z niedoboru foliowego, niedokrwistość hipo i aplastyczna

Limfocytopenia jest obserwowana w SLE, chorobie Hodgkina, rozległej gruźlicy węzłów chłonnych, w końcowej fazie niewydolności nerek, ostrej chorobie popromiennej, stanach niedoboru odporności, przyjmujących glukokortykoidy.

Wzrost lub spadek liczby określonych typów leukocytów we krwi może być względny lub bezwzględny. Jeśli tylko procent określonego rodzaju zmian w białych krwinkach, to ma miejsce względna neutrofilia, względna eozynopenia itd. Zwiększenie lub zmniejszenie bezwzględnej zawartości dowolnego typu leukocytów, to znaczy liczby tych komórek na jednostkę objętości krwi, nazywa się bezwzględną neutrofilią, bezwzględną eozynopenią itp.

Przesunięcie formuły w lewo (zwiększenie liczby młodych postaci neutrofili) jest oznaką zapalenia lub procesu martwiczego w organizmie.

Przesunięcie formuły leukocytów w prawo jest charakterystyczne dla choroby popromiennej i witaminy B₁₂-niedokrwistość z niedoboru kwasu foliowego.

Brak lub znaczące zmniejszenie liczby wszystkich typów ziarnistych leukocytów - granulocytów (neutrofili, eozynofili, bazofili) określa się terminem agranulocytoza. W zależności od mechanizmu występowania wyróżnia się mielotoksyczność (działanie promieniowania jonizującego, pobór cytostatyków) i immunologiczną (hapten i agranulocytozę autoimmunologiczną).

Liczba leukocytów

Metoda liczenia w aparacie. Pobieranie i rozcieńczanie krwi produkowanej metodą probówki. 0,4 ml płynu rozcieńczającego i 0,02 ml krwi włośniczkowej wprowadza się do probówki (najlepiej Vidalevskaya). Uzyskane rozcieńczenie uważa się praktycznie za 1:20 3-5% roztwór kwasu octowego zabarwionego błękitem metylenowym jest zwykle stosowany jako rozcieńczalnik (kwas octowy lizuje erytrocyty, błękit metylenowy barwi jądra leukocytów). Przed napełnieniem komory rurka Goryaeva z rozcieńczoną krwią jest dokładnie wstrząsana. Komora jest napełniana w taki sam sposób, jak w przypadku liczenia krwinek czerwonych.

Leukocyty są znacznie mniejsze niż erytrocyty (1-2 na duży kwadrat), dlatego dla dokładności zliczenia są dokonywane w 100 dużych kwadratach (niesklasyfikowanych). Obliczenie: 100 dużych kwadratów (1600 małych) zlicza się jako leukocyt.
Pamiętając, że objętość małego kwadratu wynosi 1/4000 mm3, a krew rozcieńcza się 20 razy, oblicza się liczbę leukocytów w 1 μl krwi: 4000 20 i dzieli się przez 1600 = a x 1/2. Praktycznie, aby uzyskać rzeczywistą zawartość leukocytów w 1 μl krwi, wystarczy podzielić na połowę liczbę uzyskaną w obliczeniu i dodać 2 zera. Średni błąd metody wynosi ± 7%.

Dokładniejsza (błąd 2-3%) i doskonała jest liczba leukocytów za pomocą urządzeń elektronicznych. Liczenie leukocytów w licznikach cząstek jest przeprowadzane zgodnie z tą samą zasadą co erytrocyty. Krew wstępną rozcieńcza się i miesza z dowolnym odczynnikiem lizującym krwinki czerwone. W autoanalizatorze „Technicon” jako taki stosuje się roztwór kwasu octowego w urządzeniach „Culter” i „Celloskop” - saponinę lub sapoglobinę, które dodaje się rozcieńczone (1: 500, 1: 700) w izotonicznym roztworze chlorku sodu (6 kropli na 20 ml hodowla).

Liczenie leukocytów we krwi wykonuje się w barwionych rozmazach krwi obwodowej.
Lepiej jest policzyć w najcieńszym punkcie blisko końca wymazu, co najmniej 200 komórek (z wyjątkiem wyraźnej leukopenii), a następnie obliczyć procentowy stosunek niektórych typów białych krwinek. Zaleca się zliczanie w tej samej kolejności: połowę komórek należy policzyć na górze, połowę na dole skoku, bez przechodzenia do samej krawędzi i środka, zygzakiem (3-4 pola widzenia wzdłuż skoku, 3-4 pola pod kątem prostym do środka skoku, następnie 3-4 pola na bok równoległy do ​​krawędzi, ponownie pod kątem prostym do góry i tak dalej na jedną stronę).

Przygotowanie rozmazów. Ostrożnie umyte i odtłuszczone szkło (jego krawędź) dotyka kropli krwi w miejscu wstrzyknięcia. Smaruj szkło szlifierskie, kładąc je pod kątem 45 ° do prowadnicy przed kroplą. Po doprowadzeniu szkła do tej kropli, czekają, aż krew rozleje się wzdłuż jego krawędzi, a następnie szybkim, łatwym ruchem wykonają szlifierkę do przodu, nie odrywając jej od obiektu, zanim wyschnie całą kroplę.

Prawidłowo wykonany rozmaz ma żółtawy kolor (cienki), nie dociera do krawędzi szkła i kończy się śladem (wąsy).

Barwienie suchych rozmazów wytworzonych po wstępnym utrwaleniu. Najlepsze utrwalenie uzyskuje się w absolutnym alkoholu metylenowym (3-5 minut) lub w mieszaninie Nikiforov o równych częściach absolutnego etanolu i eteru (30 minut).

Główne farby hematologiczne to błękit metylenowy i jego pochodna - lazur I (lazur metylenowy) i lazur II (mieszanina równych części lazuru I i błękitu metylenowego), do kwaśnej - rozpuszczalnej w wodzie żółtej eozyny.

● Malarstwo Romanovsky-Giemsa. Farba Romanovsky-Giemsa (fabrycznie) ma następujący skład: Azur II - 3 g, rozpuszczalna w wodzie żółta eozyna - 0,8 g, alkohol metylowy - 250 ml i gliceryna - 250 ml. Roboczy roztwór farby przygotowuje się w ilości 1,5-2 kropli gotowej farby na 1 ml wody destylowanej. Farbę wlewa się na rozmaz z możliwie wyższą warstwą; czas barwienia - 30-35 minut Po tym okresie wymazy wymywa się wodą i suszy na powietrzu. W tej metodzie możliwe jest dobre odróżnienie jądra, ale ziarnistość neutrofilowa cytoplazmy jest znacznie gorsza, więc jest szeroko stosowana do barwienia rozmazu krwi obwodowej.

● Połączona kolorystyka May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa według Pappenheima. Gotowy barwnik, utrwalacz May-Grunwald, który jest roztworem błękitu eozynometylenowego w alkoholu metylenowym, pipetuje się na utrwalony rozmaz przez 3 minuty. Po 3 minutach do farby pokrywającej roztwór dodaje się taką samą ilość wody destylowanej, a barwienie kontynuuje się przez kolejną 1 minutę. Następnie farba jest zmywana i rozmaz jest suszony na powietrzu. Następnie wysuszony rozmaz jest przemalowywany świeżo przygotowanym wodnym roztworem farby Romanovsky'ego przez 8-15 minut. Ta metoda jest uważana za najlepszą, szczególnie w przypadku rozmazów w punktach szpikowych.

Zwiększenie liczby leukocytów we krwi obwodowej powyżej poziomu normalnego nazywa się leukocytozą, zmniejszenie nazywa się leukopenią. Leukocytoza (leukopenia) rzadko charakteryzuje się proporcjonalnym wzrostem (zmniejszeniem) liczby wszystkich leukocytów, na przykład leukocytozy z pogrubieniem krwi. W większości przypadków występuje wzrost liczby (spadku) dowolnego typu komórek. Wzrost lub spadek liczby poszczególnych typów leukocytów we krwi może być względny lub bezwzględny, w zależności od całkowitej liczby leukocytów - normalnej, podwyższonej lub obniżonej. Zmiana liczby, stosunku poszczególnych form i morfologii leukocytów zależy od typu i zjadliwości patogenu, charakteru, przebiegu i zakresu procesu patologicznego, indywidualnej reakcji organizmu.

Leukocyty (leucocytus)

Leukocyty. Ilościowe oznaczanie leukocytów. Liczenie leukocytów za pomocą kamery Goryaeva. Ilościowa zawartość leukocytów. Leukocytoza.

Białe krwinki

Liczba leukocytów we krwi zależy zarówno od szybkości ich powstawania, jak i od ich mobilizacji ze szpiku kostnego, a także od ich wykorzystania i migracji do tkanek (do zmian chorobowych), wychwytywania przez płuca i śledzionę. Na procesy te z kolei wpływa wiele czynników fizjologicznych, a zatem liczba leukocytów we krwi osoby zdrowej podlega wahaniom: wzrasta pod koniec dnia, podczas wysiłku fizycznego, stresu emocjonalnego, spożycia pokarmów białkowych i nagłych zmian temperatury otoczenia.

Ilościowe oznaczanie leukocytów

Leukocyty są liczone za pomocą kamery Goryjewa i za pomocą automatycznych liczników.

Liczenie leukocytów za pomocą kamery Goryaeva

Dzięki metodzie in vitro pobierania krwi do liczenia leukocytów:

• Do probówki wlewa się 0,4 ml roztworu 3-5% kwasu octowego zabarwionego błękitem metylenowym. Użyj pipety kapilarnej, aby pobrać 20 μl krwi ze świeżej kropli (rozcieńczenie 20 razy), ostrożnie wdmuchuj do probówki z odczynnikiem i przepłucz pipetę. Dobrze wymieszać;
• czyste i suche szkło pokrywające jest wcierane do komory, tak aby pierścienie tęczowe tworzyły się w miejscu kontaktu;
• krew rozcieńczona w probówce, dobrze wymieszać. Koniec okrągłego szklanego pręta pobiera kroplę krwi i doprowadza ją do krawędzi wypolerowanego szkła komory;
• po napełnieniu komory pozostaje przez 1 minutę w spoczynku do sedymentacji leukocytów;
• Leukocyty są rozważane przy małym powiększeniu (obiektyw × 8 lub × 9, okular × 10 lub × 15) z przyciemnionym polem widzenia (z obniżonym skraplaczem lub zwężoną przeponą);
• dla zadowalających wyników leukocyty są liczone w 100 dużych kwadratach.

Znając objętość dużego kwadratu i stopień rozcieńczenia krwi, znajdź liczbę leukocytów w 1 μl i 1 l krwi. Strona dużego kwadratu ma 1/5 mm, powierzchnia wynosi 1/25 mm2, objętość przestrzeni powyżej tego kwadratu wynosi 1/250 mm3.

Formuła do liczenia białych krwinek:

gdzie B jest liczbą leukocytów w 100 dużych kwadratach;
P - stopień rozcieńczenia (20).

Liczba leukocytów

Norma: 4,0–9,0 × 10 9 / L

Nazywa się wzrost liczby leukocytów powyżej 9,0 × 10 9 / l
leukocytoza, spadek ich liczby poniżej 4,0 × 10 9 / l - leukopenia. Jednak nawet 3,5 × 109 w 1 l leukocytów dla wielu osób może być normą. Według literatury tacy ludzie mają zwiększoną odporność immunologiczną i są mniej podatni na zachorowania, co wydaje się być spowodowane potrzebą odpowiedzi immunologicznej, aby mieć rezerwę leukocytów w tkankach, gdzie jest 50–60 razy więcej niż w krwiobiegu. Oczywiście, u zdrowych osób z niską liczbą białych krwinek we krwi obwodowej, ich rezerwy w tkankach są odpowiednio zwiększone. Zjawisko to tłumaczy się dziedzicznym i rodzinnym charakterem lub wzrostem wpływu przywspółczulnego układu nerwowego.

Leukopenia może być funkcjonalna i organiczna.
Funkcjonalna leukopenia jest związana z rozregulowaniem powstawania krwi i jest obserwowana:

• z pewnymi infekcjami bakteryjnymi i wirusowymi (dur brzuszny, grypa, ospa, różyczka, choroba Botkina, odra);
• pod działaniem leków (sulfonamidy, środki przeciwbólowe, przeciwdrgawkowe, przeciwtarczycowe, cytostatyczne i inne leki);
• podczas pracy mięśniowej, wprowadzenie obcych białek, efektów nerwowych i temperaturowych, głód, stany hipotoniczne;
• fałszywa leukocytopenia może być związana z agregacją leukocytów podczas długotrwałego przechowywania krwi w temperaturze pokojowej (ponad 4 godziny).

Organiczna leukopenia wynikająca z aplazji szpiku kostnego i jej zastąpienia przez tkankę tłuszczową występuje, gdy:

• niedokrwistość aplastyczna;
• agranulocytoza;
• białaczka leukopeniczna;
• niektóre formy choroby Hodgkina;
• promieniowanie jonizujące;
• hipersplenizm (pierwotny i wtórny);
• choroby kolagenu.

Leukocytoza

Leukocytoza jest reakcją układu krwiotwórczego na efekty
czynniki egzogenne i endogenne. Istnieją fizjologiczne i patologiczne leukocytozy.

Leukocytoza fizjologiczna to:

• trawienny - po jedzeniu, szczególnie bogaty w białko; liczba leukocytów nie przekracza 10,0–12.0 × 109 / l i po 3-4 godzinach powraca do normy;
• ze stresem emocjonalnym (adrenalina), ciężkim wysiłkiem fizycznym, chłodzeniem, nadmiernym nasłonecznieniem (oparzenie słoneczne), podawaniem wielu hormonów (katecholamin, glikokortykosteroidów itp.), w drugiej połowie ciąży, podczas miesiączki i z powodu nierównomiernego rozmieszczenia leukocytów we krwi główny nurt.

Leukocytoza patologiczna jest podzielona na bezwzględną i względną.

Leukocytoza bezwzględna - wzrost liczby leukocytów we krwi do kilkuset tysięcy (100,0–600,0 × 10 9 / l i więcej).

• Najczęściej obserwowane w białaczce: w przewlekłej białaczce - w 98-100% przypadków, w ostrej białaczce - w 50-60%. Zmiana stosunku komórek leukocytów w szpiku kostnym i punktach krwi służy jako podstawa do diagnozy białaczki.

Obserwuje się leukocytozę względną:

• ostre procesy zapalne i zakaźne, z wyjątkiem duru brzusznego, grypy, ospy, różyczki, choroby Botkina, odry. Największa leukocytoza (do 70,0–80,0 × 109 / l) obserwowana jest w posocznicy;
• pod wpływem substancji toksycznych (trucizny owadów, endotoksyn), promieniowania jonizującego (bezpośrednio po napromieniowaniu);
• w wyniku działania kortykosteroidów, adrenaliny, histaminy, acetylocholiny i preparatów naparstnicy;
• z rozpadem tkanek (martwica), zawałem mięśnia sercowego, zakrzepicą tętnic obwodowych z rozwojem zgorzeli, oparzeniami, wysiękowym zapaleniem opłucnej, zapaleniem osierdzia, mocznicą, śpiączką wątrobową;
• znaczna utrata krwi w obrażeniach, krwawienia wewnętrzne, ginekologiczne i inne.

Wzrostowi liczby leukocytów w chorobach zakaźnych w większości przypadków towarzyszy przesunięcie formuły leukocytów w lewo

Zliczanie liczby leukocytów i płytek krwi

Czynniki wpływające na poprawność badania białych krwinek

- długie przechowywanie krwi w temperaturze pokojowej

Normy zawartości leukocytów we krwi

Wiek Liczba leukocytów

- 1 dzień 11,6 - 22,0

- 1 tydzień 8.1. - 14.3

- 1 miesiąc 7.6 - 12.4

- Dorośli 4,0 - 9,0

Metody określania liczby leukocytów we krwi.

- Zliczanie liczby leukocytów w komorze zliczającej

- Zliczanie leukocytów w analizatorach hematologicznych

Określanie liczby leukocytów w komorze zliczającej.

- Liczenie leukocytów pod mikroskopem przeprowadza się po lizie czerwonych krwinek w 100 dużych kwadratach siatki zliczającej i przeliczonej na 1 litr krwi, w oparciu o objętość kwadratów i rozcieńczenie krwi. Liczbę leukocytów należy wykonać w ciągu 2-4 godzin po pobraniu krwi.

- Jeśli w krwi obwodowej znajdują się jądrzaste krwinki czerwone, nie są one lizowane i liczone razem z leukocytami. W tym przypadku, aby określić prawdziwą liczbę leukocytów, liczbę komórek w czerwonym rzędzie odejmuje się od całkowitej liczby zliczonych komórek.

- Na przykład: Całkowita liczba leukocytów w obliczeniach w komorze (lub analizatorze) -45x109 / l. Przy obliczaniu formuły leukocytów stwierdzono, że 50 erytroblastów (normoblastów) jest obecnych na 100 leukocytów.

Obliczamy prawdziwą liczbę leukocytów we krwi:

150 ogniw - 45 x 109 / l

100 komórek (leukocytów) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l

Zatem prawdziwa liczba leukocytów we krwi wynosi 30 x 109 / l.

Główne źródła błędów w obliczaniu leukocytów w komorze:

- Nieprawidłowy stosunek objętości krwi i kwasu octowego do probówki.

- Niepoprawnie przygotowany roztwór kwasu octowego (w stężeniu powyżej 5%, niektóre leukocyty mogą ulegać lizie, co doprowadzi do niedoszacowania wyniku).

- Przedłużona ekspozycja próbki w temperaturze powyżej 28 ° C, która może przyspieszyć lizę leukocytów w próbce i prowadzić do niedoszacowania wyniku.

- Nieprawidłowe wypełnienie komory Goryaev. Podobnie jak w przypadku obliczania czerwonych krwinek, aparat należy pozostawić na 1 minutę, aby ustabilizować komórki.

- Kamera Goryjewa nie była wystarczająco umyta po poprzedniej definicji. Leukocyty pozostające w komorze mogą przeceniać wyniki analizy.

Metody liczenia płytek

- w komorze liczenia

Każda grupa metod ma zalety i wady.

- Zliczanie płytek w komorze jest wystarczająco dokładne, nie wymaga obliczania liczby czerwonych krwinek. Z drugiej strony, ta metoda jest bardziej pracochłonna, ponieważ płytki w postaci natywnej są reprezentowane przez małe i słabo skontrastowane elementy. Wadą tej metody jest zliczanie płytek krwi w najbliższych godzinach po pobraniu krwi.

- Określenie liczby płytek krwi w rozmazach krwi jest znacznie gorsze pod względem dokładności względem metody komory lub automatycznych liczników. Błędy w liczeniu rozmazów krwi mogą wynikać ze złej jakości wymazu i związanego z nim nierównomiernego rozkładu płytek krwi, niedokładnego określenia liczby czerwonych krwinek. Znaczącą wadą tej metody jest konieczność jednoczesnego liczenia płytek krwi i czerwonych krwinek we krwi. Zaletą tego jest możliwość badania płytek krwi w dowolnym momencie, niezależnie od czasu pobrania krwi.

- Metoda oznaczania płytek krwi za pomocą analizatora hematologicznego pozwala dokładnie określić liczbę płytek krwi, ich średnią objętość i rozkład objętości.

Liczba leukocytów

Liczbę leukocytów oblicza się za pomocą automatycznego licznika lub w komorze Goryaev. Aby policzyć leukocyty w komorze, przygotowuje się płyn Turk - roztwór kwasu octowego zabarwiony wodnym roztworem błękitu metylenowego (0,1 ml 0,1% roztworu błękitu metylenowego dodaje się do 9 ml 10% kwasu octowego). W probówce wlać 0,4 ml płynu Türk. Zdobądź dokładnie 0,02 ml krwi, ostrożnie dodaj do płynu rozcieńczającego. Rozcieńczenie krwi wynosi 1:20. Dobrze wymieszać i odstawić na 4 minuty. Wypełnij komorę Goryaeva, po starannym potrząśnięciu probówki rozcieńczoną krwią. Kamera jest pozostawiona na 1 minutę na płaskiej powierzchni w celu sedymentacji leukocytów. Następnie leukocyty zlicza się przy małym powiększeniu mikroskopu (soczewka 8, okular 10 lub 15) z przyciemnionym polem widzenia (z obniżonym skraplaczem lub zwężoną przeponą). Uważa się, że leukocyty są w 100 nieujawnionych dużych kwadratach, co odpowiada 1600 małym. Wyniki zliczania komórek w dużych kwadratach podsumowują i obliczają ich liczbę w 1 μl krwi, stosując wzór:

gdzie X oznacza liczbę leukocytów w 1 μl krwi; A - liczba komórek liczona w 100 dużych kwadratach, 1600 - liczba małych kwadratów; 20 - rozcieńczenie krwi; 4000 to mnożnik dający objętość 1 μl krwi, w oparciu o objętość małego kwadratu (1/4000 μl).

Zliczanie formuły leukocytów Badano barwione rozmazy krwi obwodowej. Warunkiem koniecznym do prawidłowego uwzględnienia cech morfologicznych krwinek jest prawidłowo wykonany i dobrze zabarwiony rozmaz krwi. Rozmaz krwi przygotowuje się na suchych, czystych, dobrze odtłuszczonych preparatach, postarzonych w mieszaninie Nikiforova (alkohol etylowy 96º i eter dietylowy 1: 1). Wzięcie szkiełka na długie krawędzie, dotknięcie jego powierzchni kroplą krwi (ale nie skóry) uwolnioną z nakłucia lub nałożenie kropli krwi mikropipetą lub kapilarą. Szklany suwak jest trzymany na stole lub w lewej ręce dla wąskich krawędzi. Prawą ręką nałóż zmielone szkło wąską krawędzią na szkło z krwią po lewej stronie kropli pod kątem 45 ° i popchnij je w prawo, aż dotknie krwi. Czekają, aż krew rozleje się na całej krawędzi zmielonego szkła, a następnie szybkim, szybkim ruchem poprowadzą go od prawej do lewej, aż cała kropla się wyczerpie. Kropla krwi powinna być mała i proporcjonalna, tak aby cała rozmaz był umieszczony na szkle, nie osiągając 1-1,5 cm przed jego krawędzią. Dobrze wykonany rozmaz jest cienki, ma żółtawy kolor i kończy się „miotłą”. Wysuszone powietrzem rozmazy krwi umieszcza się w specjalnych naczyniach w celu utrwalenia lub w zwykłych szklanych szklankach wypełnionych cieczą utrwalającą (alkohol metylowy, czas utrwalania 3-5 minut; alkohol etylowy, 30 minut; mieszanina Nikiforova, 20-30 minut). Stałe preparaty suszy się na powietrzu, a następnie barwi barwnikiem Romanovsky-Giemsa. Gotowy roztwór farby Romanovsky-Giemsa (azureozyna) rozcieńczony 1:10 w wymaganej objętości do barwienia. Naprawione rozmazy są nalewane rozcieńczoną farbą, którą wlewa się na rozmaz z możliwie wyższą warstwą. Kolorystyka trwa w zależności od temperatury powietrza w pomieszczeniu od 25 do 45 minut. Po zakończeniu malowania zmyć farbę wodą destylowaną i włożyć pionowo do drewnianego stojaka do suszenia. Mikroskopia rozmazów krwi jest przeprowadzana z zanurzeniem przy powiększeniu 100 × 10. Zliczanie leukocytów przeprowadza się wzdłuż zygzakowatej linii („linia Meandera”), licząc 100-200 komórek, biorąc pod uwagę liczbę pojedynczych postaci leukocytów: stab i segmentowane neutrofile, eozynofile, bazofile, monocyty, limfocyty. Oblicz procent każdego typu komórki.

Liczenie bezwzględnej liczby fagocytów i limfocytów Bezwzględna liczba fagocytów (neutrofili i monocytów) i limfocytów wyższych kręgowców jest obliczana na podstawie danych dotyczących liczby leukocytów we krwi obwodowej i formule leukocytów.

Test funkcji fagocytarnych

Oznaczanie wskaźnika fagocytarnego i liczby fagocytarnej

Opracowano wiele technik oceny absorpcji i trawienia leukocytów. Wszystkie z nich opierają się na zdolności fagocytów do absorbowania obcych cząstek, które tworzą układ testowy (specyficzny typ mikroorganizmu, zymosan, lateks - przedmiot absorpcji). Objawienie przeprowadza się in vitro lub in vivo. Ogólny przebieg oznaczania jest następujący: Heparynizowaną lub cytrynianową świeżą krew (lub zawiesinę fagocytów) miesza się z równą objętością zawieszonej dziennej zawiesiny drobnoustrojów (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) lub innego obiektu absorpcyjnego. Mieszankę delikatnie miesza się i umieszcza w termostacie (37-40ºС - dla ciepłokrwistych w zależności od normalnej temperatury ciała, 26 ° C - dla ryb kochających ciepło i niższych dla kochających zimno). Po 15, 30, 45, 60 i 90 minutach rozmazy przygotowuje się na szkiełkach, suszy, utrwala alkoholem metylowym lub mieszaniną Nikiforowa i wybarwia według Romanovsky-Giemsa. Patrzą na rozmazy pod wpływem zanurzenia i określają aktywność fagocytarną - procent fagocytów uczestniczących w fagocytozie, wskaźnik fagocytarny - liczbę testowanych mikrobów wychwyconych przez jeden fagocytujący leukocyt, liczbę fagocytarną - średnią liczbę obiektów fagocytarnych na 1 aktywny neutrofil. Ocena wskaźników w różnych przedziałach czasowych pozwala oszacować dynamikę fagocytozy. Zwykle po 90 minutach wskaźnik fagocytarny powinien być niższy niż po 45 minutach i 60 minutach, z powodu trawienia drobnoustrojów. W przypadku naruszenia trawienia nie zmienia się.

Ocena czynnościowej aktywności fagocytów przez reakcję redukcji nitro-niebieskiego tetrazolu (test NBT)

Ten test jest wskaźnikiem bakteriobójczej funkcji fagocytów i pozwala ocenić ich zdolność do zabijania zależnego od tlenu. Gdy ten mechanizm zabijania jest aktywowany, aktywowany jest enzym oksydaza NADPH, co prowadzi do pojawienia się reaktywnych form tlenu w fagocycie. Uwalnianie takich substancji w komórce nazywane jest eksplozją tlenu (oddechowego), którą można zarejestrować za pomocą testu NBT. W sformułowaniu tego testu substancja nitrozynium tetrazolium jest dodawana do fagocytów, jest absorbowana przez komórkę i w obecności reaktywnych form tlenu zamienia się w ciemnoniebieską substancję, diformazan. Im więcej granulek ciemnoniebieskich jest utrwalonych na powierzchni lub wewnątrz fagocytu, tym więcej form tlenu aktywnego powstaje, tym bardziej zabijanie zależne od tlenu.

Test NBT jest ustawiony w dwóch wersjach: spontanicznej i indukowanej. Podczas tworzenia spontanicznego testu NBT, fagocyty hoduje się w obecności NST bez wstępnej aktywacji komórek, podczas wykonywania indukowanego testu NBT, do podłoża hodowlanego dodaje się aktywator reakcji fagocytarnej. Ustawienie testu NBT w dwóch wariantach umożliwia obliczenie rezerwy funkcjonalnej komórek, która stanowi różnicę między liczbą (intensywnością) indukowanych komórek dodatnich pod względem diformazanu a liczbą (intensywnością) spontanicznych komórek dodatnich pod względem diformazanu. Wartości indukowanego testu NBT charakteryzują aktywność komórek fagocytarnych w obecności bodźca antygenowego i są uważane za kryterium ich gotowości do całkowitej fagocytozy. Spontaniczny test NBT pozwala oszacować stopień aktywacji zależnych od tlenu mechanizmów zabijania nieaktywowanych fagocytów. Charakteryzuje stopień aktywacji wewnątrzkomórkowych układów mikrobójczych.

Aby utworzyć spontaniczny test NBT, 0,05 ml 0,2% roztworu NBT w buforze fosforanu potasu (0,1, pH 7,3) i 0,05 ml tego samego buforu dodaje się do 0,1 ml krwi. Równolegle umieszcza się próbkę w celu uwzględnienia indukowanego testu NBT, w którym zamiast 0,05 ml buforu dodaje się taką samą objętość aktywatora fagocytarnego (na przykład pirogenną w stężeniu 50 μg / ml). Mieszaninę reakcyjną termostatuje się w łaźni wodnej w 37 ° C (30–60 min). Przygotowuje się rozmazy o średniej gęstości, suszy na powietrzu i utrwala w alkoholu etylowym lub mieszaninie Nikiforov (20 min), a następnie maluje wodnym roztworem obojętnej czerwieni (0,1%, 1 min)

Po reakcji rozmazy krwi są mikroskopowo zanurzane (100 × soczewka, okular 10 ×). Spośród 100 komórek zlicza się udział aktywowanych neutrofili (DAN,%) zawierających granulki diformazanu. W zależności od ilości dipherformazanu zdeponowanego w komórkach, ich aktywność ocenia się w jednostkach arbitralnych, a wskaźnik aktywacji neutrofili (IAN, stosowane jednostki) oblicza się:

gdzie jest H_Neg. - liczba komórek, które nie zawierają granulek diformazanu;

H₁ - liczba komórek, w których powierzchnia złóż diformazanu jest mniejsza niż 1/3 obszaru rdzenia;

H₂ - liczba komórek, w których złoża diformazanu wynoszą od 1/3 do całej wielkości jądra;

H₃ - liczba komórek, w których osady diformazanu zajmują większą powierzchnię jądra.

Wyprowadzenie współczynnika mobilizacji (KM) przeprowadzonego zgodnie z następującym wzorem: