Wraz z wprowadzeniem nowoczesnych technologii w medycynie rosną możliwości immunochemicznych metod diagnostycznych, które są w stanie szybko i dokładnie rozpoznać chorobę, gdy inne metody są bezsilne. Zrozumienie, że wirus zapalenia wątroby typu B jest zdolny do przebywania w organizmie w bardzo niskim stężeniu, w którym nie można go wykryć nawet dzięki tak wiarygodnej metodzie jak PCR, wymaga świeżego spojrzenia na problem diagnozowania tej choroby i docenienia możliwości testu immunologicznego.
W tym materiale przeanalizujemy szczegółowo wszystko, co dotyczy tego typu badań laboratoryjnych. Dowiesz się, czym jest test immunoenzymatyczny i jak się go wykonuje, czym jest antygen australijski i jak się go określa, jakie są niezrozumiałe skróty Hbs ag, Hbcor i ich rola w odszyfrowaniu analizy, a także wiele przydatnych i interesujących informacji.
Treść artykułu:
Ogólne informacje o ELISA
ELISA (skrócona ELISA) jest laboratoryjną metodą diagnostyczną, która może wykryć zarówno antygeny, jak i przeciwciała z szerokiej gamy infekcji, w tym wirusowego zapalenia wątroby typu B. Aktualna wiedza o właściwościach wirusa i właściwościach odpowiedzi immunologicznej organizmu, pozwala nie tylko wykryć infekcję, ale także ją zidentyfikować etap, skuteczność szczepienia i ocenić skuteczność leczenia.
Istota enzymatycznego testu immunologicznego
Test ELISA opiera się na reakcji „antygen-przeciwciało”, a raczej na jego właściwościach.
W odpowiedzi na inwazję obcych substancji (antygenów), które w szczególności są białkami wirusa, organizm wytwarza białka ochronne - przeciwciała. Przeciwciała wchodzą w złożoną reakcję z antygenem, blokując jego aktywność.
Omówimy więcej o antygenach i przeciwciałach poniżej, ale teraz zauważymy, że dla każdego antygenu istnieją ściśle indywidualne, lub jak mówią lekarze, przeciwciała homologiczne. Tak więc, jeśli chcemy wykryć specyficzny antygen we krwi, użyjemy tabletki diagnostycznej z przeciwciałami. Jeśli we krwi znajduje się antygen, reaguje on z przeciwciałami, które można wykryć na różne sposoby. I odwrotnie. Jeśli chcemy znaleźć jakiekolwiek przeciwciała, potrzebujemy tabletki z odpowiednim antygenem.
Najczęściej wartość diagnostyczna ponosi tylko przeciwciała, dzięki którym można zdiagnozować niemal każdą infekcję. Specyfiką wirusa zapalenia wątroby typu B jest jednak to, że główną rolę w diagnozie odgrywa jeden z antygenów - australijski antygen.
Jak działa IFA
Rozważ typową procedurę ELISA dla konkretnego przykładu, gdy chcesz zidentyfikować przeciwciała przeciwko patogenowi.
Do diagnostyki stosuje się tabletkę z 96 dołkami, które są wstępnie nasycone odpowiednim antygenem. Ponadto procedura jest następująca:
surowica jest stosowana do wszystkich komórek;
homologiczne przeciwciała reagują z antygenem i przyłączają się do płytki;
tabletka myta, usuwanie niezwiązanych przeciwciał;
następnie do komórek wprowadzana jest etykieta enzymatyczna - substancja, która reaguje z przeciwciałami i powoduje zabarwienie zawartości komórki.
Jest to standardowa procedura ELISA z barwieniem, która jest stosowana, na przykład, w immunochromatograficznych paskach testowych.
ELISA nie ogranicza się do jakościowego oznaczania przeciwciał lub antygenów patogenu. Im więcej przeciwciał jest zawartych w komórkach tabletki, tym bardziej intensywny jest barwiony roztwór. Porównując gęstość optyczną z kontrolą, nowoczesny sprzęt może dość dokładnie obliczyć stężenie przeciwciał na jednostkę objętości. Zatem przeprowadza się ilościowy test ELISA, miarą pomiaru, przy której najczęściej są jednostki gęstości optycznej (EOP).
Analiza immunochemiluminescencyjna
Dzisiaj istnieje kilkadziesiąt typów ELISA, z których każdy ma preferowany zakres. Najpopularniejszą w diagnostyce zapalenia wątroby typu B jest analiza immunochemiluminescencyjna.
Etykieta enzymatyczna dla tej analizy nie jest chromatyną, jak w standardowym teście ELISA, ale specjalnymi substancjami - luminoforami, które powodują, że kompleks świeci w świetle ultrafioletowym.
Za pomocą specjalnego urządzenia - luminometru, można dokładnie określić poziom emisji iw konsekwencji stężenie pożądanej substancji.
Stosowanie metod ELISA określa prawie wszystkie istniejące antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B i przeciwciała na nie.
Antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B: Hbs, Hbe i Hbc
Termin antygen (antygen) pochodzi od dwóch angielskich słów: przeciwciało - przeciwciało i generator - producent. Tak więc pod antygenem rozumie się każdą substancję, która powoduje powstawanie przeciwciał w organizmie. Najczęstszymi antygenami są związki białkowe.
Obecnie znane są trzy antygeny wirusa zapalenia wątroby typu B: hbsag, hbc i hbe.
Australijski antygen
Białko, które jest częścią zewnętrznej powłoki patogennego zapalenia wątroby typu B, wykryto na długo przed odkryciem samego wirusa. Antygen ten otrzymał swoją nazwę, ponieważ po raz pierwszy został zidentyfikowany przez rdzennych mieszkańców Australii. Jednak początkowo białko nie było uważane za antygen, ale całkowicie normalny element krwi wśród tubylców, a świadomość jego związku z chorobami wątroby pojawiła się nieco później.
Długotrwałe zachowanie antygenu we krwi i brak przeciwciał wskazuje na możliwość powstania przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu B HBeAg
Dzisiaj w literaturze fachowej nazwa „antygen australijski” praktycznie nie występuje i została zastąpiona przez międzynarodowy skrót - HbsAg (antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu b - antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B). Ponadto można znaleźć skróty hbs antygen lub tylko hbs. Każdy z tych skrótów jest akceptowalny i może zostać uzupełniony poprzez rejestrację HBV lub HBV - wirusa zapalenia wątroby typu B (wirus zapalenia wątroby typu B).
Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B ma jedną niezwykłą cechę, która czyni go niezastąpionym markerem diagnostycznym - jego stężenie we krwi może osiągnąć bardzo wysoki poziom, do pół miligrama na mililitr krwi. Dzieje się tak dlatego, że tylko niewielka część nowych HBsAg, które powstają podczas reprodukcji wirusa zapalenia wątroby typu B, przechodzi do budowy błon nowych cząstek wirusowych, a reszta - swobodnie krąży we krwi. W rezultacie liczba cząstek hbs we krwi może przekroczyć liczbę wirionów setki tysięcy razy.
Ta cecha czyni australijski antygen głównym markerem w diagnostyce przesiewowej wirusowego zapalenia wątroby typu B, która znajduje się we krwi już 4-6 tygodni po zakażeniu. Gdy tworzą się przeciwciała, antygen powierzchniowy jest stopniowo zastępowany przez nie. Jeśli po 6 miesiącach HBsAg utrzymuje się, oznacza to przejście zakażenia do postaci przewlekłej.
Ostatnio, kiedy stało się możliwe określenie stężenia hbs hbv, jego rola w diagnostyce wzrosła jeszcze bardziej, ponieważ poleganie na poziomie antygenu może odróżnić przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B (HBV) od stanu zdrowego nosiciela, a także monitorować skuteczność leczenia.
Antygeny rdzeniowe
W rdzeniu wirusa - nukleokapsydu - znajdują się białka kontrolujące rozmnażanie wirusa HBcoreAg i HBeAg.
HBcoreAg, który może być również nazywany antygenem HBCore, hbc lub antygenem rdzeniowym, można znaleźć tylko w tkankach wątroby, bezpośrednio w jądrach hepatocytów. Antygen ten nie jest wykrywany we krwi i nie ma wartości diagnostycznej.
Struktura wirusa zapalenia wątroby
HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - przeciwnie, odgrywa ważną rolę w diagnozie. HBeAg i HBcoreAg są bliskimi krewnymi. Mają duże podobieństwo struktury i różnią się głównie przestrzennym położeniem cząsteczek. W przeciwieństwie do HBcore, HBe nie jest częścią ściany nukleokapsydu i krąży swobodnie we krwi.
Rola HBe w procesie zakaźnym nie jest wystarczająco jasna, jednak cechy jej zachowania i ich związek z przebiegiem procesu zakaźnego zostały już wystarczająco zbadane. HBeAg wskazuje na aktywną reprodukcję wirusa i pozwala na wiarygodne określenie fazy przewlekłej CHB - HBeAg-dodatniej lub HBeAg-ujemnej.
HBe można wykryć we krwi już w okresie inkubacji ostrego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV), podczas gdy wysokie stężenie HBeAg przez 3 tygodnie najprawdopodobniej wskazuje na zagrożenie przewlekłym procesem. Stężenie HBe jest bezpośrednio związane z zawartością cząstek Dane (tak zwane cząsteczki wirusa zapalenia wątroby typu B) - im wyższa ilość HBe, tym wyższe stężenie DNA HBV we krwi.
HBeAg jest głównym markerem zakaźności choroby. Krew pacjentów z dodatnim mianem HBeAg jest znacznie bardziej zaraźliwa niż HBeAg-ujemna. Na przykład u kobiet ciężarnych z dodatnim wynikiem oznaczenia HBe i Hbs prawdopodobieństwo przeniesienia zakażenia na dziecko osiąga 50%, podczas gdy prawdopodobieństwo wystąpienia takiego zdarzenia w HBe-ujemnym, ale Hbs pozytywnych matek wynosi 10-30%.
Hbe określa przebieg przewlekłego zapalenia wątroby. HBeAg-dodatnie przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B ma znacznie gorsze rokowanie pod względem rozwoju marskości wątroby.
To prawdopodobnie wszystko, co musisz wiedzieć o antygenach HBV i przechodzimy do drugiej grupy markerów zapalenia wątroby typu B - przeciwciał.
Istota i diagnoza zapalenia wątroby typu B
Gdy tylko scena zamienia się w żółtaczkę, powłoki i błony śluzowe zaczynają żółknąć, stan zdrowia gwałtownie się pogarsza. Ważne jest, aby podkreślić, że wątroba powiększa się i wystaje spod łuku żebrowego. Barwienie skóry w żółtym odcieniu następuje stopniowo. Ilość enzymów wątrobowych rośnie we krwi, a próbka tymolu nie zmienia się.
Diagnozowanie choroby: podstawowe metody i koncepcje
Diagnozę zapalenia wątroby typu B przeprowadza się na kilka sposobów:
1. Przede wszystkim lekarz musi przeprowadzić wywiad i przeprowadzić dokładne badanie osoby. Podczas badania duży nacisk kładziony jest na takie momenty jak:
- czy wprowadzenie leków lub innych środków dożylnych;
- czy były transfuzje krwi;
- czy przeprowadzono zabiegi chirurgiczne;
- czy wystąpiło uszkodzenie integralności skóry;
- jakie są związki seksualne;
- czy pacjent miał kontakt z pacjentem z wirusowym zapaleniem wątroby typu B lub jego nosicielem.
Jeśli wystąpił którykolwiek z tych elementów, określa się, jak długo. Zazwyczaj zakażenie występuje, gdy kontaktuje się z 6 tygodni do 6 miesięcy przed wystąpieniem pierwszych objawów zapalenia wątroby.
2. Diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby typu B, analiza ELISA krwi pod kątem antygenów i przeciwciał przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B. Ten typ badania ma na celu identyfikację 3 antygenów:
- HBsAg (antygen, zlokalizowany powierzchniowo),
- HBcAg (znajduje się w środku)
- HBeAg (połączony z poprzednim antygenem). Choroba charakteryzuje się wczesnym wykrywaniem tych antygenów we krwi.
Osoby cierpiące na wirusowe zapalenie wątroby typu B i zawierające te antygeny we krwi są bardzo zaraźliwe. Są w stanie zarazić innych ludzi. Jeśli HBsAg nie występuje w ludzkiej krwi, oznacza to, że jest zdrowy. Jeśli dana osoba jest chora, ciało zaczyna wydzielać przeciwciała na istniejące antygeny.
3. Diagnoza zapalenia wątroby typu B przy użyciu techniki PCR zaprojektowanej do wykrywania DNA HBV w układzie krążenia. Jeśli wynik jest pozytywny, osoba ma zapalenie wątroby. Analizę DNA HBV nazywa się jakościową. Istnieje również ilościowa PCR. Ilościowa reakcja PCR daje możliwość identyfikacji obciążenia przy obecności wirusa zapalenia wątroby. Co to jest ładunek wirusowy? Jest to liczba kopii DNA HBV w 1 ml krwi. Ilościowa analiza zapalenia wątroby pokazuje aktywność wirusa.
4. Badanie krwi pod kątem biochemii. Analiza ta polega na określeniu liczby enzymów wytwarzanych przez wątrobę. Takie enzymy obejmują ALT, AST. Znajdują się one wewnątrz komórek wątroby - hepatocytów. Jeśli komórki wątroby są uszkodzone, enzymy są uwalniane i wchodzą do krwi. Analiza dodatnia jest brana pod uwagę tylko wtedy, gdy liczba enzymów wątrobowych przekracza normę. Badanie wskazuje, czy w wątrobie występują procesy zapalne i ich aktywność.
5. Badanie ultrasonograficzne, elastometria itp. Diagnozę zapalenia wątroby można przeprowadzić i metody nielaboratoryjne. Korzystanie z ultradźwięków bada narządy jamy brzusznej. Ultradźwięki dają wyraźny obraz w każdym procesie zapalnym wątroby i jej naczyń. Skutecznie przewodząca elastometria wątroby. Metoda elastometryczna daje wyobrażenie o stopniu zwłóknienia w tkance wątroby.
6. Najważniejszą analizą jest obecność antygenów wirusa zapalenia wątroby typu B w masie krwinek czerwonych, jeśli istnieją, wskazuje to na obecność zakażenia w organizmie człowieka.
7. Laboratoryjny typ diagnozy zapalenia wątroby obejmuje oznaczanie antygenów i przeciwciał w masie erytrocytów. Najczęstszy HBsAg manifestuje się w układzie krążenia nawet w okresie inkubacji zapalenia wątroby. Osoba nie wie o rozwoju swojej choroby, a zmiany krwi są już w toku. Gdy zapalenie wątroby jest ostre, HBsAg znika z krwi. Zwykle HBsAg nie występuje w pierwszym miesiącu okresu żółtaczki, a przeciwciała przeciwko temu antygenowi zaczynają powstawać w układzie krążenia 90 dni po zakażeniu.
Pozytywny wynik testu na obecność przeciwciał nie oznacza, że dana osoba ma zapalenie wątroby. Możliwe, że wcześniej cierpiał na zapalenie wątroby bez D-agent. Jeśli po zabiegu nie ma HBsAg we krwi pacjenta, ale istnieją przeciwciała, wskazuje to na dobre rokowanie wskazujące na powrót pacjenta do zdrowia. Jeśli pacjent ma przewlekłe lub ciężkie zapalenie wątroby, wówczas przeciwciała mogą pojawić się już od pierwszych dni okresu żółtaczki.
Niezawodnym odpowiednikiem jest IgM anty-HBc we krwi. Są one ujawniane pod koniec okresu przedterminowego. Są obecne przez cały okres oczywistych manifestacji. Jeśli analiza zawiera IgM anty-HBc, oznacza to, że wirus nadal się rozmnaża. Po rozpoczęciu regeneracji anty-HBc IgM znika. Ostra faza choroby może wywołać test anty-HBc IgG. Zostaną wykryte przez całe życie danej osoby.
Po zakończeniu okresu inkubacji zapalenia wątroby (zwłaszcza autoimmunologicznej) HBeAg zaczyna pojawiać się we krwi. Informują o aktywnym podziale i wzroście cząstek zakaźnych. Jak tylko rozpocznie się okres lodowaty, NVAAg znika. Zastępuje go anty-HBe. Anty-HBe wskazuje, że aktywność infekcji jest zmniejszona i wkrótce nastąpi powrót do zdrowia. Ale reprodukcja wirusa nie zatrzymuje się!
Ostre zapalenie wątroby może przekształcić się w przewlekłe. O tym przemówi zidentyfikowany we krwi HASAg. Jeśli jest obecny, oznacza to, że prawdopodobieństwo przekształcenia procesu w formę przewlekłą jest wysokie. Obecność HeVag wskazuje na wysoce zaraźliwego pacjenta.
Należy pamiętać, że diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby typu B, która daje negatywny wynik dla HBsAg, nie wyklucza samej diagnozy. Ważnym elementem kluczowym jest obecność anty-HBc IgM we krwi. Te przeciwciała potwierdzą chorobę z dokładnością. Jeśli badanie krwi nie zawiera IgM anty-HBc, może to wskazywać na obecność HBV, a obecność tych przeciwciał wskazuje na nasilenie zakażenia.
Wykrywanie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B.
Najważniejszym badaniem w celu określenia obecności DNA wirusa jest PCR. Analiza wskazuje na aktywność procesu zakaźnego. Dzięki tej metodzie możesz dowiedzieć się o prognozie choroby.
Jeśli zapalenie wątroby jest bardziej korzystne, DNA HBV znika z krwi w początkowych okresach procesu infekcji. Diagnostyka laboratoryjna w postaci PCR dostarcza danych na temat jakości leczenia (działa na konkretny lek).
Aby zrozumieć, jakie taktyki należy zastosować przy wyznaczaniu środków terapeutycznych, konieczne jest przeprowadzenie ilościowej metody PCR. Ilościowa PCR dostarcza dowodów na pozytywną reakcję terapii.
Podstawa diagnozy
Aby dokonać właściwej diagnozy, wymagane będą następujące badania:
- Codzienna kontrola, badanie dotykowe.
- USG wątroby.
- Analiza biochemiczna krwi (powtarzana).
- Badanie na obecność HBsAg, HBeAg, anty-HBe, anty-HBc IgM, anty-HBc DNA, HBV DNA.
- Markery HBV i HCV (wirusowe zapalenie wątroby jest wykluczone).
- Nakłucie wątroby.
- Biopsja wątroby. Za pomocą specjalnej igły nakłuwa się ścianę brzucha i pobiera niewielki kawałek wątroby do badania histologicznego (kawałek ma rozmiar nie większy niż pół grama). Biopsja to najnowsza metoda testowania zapalenia wątroby. Dzięki niej możesz najdokładniej mówić o stopniu aktywności procesu zakaźnego, zwłóknieniu wątroby. Biopsja to zabieg chirurgiczny. Może to prowadzić do powikłań, dlatego często nie jest używane do diagnozy.
- Fibroelastografia. Można go użyć do oszacowania gęstości tkanki wątroby. Technika jest podobna do ultradźwięków. Badanie wykorzystuje specjalny czujnik, który jest zainstalowany na skórze w miejscu projekcji wątroby.
- Fibrotest. Opiera się na liczeniu pewnych morfologii krwi.
Przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B
Faza przewlekłego zapalenia wątroby typu B:
Faza 1 - Replikacja wirusa. Wirus mnoży się dzięki zwiększonej aktywności.
Faza 2 - integracja. Wirus przestaje się rozmnażać. Genom wirusa zaczyna się integrować z DNA normalnych komórek wątroby, hepatocytów.
Aby określić szybkość progresji wirusa, ważne jest zrozumienie ciężkości procesu, wyniku, stopnia zakłócenia komórek wątroby. Diagnostyka laboratoryjna przewlekłego zapalenia wątroby opiera się na wykryciu:
Jeśli dodatni wynik HBeAg na zapalenie wątroby (analiza dodatnia), w masie erytrocytów będzie:
- w stadium hodowlanym - HBsAg, HBeAg, anty-HBc IgM, anty-HBc (całkowita), HBV DNA;
- na etapie wprowadzania hepatocytów do DNA - HBsAg, anty-HBe, anty-HBc (całkowita), HBV DNA.
Jeśli zapalenie wątroby jest seronegatywne, to w masie krwi będzie obecny HBsAg, anty-HBe, anty-HBc IgM, anty-HBc, HBV DNA. Co więcej, ich obecność w żaden sposób nie zależy od etapu procesu zakaźnego.
Diagnostyka różnicowa
Dokonując diagnozy, lekarz jest zobowiązany do odróżnienia wirusowego zapalenia wątroby typu B od innych chorób - wirusowego zapalenia wątroby typu A, C, E, D. Ostateczną diagnozę można postawić dopiero po zidentyfikowaniu w masie krwi określonych markerów specyficznych dla każdej z komórek zapalenia wątroby.
Zapalenie wątroby należy odróżnić od innych ważnych chorób: ostrych infekcji wirusowych dróg oddechowych, kamieni żółciowych, zatrucia pokarmowego, infekcji jelit, patologii chirurgicznej narządów jamy brzusznej i wielu innych chorób.
Autoimmunologiczne zapalenie wątroby
W przypadku autoimmunologicznego zapalenia wątroby diagnoza obejmuje następujące najważniejsze badania:
- Analiza masy krwinek czerwonych (OAK). Wyjaśnienie: niedokrwistość (normocytowa) we krwi obserwuje się w autoimmunologicznym zapaleniu wątroby, zmniejszonej zawartości leukocytów, płytek krwi i zwiększonym ROE. Ale można spodziewać się wyższego stopnia niedokrwistości.
- Mocz. Rozszyfrowanie analizy moczu: zawiera białko, czerwone krwinki, bilirubinę.
- Badanie krwi na biochemię. Bardzo istotna analiza. Interpretacja: zwiększona ilość bilirubiny, zwiększona arginaza, zmniejszenie albuminy, wzrost γ-globulin i test tymolowy. Test sublimacji jest ograniczony. Niektóre wskaźniki można zwiększyć o 2 lub więcej razy. Jest to pozytywny wynik testu na autoimmunologiczne zapalenie wątroby.
- Analiza immunologiczna. Dekodowanie: zmniejszają się supresory limfocytów T, pojawiają się komórki tocznia w masie erytrocytów, zwiększa się liczba immunoglobulin, przeciwciała przeciwko erytrocytom.
Pozytywny wynik testu na zapalenie wątroby można wykryć metodą serologiczną badań. Autoimmunologiczne zapalenie wątroby jest chorobą heterogeniczną.
ELISA na wirusowe zapalenie wątroby
9 marca 2017, 16:25 Artykuły eksperckie: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3 608
Aby wykryć wirusowe zapalenie wątroby w organizmie, w medycynie szeroko stosuje się enzymatyczny test immunologiczny oparty na wykrywaniu stężenia i rodzaju antygenów przy użyciu przeciwciał i enzymów. Jest przeprowadzany etapami, przez badania laboratoryjne, z dużą dokładnością wskazań. W zależności od ilości i klasy przeciwciał, kolor i stężenie enzymu, który wykorzystuje ELISA, a zatem lekarz diagnozuje chorobę, zmienia się.
Co to jest ELISA?
Obecność wirusowego zapalenia wątroby w ciele pacjenta określa się za pomocą serologicznej metody analizy krwi na obecność wirusa HCV i markerów (ciał i przeciwciał), wskazując na to. Test immunoenzymatyczny (ELISA) bada różne wirusy, związki o niskiej masie cząsteczkowej, makrocząsteczki, ich wskaźniki jakościowe i ilościowe, wykorzystując manifestację reakcji na ich antygeny. Aby to zrobić, użyj enzymu jako etykiety do rejestracji sygnału. Jest on coraz częściej stosowany w medycynie, ponieważ ELISA wyraźnie znajduje dobrze zdefiniowane antygeny, nie myląc ich z innymi, ma wysoką wrażliwość na obecność inwazji wirusowego zapalenia wątroby.
Wadą takiej diagnozy jest niemożność zidentyfikowania przyczyny choroby, ponieważ metoda ta wskazuje jedynie na reakcję układu odpornościowego organizmu. Na wyniki analizy mają wpływ przeprowadzone wcześniej szczepienia. Na 8 godzin przed analizą zaleca się powstrzymanie się od jedzenia, nikotyny, alkoholu. Podstawą testu ELISA jest enzymatyczna i immunologiczna odpowiedź organizmu na wirusa. Cząsteczki biologiczne wiążą się z komórką i jej elementami, mikroorganizmami, wykrywają wirusa, a następnie pracują z enzymami, które pozwalają wyrazić odpowiedź immunologiczną w widocznym i mierzalnym parametrze.
Wskazania do analizy
Wirusowe zapalenie wątroby w organizmie może powodować raka i marskość wątroby. Znaczenie terminowej diagnozy jest bezsporne. Podstawową metodą diagnozy jest test ELISA, który z dużą dokładnością określa obecność wirusa HCV (IgM i IgG) oraz aktywność jego pierwiastków śladowych. Obowiązkowe testy na wirusowe zapalenie wątroby przebiegają:
- Ludzie z grupami ryzyka (narkomani, osoby z AIDS, pracownicy instytucji medycznych i organów ścigania).
- Osoby z ostrym lub przewlekłym zapaleniem wątroby.
- Kobiety w ciąży i planujące ciążę.
ELISA rozpoznaje chorobę na każdym etapie. Wyniki analizy są średnio gotowe za 2 dni.
Kryteria określające znaczenie analizy
Test ELISA określa obecność przeciwciał klasy IgG, IgM, IgA. Podczas diagnozowania wirusowego zapalenia wątroby lekarz nie zwraca uwagi na ich rodzaj, ponieważ obecność takich objawów wirusa HCV wskazuje już na ostry lub przewlekły stan choroby. We wczesnych stadiach choroby poziom IgM wzrasta (5 dni po zakażeniu); 15 - 20 dnia pojawiają się przeciwciała IgG i mogą pozostawać w ludzkiej krwi przez długi czas, nawet po wyleczeniu; IgA - pojawia się po 10-14 dniach, zmniejsza się po leczeniu.
Jeśli IgG i IgA zostaną wykryte po zastosowaniu leków i ich poziom pozostanie na tym samym poziomie - nosiciel ma przewlekłą postać zapalenia wątroby. Ważnym kryterium testu będzie jasna definicja klasy dostępnych przeciwciał i ich ilości. Na tej podstawie można poznać nie tylko obecność choroby, ale także etap jej rozwoju. Wykrycie takich elementów we krwi pacjenta umożliwia przepisanie właściwego i terminowego leczenia, aby zapobiec poważniejszym konsekwencjom.
Jak to się robi?
Przydziel bezpośredni i nie bezpośredni test ELISA. Etapy bezpośrednie:
- Zbieranie materiału biologicznego i umieszczanie go w specjalnych otworach.
- W ciągu 15-30 minut antygeny są przymocowane do powierzchni studzienek.
- Dodanie przeciwciał do studzienek do znalezionego antygenu. Wszystko zostało na 1-5 godzin.
- Usuń niezwiązane antygeny (wlewając zawartość studzienek).
- Wypłukać studzienki specjalnym roztworem.
- Dodaj roztwór enzymu do dołków. Pozostaw na 30 minut - 1 godzinę.
- Zastosowanie kolorymetrii (wykrywanie koloru i stężenia koloru zawartości studni, porównanie ze wskaźnikami, które są wprost proporcjonalne do stężenia wirusa).
Pośrednia metoda ELISA odbywa się przy użyciu nieznakowanych przeciwciał wobec znalezionych antygenów i późniejszego dodania do nich oznakowanych. Najpierw pobiera się krew od pacjenta i rozprowadza przez studzienki na 15-30 minut. (przeciwciała są unieruchomione otworami). Następnie nieznakowane przeciwciała wprowadza się do nich przez 1–5 godzin (powstaje połączenie przeciwciał z antygenami - kompleks immunologiczny). Następnie niezwiązane mikroelementy wylewa się ze studzienek i przemywa specjalnym roztworem. W następnym etapie technik laboratoryjny dodaje oznakowane pierwiastki śladowe do studzienek na 15-30 minut. (wiąże się to z niewyznakowanym znacznikiem z utworzeniem złożonego „przeciwciała-antygenu-antygenu”). Extra (luźne) są ponownie usuwane podczas opróżniania i mycia roztworem. Następnie jest enzym, który zmienia kolor w ciągu 5-30 minut. Pozostaje w otworach i dane kolorów są porównywane z danymi wskaźników tabeli. Pośredni test ELISA jest bardziej dokładny.
Co pokazuje test ELISA na wirusowe zapalenie wątroby?
ELISA pozwala wykryć obecność infekcji (wirusy zapalenia wątroby wszelkiego rodzaju, HIV, opryszczka, syfilis, wirus cytomegalii, odra, różyczka, wirus świnki, wirus Epsteina-Barr), jest markerem chorób autoimmunologicznych, komórek nowotworowych. Wskazuje na naruszenia funkcji rozrodczych (zmiany w testosteronie, prolaktynie, estradiolu i progesteronie), zaburzenia czynności tarczycy, inwazja robaków, chlamydia. Skuteczny w wykrywaniu ureaplazmozy, kokluszu, wirusa Dange, wirusa Zachodniego Nilu, Borrelia. Lista definicji jest wysoka, zawiera wiele elementów.
Potwierdzenie wyników
Oznaczenie antygenu wirusa HCV metodą ELISA daje 98% dokładności. Służy również do ponownego przetestowania materiału biologicznego z rozmytymi wcześniejszymi wskaźnikami. Obecność antygenów IgM nie jest wskaźnikiem ostrego zapalenia wątroby i wymaga dodatkowych badań. Po powtórzeniu testu ELISA wyniki pokrywają się w 90–100%. W przypadkach minimalnej rozbieżności wartość średnia jest traktowana jako wskaźnik. Dla maksymalnej dokładności lekarze zalecają równolegle przeprowadzenie biochemicznej analizy krwi. Aby przetestować wyniki po teście immunoenzymatycznym, można użyć innych metod diagnostycznych.
Badania nad wirusem zapalenia wątroby typu B (ELISA i PCR)
Antygen „s” wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg)
Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B w surowicy zwykle nie występuje.
Wykrycie antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg) w surowicy potwierdza ostre lub przewlekłe zakażenie wirusem zapalenia wątroby typu B.
W ostrej chorobie HBsAg wykrywa się w surowicy w ciągu ostatnich 1-2 tygodni okresu inkubacji i pierwszych 2-3 tygodni okresu klinicznego. Krążenie HBsAg we krwi może być ograniczone do kilku dni, dlatego należy dążyć do wczesnego wstępnego badania pacjentów. Metoda ELISA pozwala wykryć HBsAg u ponad 90% pacjentów. Prawie u 5% pacjentów najbardziej czułe metody badawcze nie wykrywają HBsAg, w takich przypadkach etiologię wirusowego zapalenia wątroby typu B potwierdza obecność antygenu HBcAg JgM lub PCR.
Stężenie HBsAg w surowicy we wszystkich postaciach ciężkości zapalenia wątroby typu B na wysokości choroby ma znaczny zakres wahań, jednak istnieje pewien wzorzec: w okresie ostrym występuje odwrotna zależność między stężeniem HBsAg w surowicy a ciężkością choroby.
Wysokie stężenia HBsAg występują częściej w łagodnych i umiarkowanych postaciach choroby. W ciężkich i złośliwych postaciach stężenie HBsAg we krwi jest często niskie, a u 20% pacjentów z ciężką postacią i 30% ze złośliwym antygenem we krwi może nie być w ogóle wykrywane. Pojawienie się na tym tle u pacjentów z przeciwciałami przeciwko HBsAg jest uważane za niekorzystny znak diagnostyczny; określa się ją w złośliwych postaciach zapalenia wątroby typu B.
W ostrym przebiegu wirusowego zapalenia wątroby typu B stężenie HBsAg we krwi stopniowo zmniejsza się aż do całkowitego zaniku tego antygenu. HBsAg znika u większości pacjentów w ciągu 3 miesięcy od wystąpienia ostrej infekcji.
Zmniejszenie stężenia HBsAg o ponad 50% do końca trzeciego tygodnia ostrego okresu, co do zasady, wskazuje na zakończenie procesu infekcji. Zwykle u pacjentów z wysokim stężeniem HBsAg na wysokości choroby, jest wykrywany we krwi przez kilka miesięcy.
U pacjentów z niskim stężeniem HBsAg zanika znacznie wcześniej (czasami kilka dni po wystąpieniu choroby). Ogólnie czas wykrywania HBsAg wynosi od kilku dni do 4-5 miesięcy. Maksymalny okres wykrywania HBsAg przy łagodnym przebiegu ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B nie przekracza 6 miesięcy od początku choroby.
HBsAg można znaleźć u ludzi zdrowych, co do zasady, w badaniach profilaktycznych lub przypadkowych. W takich przypadkach bada się inne markery wirusowego zapalenia wątroby typu B, anty-HBcAg JgM, anty-HBcAg JgG, anty-HBeAg i bada się czynność wątroby.
W przypadku wyników negatywnych konieczne są powtarzane badania HBsAg.
Jeśli powtarzane badania krwi przez ponad 3 miesiące ujawnią HBsAg, pacjent ten jest klasyfikowany jako przewlekły pacjent z wirusowym zapaleniem wątroby typu B.
Obecność HBsAg jest dość powszechna. Na świecie jest ponad 300 milionów przewoźników, aw naszym kraju jest około 10 milionów przewoźników.
Zakończenie krążenia HBsAg z następującą potem serokonwersją (tworzenie anty-HBs) zawsze wskazuje na wyzdrowienie - sanację ciała.
Badanie krwi na obecność HBsAg stosuje się w następujących celach:
- okres inkubacji;
- ostra choroba;
- wczesne wyleczenie;
- przewlekłe przewlekłe zapalenie wątroby;
- marskość wątroby;
do badań przesiewowych i identyfikacji pacjentów w grupach ryzyka:
Ocena wyników badań
Wyniki badania są wyrażone jakościowo - pozytywne lub negatywne. Wynik negatywny wskazuje na brak HBsAg w surowicy. Wynik pozytywny - identyfikacja HBsAg wskazuje na inkubację lub ostry okres ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B, a także na przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B.
Przeciwciała przeciwko jądrowemu antygenowi wirusa zapalenia wątroby typu B JgG (anty-HBcAg JgG)
Zwykle w surowicy nie ma przeciwciał anty-HBcAg.
U pacjentów z anty-HBcAg JgG pojawia się w ostrym okresie wirusowego zapalenia wątroby typu B i utrzymuje się przez całe życie. Anty-HBcAg JgG jest wiodącym markerem przenoszonego HBV.
Testy krwi na anty-HBcAg JgG są wykorzystywane do diagnozowania:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Negatywny wynik wskazuje na brak surowicy anty-HBcAg JgG. Wynik pozytywny - identyfikacja JgG anty-HBcAg wskazuje na ostrą infekcję, rekonwalescencję lub wcześniej przeniesione wirusowe zapalenie wątroby B.
Antygen „e” wirusa zapalenia wątroby typu B (HBeAg)
Zwykle nie ma HBeAg w surowicy.
HBeAg można znaleźć w surowicy większości pacjentów z ostrym wirusowym zapaleniem wątroby typu B. Zwykle znika we krwi przed antygenem HBs. Wysoki poziom HBeAg w pierwszych tygodniach choroby lub jej wykrycie przez ponad 8 tygodni daje powód do podejrzenia przewlekłego zakażenia.
Antygen ten jest często wykrywany w przewlekłym aktywnym zapaleniu wątroby o etiologii wirusowej. Szczególnie interesujące w definicji HBeAg jest fakt, że jego wykrywanie charakteryzuje aktywną fazę replikacyjną procesu zakaźnego. Ustalono, że wysokie stężenia HBeAg odpowiadają wysokiej aktywności polimerazy DNA i charakteryzują aktywną replikację wirusa.
Obecność HBeAg we krwi wskazuje na jego wysoką zakaźność, tj. obecność aktywnego zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B w badanym ciele i jest wykrywana tylko w obecności antygenu HBs we krwi. U pacjentów z przewlekłym czynnym zapaleniem wątroby leki przeciwwirusowe stosuje się tylko wtedy, gdy we krwi wykryto HBeAg. HBeAg - antygen - marker ostrej fazy i replikacji wirusa zapalenia wątroby typu B.
Do diagnozy stosuje się badanie krwi na obecność antygenu HBe:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Negatywny wynik wskazuje na brak HBeAg w surowicy. Wynik pozytywny - wykrycie HBeAg wskazuje na inkubację lub ostry okres ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B lub ciągłą replikację wirusa i zakaźność pacjenta.
Przeciwciała na antygen „e” wirusa zapalenia wątroby typu B (anty-HBeAg)
Anty-HBeAg w surowicy zwykle nie występuje. Pojawienie się przeciwciał anty-HBeAg zazwyczaj wskazuje na intensywne usunięcie z organizmu wirusa zapalenia wątroby typu B i niewielkie zakażenie pacjenta.
Przeciwciała te pojawiają się w okresie ostrym i utrzymują się do 5 lat po zakażeniu. W przewlekłym przewlekłym zapaleniu wątroby anty-HBeAg znajduje się we krwi pacjenta wraz z HBsAg. Serokonwersja, tj. przejście HBeAg na anty-HBeAg, z przewlekłym aktywnym zapaleniem wątroby, częściej korzystne pod względem prognostycznym, ale ta sama serokonwersja nie poprawia rokowania ciężkiej marskości wątroby.
Badania krwi na obecność anty-HBeAg są stosowane w następujących przypadkach w diagnostyce wirusowego zapalenia wątroby typu B:
Ocena wyników badań
Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywnie lub negatywnie. Wynik negatywny wskazuje na brak przeciwciał przeciwko HBeAg w surowicy. Pozytywnym wynikiem jest wykrycie przeciwciał przeciwko HBeAg, które mogą wskazywać na początkowy etap ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B, ostry okres zakażenia, wczesny etap rekonwalescencji, rekonwalescencję, niedawno przeniesione wirusowe zapalenie wątroby typu B lub uporczywe wirusowe zapalenie wątroby typu B.
Kryteriami obecności przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu B są:
Wykrywanie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR (jakościowo)
Wirus zapalenia wątroby typu B we krwi zwykle nie występuje.
Jakościowe oznaczenie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR we krwi pozwala potwierdzić obecność wirusa w ciele pacjenta i tym samym ustalić etiologię choroby.
Badanie to dostarcza użytecznych informacji do diagnozy ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B w inkubacji i wczesnych stadiach rozwoju choroby, gdy główne markery serologiczne pacjenta we krwi mogą być nieobecne. DNA wirusa w surowicy wykrywa się u 50% pacjentów przy braku HBeAg. Czułość analityczna metody PCR wynosi nie mniej niż 80 cząstek wirusowych w 5 μl, ostatnia próbka do wykrywania DNA, swoistość - 98%.
Ta metoda jest ważna dla diagnozowania i monitorowania przebiegu przewlekłego HBV. Około 5-10% przypadków marskości wątroby i innych przewlekłych chorób wątroby jest spowodowanych przewlekłym nosicielem wirusa zapalenia wątroby typu B. Markerami aktywności takich chorób są obecność HBeAg i DNA wirusa zapalenia wątroby typu B we krwi.
Metoda PCR umożliwia oznaczenie we krwi DNA wirusa zapalenia wątroby typu B zarówno pod względem jakościowym, jak i ilościowym. Określony fragment w obu przypadkach jest unikalną sekwencją DNA genu białka strukturalnego wirusa zapalenia wątroby typu B.
Wykrywanie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B w biomateriałach za pomocą PCR jest konieczne dla:
Zniknięcie DNA wirusa zapalenia wątroby typu B z krwi jest oznaką skuteczności terapii
Wykrywanie wirusa zapalenia wątroby typu B metodą PCR (ilościowe)
Ta metoda dostarcza ważnych informacji o intensywności rozwoju choroby, skuteczności leczenia i rozwoju oporności na aktywne leki.
Do diagnozy wirusowego zapalenia wątroby metodą PCR w surowicy stosuje się systemy testowe, których czułość wynosi 50-100 kopii w próbce, co umożliwia wykrycie wirusa w stężeniu 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopii / ml. PCR w wirusowym zapaleniu wątroby typu B jest zdecydowanie niezbędny do oceny replikacji wirusa.
DNA wirusa w surowicy wykrywa się u 50% pacjentów przy braku HBeAg. Surowica krwi, limfocyty i hepatobiopsja mogą służyć jako materiał do wykrywania DNA wirusa zapalenia wątroby typu B.
- Ocena poziomu wiremii jest następująca:
- mniej niż 2,10 ^ 5 kopii / ml (mniej niż 2,10 ^ 5 IU / ml) - niska wiremia;
- od 2,10 ^ 5 kopii / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) do 2,10 ^ 6 kopii / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - średnia wiremia;
- ponad 2,10 ^ 6 kopii / ml - wysoka wiremia.
Istnieje związek między wynikiem ostrego wirusowego zapalenia wątroby typu B a stężeniem DNA HBV we krwi pacjenta. Przy niskim poziomie wiremii proces chronizacji infekcji jest bliski zeru, przy średniej, proces jest chroniczny u 25-30% pacjentów, a przy wysokim poziomie wiremii, ostre wirusowe zapalenie wątroby typu B najczęściej staje się przewlekłe.
Wskazania do leczenia przewlekłego interferonu-alfa HBV należy uznać za obecność markerów aktywnej replikacji wirusa (wykrywanie HBV HBV, HBeAg i DNA HBV w surowicy krwi w ciągu ostatnich 6 miesięcy).
Kryteriami oceny skuteczności leczenia jest zanik HBEAg i DNA HBV we krwi, któremu zwykle towarzyszy normalizacja poziomów transaminaz i długotrwała remisja choroby, DNA HBV znika z krwi do 5 miesiąca leczenia u 80% pacjentów. Zmniejszenie poziomu wiremii o 85% lub więcej w trzecim dniu od rozpoczęcia leczenia w porównaniu z wartością wyjściową jest szybkim i dość dokładnym kryterium przewidywania skuteczności terapii.
Badania nad wirusowym zapaleniem wątroby metodą ife
ELISA w diagnostyce wirusowego zapalenia wątroby. Test immunoenzymatyczny
Konkretna diagnostyka laboratoryjna wirusowego zapalenia wątroby opiera się na zastosowaniu metod badań immunochemicznych i molekularnych. Główne metody immunochemiczne to radioizotop lub radioimmunologiczny (RIA) i test immunologiczny (ELISA). Immunochemiczne metody diagnostyczne opierają się na specyficznej interakcji antygenu - przeciwciała z późniejszą identyfikacją kompleksu za pomocą specjalnych etykiet. Najbardziej powszechny test immunoenzymatyczny.
Pierwsze doniesienia o zastosowaniu testu immunoenzymatycznego. jako metodę oznaczania dowolnych substancji opublikowano w 1971 r. jednocześnie przez dwie grupy badawcze - B. Van Weemen, A. Schuurs i E. Engvall, P. Perlmann. Test immunoenzymatyczny opiera się na następującej zasadzie: na fazie stałej, która głównie wykorzystuje powierzchnię studzienek tabletki polistyrenowej, ustala się antygen czynnika zakaźnego lub przeciwciała (często mieszaniny przeciwciał) na antygeny, które mają być wykryte. Ten antygen lub przeciwciała, które są utrwalone na fazie stałej, nazywane są immunosorbentem.
W wyniku inkubacji immunosorbentu i surowicy testowej w obecności wykrywalnego czynnika, są one związane z kompleksem antygen-przeciwciało. Po procedurze płukania, podczas której usuwa się niezwiązane antygeny i przeciwciała, przeprowadza się inkubację z koniugatem. Jako koniugat do wykrywania HBsAg stosuje się anty-HBs w wykrywaniu przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C - przeciwciał przeciwko ludzkim immunoglobulinom (koniugat antywirusowy) znakowanych peroksydazą chrzanową. W wyniku tej inkubacji następuje przyłączenie do już istniejących kompleksów antygenów - przeciwciała dodatkowo wprowadzonego koniugatu. Po usunięciu niezwiązanego koniugatu (przemywanie) podłoże wprowadza się do studzienek. Gdy stosuje się koniugat peroksydazy, nadtlenek wodoru stosuje się jako substrat w połączeniu ze wskaźnikiem, który jest najczęściej stosowany jako ortofenylenodiamina (OPD) lub tetrametylobenzydyna (TMB). Wynik szacuje się fotometrycznie.
Jakość i niezawodność możliwości analitycznych metody immunoenzymatycznej charakteryzuje się szeregiem kryteriów, które obejmują czułość, specyficzność, dokładność i odtwarzalność.
Czułość to minimalna ilość substancji, którą można wykryć za pomocą testu immunoenzymatycznego. W tym przypadku dolną granicą czułości tej metody jest stężenie substancji badanej w próbce, co odpowiada najmniejszemu dodatniemu wynikowi oznaczenia, który jest statystycznie znacząco różny od wskaźników próbek celowo negatywnych. Czułość IFTS zależy od wielu okoliczności związanych zarówno z konstrukcją systemu testowego (powinowactwo immunosorbentu, jakość systemów ekstrakcyjnych i buforowych), jak i rozdzielczości i dokładności metody rejestracji.
Swoistość - zdolność do dokładnego zidentyfikowania składników do określenia, który z tych enzymatycznych testów immunologicznych został zaprojektowany. Specyficzność testu ELISA jest determinowana w dużej mierze przez reakcję krzyżową przeciwciał lub antygenów (tj. Kompozycję stosowaną jako immunosorbent) z blisko spokrewnionymi związkami, jak również skład podłoża inkubacyjnego (efekt macierzy).
Poprawność - zgodność średniej wartości wyników powtarzanych oznaczeń tej samej próbki kontrolnej z prawdziwą wartością mierzonego parametru. Dokładność oznaczenia w teście ELISA zależy od jakości systemu testowego i próbki kontrolnej. Dla dobrych systemów testów immunologicznych wskaźniki poprawności mieszczą się w przedziale 90-110%. Osobliwością badań biomedycznych w teście ELISA jest niemożność ustalenia dokładnej wartości, dlatego też średnia kilku laboratoriów ekspertów jest traktowana jako wartość prawdziwa. Kryterium statystyczne poprawności jest średnią arytmetyczną i stopniem jej odchylenia od wartości rzeczywistej, wyrażonej w procentach.
Odtwarzalność - zdolność systemu testowego do pokazywania tych samych wartości przy powtarzanych badaniach tej samej próbki. Odtwarzalność zależy zarówno od losowych błędów (błędów) podczas procedury reakcji, jak i od jakości systemów testowych oraz dokładności metody zapisywania wyników. Uważa się, że odtwarzalność tych samych próbek kontrolnych tej samej firmy w różnych laboratoriach nie powinna przekraczać wartości współczynnika zmienności 15%.
Istnieje kilka specyficznych schematów ELISA do oznaczania wirusowych markerów zapalenia wątroby: a) bezpośredni test immunoenzymatyczny; b) pośredni test immunoenzymatyczny; c) hamowanie konkurencyjne; c) metoda „pułapki” lub „przechwytywania”.
Spośród metod biologii molekularnej do diagnostyki wirusowego zapalenia wątroby częściej stosuje się reakcję łańcuchową polimerazy i hybrydyzację. Metody te, zwłaszcza PCR, umożliwiają wykrycie bardzo małych ilości specyficznego wirusowego DNA lub RNA, a zatem ocenę replikacji, aw niektórych przypadkach aktywności replikacji.
Badanie krwi zapalenia wątroby typu C.
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest jedną z najczęstszych chorób wątroby, która występuje, gdy jest zakażona wirusem zapalenia wątroby typu C (HCV), który przedostaje się do organizmu przede wszystkim, gdy wchodzi w kontakt z krwią osoby zakażonej. Występuje przewlekłe i ostre zapalenie wątroby typu C. U 70–80% pacjentów z ostrym zapaleniem wątroby typu C nie występują objawy choroby, tylko w niektórych przypadkach, po pewnym czasie po zakażeniu, występują objawy choroby, które przejawiają się zmęczeniem, bólem brzucha, utratą apetytu, ciemnieniem mocz, wymioty, nudności, rozjaśnienie kału, żółtaczka, ból stawów. Z reguły objawy występują 6-7 tygodni po zakażeniu, ale czas wystąpienia objawów choroby waha się od 2 tygodni do sześciu miesięcy. Jeśli wystąpią powyższe objawy, należy skonsultować się z lekarzem chorób zakaźnych i wykonać badanie krwi na zapalenie wątroby typu C. Diagnostyka zapalenia wątroby, przeprowadzona w odpowiednim czasie, może wykryć chorobę na wczesnym etapie i znacznie zwiększyć szanse na wyzdrowienie.
Kiedy zaplanowano test na zapalenie wątroby typu C.
Sytuacje, w których wymagany jest test zapalenia wątroby typu C:
- podczas ciąży i planowania rodziny;
- pacjenci z objawami przewlekłego lub ostrego zapalenia wątroby;
- osoba jest zagrożona. Są to pracownicy medyczni, osoby w więzieniach, funkcjonariusze organów ścigania, ludzie używający narkotyków, duża liczba partnerów seksualnych, chorzy na AIDS, hemodializa i inni.
Przygotowanie do analizy zapalenia wątroby typu C.
Specjalne przygotowanie do analizy zapalenia wątroby typu C nie jest wymagane. Do analizy krew pobierana jest z żyły na pusty żołądek, a po ostatnim posiłku powinno upłynąć co najmniej osiem godzin.
Testy ELISA na zapalenie wątroby typu C
Pierwsza analiza, zwykle zalecana do diagnozy testu zapalenia wątroby typu C - ELISA (test immunoenzymatyczny). Testy ELISA na wirusowe zapalenie wątroby typu C umożliwiają wykrycie obecności przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (anty-HCVAb) we krwi. Jeśli wynik testu ELISA jest pozytywny, wskazuje on na obecność kontaktu organizmu z wirusem zapalenia wątroby typu C. Jednak 40% osób, które mają pozytywny wynik testu ELISA, nie wykrywa wirusa we krwi. Zjawisko to nazywane jest wynikiem fałszywie dodatnim. Ponadto za pomocą testu ELISA sprawdzana jest krew dawcy.
RIBA na zapalenie wątroby typu C
Analiza RIBA dla wirusowego zapalenia wątroby typu C jest stosowana do potwierdzenia pozytywnego wyniku testu ELISA. Metoda rekombinacji immunoblottingu (RIBA) jest dokładniejszym badaniem obecności przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C. Obecność wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie również nie determinuje wyniku dodatniego, ale tylko potwierdza obecność przeciwciał.
Testy zapalenia wątroby typu C PCR
Aby wykryć obecność wirusów zapalenia wątroby typu C we krwi (RNA HCV) i postawić diagnozę, najczęściej wykorzystują analizę metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Badanie to umożliwia wykrycie z dużą dokładnością obecności we krwi nawet niewielkiej ilości wirusa. Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C może ujawnić obecność wirusa już 5 dni po zakażeniu, na długo przed pojawieniem się przeciwciał. Gdy wynik analizy PCR jest dodatni, oznacza to obecność aktywnej infekcji.
Istnieją takie warianty analizy PCR:
- ilościowa PCR, która pozwala określić nie tylko fakt obecności wirusa, ale także obciążenie wirusem (ilość wirusa). Wskaźnik ten ma ogromne znaczenie dla określenia skuteczności leczenia;
- genotypowanie, które ustanawia genotyp wirusa zapalenia wątroby typu C, co jest ważne dla określenia czasu trwania i taktyki leczenia. Istnieje ponad 10 genotypów wirusa zapalenia wątroby typu C, ale w praktyce klinicznej wystarczy zdefiniować pięć z najczęstszych typów: 1a, 1b, 2,3a / 3b.
Przeprowadza się ilościową analizę PCR:
- z jakościowym pozytywnym testem na obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w surowicy;
- do dokładnej oceny skuteczności leczenia;
- określić taktykę leczenia pacjenta.
Nie ma bezpośredniego związku między nasileniem wirusowego zapalenia wątroby typu C a ilością wirusa we krwi. Stężenie wirusa wpływa na zakaźność choroby, tzn. Im większa ilość wirusa we krwi pacjenta, tym większe ryzyko przeniesienia wirusa, na przykład poprzez kontakt seksualny lub z matki na dziecko. Ponadto skuteczność leczenia zależy od stężenia wirusa. Podczas terapii korzystnym czynnikiem jest niska wiremia, a bardzo wysoka jest niekorzystna.
Wykonywana jest analiza genotypowania:
- z jakościowym pozytywnym testem na obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w surowicy;
- do dokładnej oceny skuteczności leczenia;
- określić taktykę leczenia pacjenta;
- przewidzieć chronologię procesu zakaźnego;
- określić postęp choroby.
Wykrywanie genotypu wirusa ma ogromne znaczenie dla określenia czasu trwania leczenia, co jest ważne, ponieważ interferon ma szeroki zakres skutków ubocznych i niską tolerancję pacjenta.
Analiza dekodowania zapalenia wątroby typu C
Zwykle RNA wirusa, przeciwciała przeciwko nim i antygeny są całkowicie nieobecne. Obecność przeciwciał we krwi wskazuje na obecność przewlekłego lub ostrego zapalenia wątroby typu C lub okresu powrotu do zdrowia. Jeśli HCV RNA jest obecny we krwi, co określa się za pomocą analizy PCR, wskazuje to na obecność wirusa we krwi.
Przy niewłaściwej technice testowej, transporcie i nieprawidłowościach w krwi analiza PCR może czasami wykazywać fałszywie dodatnie wyniki. Analizy ELISA i RIBA we wczesnych stadiach choroby, gdy organizm nie wytworzył jeszcze wystarczającej ilości przeciwciał, mogą wykazywać wynik fałszywie ujemny.
Jeśli podczas rozszyfrowywania testu na wirusowe zapalenie wątroby typu C uzyskuje się pozytywne wyniki, należy skontaktować się z lekarzem chorób zakaźnych i gastroenterologiem w celu dalszej diagnostyki i leczenia.
Obniżone segmentowe neutrofile
Płytki dziecka są normalne, podwyższone, obniżone
TGT - hormon stymulujący tarczycę
Diagnoza zapalenia wątroby
Nie można natychmiast stwierdzić obecności zapalenia wątroby w organizmie, ponieważ okres inkubacji choroby może trwać do czterech tygodni. Gdy pojawiają się pierwsze oznaki choroby, w dotkniętym chorobą organizmie występują radykalne zmiany w składzie krwi: analiza biochemiczna informuje o poważnym problemie zdrowotnym i obecności wirusa chorobotwórczego. Aby jednak postawić ostateczną diagnozę, nie wystarczy oddać krew na zapalenie wątroby, a także szczegółowa diagnoza zapalenia wątroby.
Diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby
Pożądane jest przeprowadzenie go po zakończeniu okresu inkubacji, aby lekarz z najwyższą precyzją mógł określić chorobę wątroby obecną w organizmie. W przeciwnym razie przepisane leczenie nie przyniesie pożądanego efektu terapeutycznego, a nawet zaostrzy dominującego obrazu klinicznego.
Diagnoza zapalenia wątroby typu A
Zazwyczaj rozpoznanie zapalenia wątroby typu A rozpoczyna się od szczegółowego przesłuchania pacjenta i wyznaczenia szeregu testów, które należy wykonać jak najszybciej. To jest:
- biochemiczne badanie krwi;
- całkowita liczba krwinek;
- Metoda PCR;
- ELISA;
- koagulogram.
Jeśli choroba Botkina postępuje, wówczas nieprawidłowy skok bilirubiny, AlAT i AsAT, próbka tymolu jest obserwowana zgodnie z wynikami biochemicznej analizy krwi. Ponadto wytwarzane są specyficzne IgM anty-HAV, które są niepodważalnym faktem obecności wirusowego zapalenia wątroby typu A.
Ogólnie rzecz biorąc, analiza krwi jest określona przez spadek leukocytów, skok w ESR i limfocytozę. Niemniej jednak najbardziej wiarygodna jest metoda PCR, która określa wskaźnik RNA wirusa patogennego.
Ponadto lekarz bada objawy choroby, po czym może dokonać ostatecznej diagnozy i przebić się do najbardziej skutecznej terapii. Potrzeba egzaminu instrumentalnego jest niezwykle rzadka. Po skutecznym leczeniu zachowawczym w warunkach hospitalizacji i kwarantanny pacjenta oczekuje się ostatecznego wyzdrowienia, a wirusowe zapalenie wątroby typu A nie powraca ponownie.
Diagnoza zapalenia wątroby typu B
W celu ustalenia obecności wirusa zapalenia wątroby typu B jest również możliwe zgodnie z wynikami badań laboratoryjnych, a do tego potrzebna jest pierwsza dawka krwi na zapalenie wątroby. Z natury patogenny wirus ma trzy główne antygeny - HBsAg, HBcAg i HBeAg, na które wytwarzane są przeciwciała w organizmie. Główną cechą tego obrazu klinicznego jest ELISA - ELISA, który ujawnia tylko specyficzne markery wirusowego zapalenia wątroby typu B.
Natychmiast należy wyjaśnić, że antygen HBsAg pojawia się we krwi jeszcze przed pierwszymi objawami zapalenia wątroby i jest niezawodnie oznaczany w okresie żółtaczki. Jednak negatywny test nie wyklucza obecności wirusowego zapalenia wątroby typu B, a zatem wymaga zastosowania równie skutecznej metody reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR).
Jeśli podejrzewasz, że wirusowe zapalenie wątroby typu B jest obowiązkowe, to biochemiczne badanie krwi, które zaleca się przejść w pierwszej kolejności. Przeprowadzanie biopsji wątroby i ultradźwięków narządów otrzewnowych jest omawiane indywidualnie, ale gdy historia choroby jest bardzo wyraźna, nie ma potrzeby stosowania metod badania klinicznego.
Echogram wątroby w autoimmunologicznym zapaleniu wątroby w stadium przewlekłego zapalenia wątroby
Diagnoza zapalenia wątroby typu C
Aby postawić tę diagnozę, nie wystarczy oddać krew na zapalenie wątroby, ponieważ wirus może przeważać w ciele w formie ukrytej. Niemniej jednak główne testy laboratoryjne to wszystkie analizy przedstawione powyżej, a także dodatkowe wyniki biopsji wątroby. To badanie mikroskopowe materiału biologicznego (w naszym przypadku kawałka tkanki wątroby) określa zakres procesu patologicznego i zwłóknienia tkanek. Pobieranie próbek materiału odbywa się w znieczuleniu miejscowym, powikłania takiej procedury są niezwykle rzadkie w praktyce medycznej.
Jeśli podejrzewa się zapalenie wątroby typu C, główną metodą badania klinicznego jest ultrasonografia narządów otrzewnowych. Powód jest prosty: choroba często objawia się wizualną zmianą chorej wątroby, zmianami jej struktury i wielkości. W ten sposób możesz określić:
- wielkość wątroby, śledziony, trzustki i woreczka żółciowego;
- zmiany patologiczne w tych narządach;
- ogólny przepływ krwi w narządach otrzewnowych;
- optymalny obszar do wykonania biopsji wątroby.
Ta metoda badania klinicznego określa wszystkie patologie ogniskowe narządu na poziomie mikroskopowym. Jeśli wątroba jest reprezentowana na ekranie w skali szarości, wymagana jest natychmiastowa biopsja, ponieważ szary kolor wizualizuje zaatakowane tkanki „ludzkiego filtra”.
Zapobieganie wirusowemu zapaleniu wątroby
Ponieważ choroba nie objawia się natychmiast, jest to dalekie od wszystkich obrazów klinicznych, które przechodzą do natychmiastowego leczenia. Pacjent może po prostu nie być świadomy istnienia patogennego wirusa w organizmie, który z kolei szybko rozprzestrzenia się do krwiobiegu i infekuje zdrowe komórki wątroby.
Aby uniknąć tak tragicznego losu, zaleca się przestrzeganie wszystkich środków zapobiegawczych. Taka czujność znacznie zmniejszy ryzyko zachorowalności i uchroni cię przed poważnymi problemami zdrowotnymi w przyszłości. Podstawowe zasady zapobiegania przedstawiono poniżej:
- umyć ręce po ulicy;
- poddawać wysokiej jakości obróbce świeżych warzyw i owoców;
- do przeprowadzenia wszystkich szczepień ochronnych określonych w rocznym planie kalendarza;
- selektywna postawa wobec partnerów seksualnych;
- unikać kontaktu z chorymi ludźmi;
- używać tylko jednorazowych strzykawek i być szczególnie czujnym na stacjach transfuzji krwi.
Zaleca się również regularne (raz na sześć miesięcy) oddawanie krwi na zapalenie wątroby, aby upewnić się, że wirus nie przenika do organizmu i nie infekuje zdrowych komórek raz. Jeśli diagnoza zostanie ustalona, wymagane jest natychmiastowe założenie konta i stosowanie się do wszystkich zaleceń specjalisty.
Autor publikacji:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Wykształcenie: Państwowy Uniwersytet Medyczny w Rostowie (Państwowy Uniwersytet Medyczny w Rostowie), Zakład Gastroenterologii i Endoskopii.
Gastroenterolog
Doktor nauk medycznych