Wirus DNA z rodziny Hepadnaviridae jest bezpośrednim czynnikiem sprawczym zapalenia wątroby typu B. Analiza PCR zapalenia wątroby typu B umożliwia wykrycie zakażonego wirusa DNA we krwi pacjenta. Wynik typu pozytywnego na DNA HBV pokazuje obecność infekcji we krwi pacjenta. Należy zauważyć, że diagnoza za pomocą analizy PCR pozwala nie tylko określić obecność infekcji, ale także jej ilościowe obciążenie i aktywność. Ta metoda jest niezawodna, dokładna i powtarzalna. Ilościowe oznaczenie DNA HBV za pomocą qPCR można wykorzystać do monitorowania skuteczności terapii HBV i być przydatne do zrozumienia naturalnej historii HBV w obszarze endemicznym.
Proces zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B zachodzi poprzez kontakt domowy lub seksualny - poprzez bezpośredni kontakt z zakażoną krwią. Po infekcji wirus przenika do komórek wątroby, w których kontynuuje aktywną reprodukcję. Przez krwiobieg komórki chorobotwórcze rozprzestrzeniają się po całym ciele. Warto zauważyć, że komórki zapalenia wątroby typu B są wysoce odporne na działanie kwasów i wysokiej temperatury. Jest w stanie utrzymać jego szkodliwe właściwości przez sześć miesięcy.
Rodzaje PCR dla zapalenia wątroby typu B
Do tej pory istnieją dwa rodzaje diagnostyki, które są zalecane, jeśli podejrzewasz obecność wirusa zapalenia wątroby typu B: jakościowa PCR (pozwala określić ze 100% dokładnością obecności wirusa we krwi) i ilościową PCR (pozwala określić stopień aktywności wirusa).
W przypadku podejrzenia zakażenia HBV lub jeśli inne metody diagnostyczne nie przyniosły jednoznacznych wyników, przepisuje się wysokiej jakości PCR. Ten typ analizy PCR jest niezwykle łatwy do rozszyfrowania: negatywny (nie wykryto wirusa we krwi), dodatni (wirus wykryty we krwi). Głównym zadaniem analizy jakościowej jest określenie obecności zakażonych komórek we wczesnych stadiach choroby. Jeśli wirus został zdiagnozowany dwa tygodnie po rzekomej infekcji, skuteczność leczenia będzie znacznie wyższa. Jeśli wirus we krwi wynosi około dwóch miesięcy, choroba staje się przewlekła, dlatego nie można całkowicie wyleczyć.
Jeśli diagnoza jakościowa potwierdzi obecność HBV we krwi, lekarz przepisze analizę ilościową.
Analiza ilościowa pozwala określić aktywność rozwoju wirusa w ciele pacjenta. Ten typ analizy PCR jest przypisany do:
- określić stadium choroby;
- do monitorowania skuteczności zastosowanej terapii;
- określić poziom odporności wirusa na dany lek;
- do wyboru leków.
Ilościowe wskaźniki wirusa we krwi są mierzone w IU na mililitr lub DNA na mililitr.
Jeśli lekarz zaleci natychmiastową diagnozę ilościową, bez sprawdzania jakościowego, wówczas 75 IU na mililitr uznaje się za normę. W przypadku wykrycia mniejszej liczby jednostek międzynarodowych, HBV nie jest wykrywane, gdy liczby są powyżej normy, stwierdza się obecność wirusowego zapalenia wątroby typu B.
Interpretacja diagnozy ilościowej
Następujące wskaźniki (w kopiach / mililitrach) uważa się za normę CRP w wirusowym zapaleniu wątroby typu B: mniej niż 10 3 - wirus nieaktywny; od 10 4 do 10 5 - wirus jest zazwyczaj nieaktywny; 10 6 - aktywny wirus; 10 7 - wirus na wysokim poziomie aktywności.
Na podstawie wskaźników ilościowych można określić ze 100% dokładnością formę choroby (nosiciel, ostry lub przewlekły), reakcję wirusa na leczenie, potrzebę dodatkowej diagnostyki.
Przewlekła postać zapalenia wątroby typu B jest ustalana, jeśli aktywność wirusa wynosi 10 5 kopii na mililitr. Nośnik jest diagnozowany, jeśli wyniki są poniżej 10 5 kopii na mililitr.
W okresie leczenia konieczne jest regularne (raz na trzy miesiące) powtarzanie diagnostyki ilościowej w celu uwzględnienia w czasie okresu, w którym wirus rozwija odporność na stosowane leki i zmienia metodę. Jeśli wszystkie badania zostały przeprowadzone prawidłowo i wybrano skuteczne leczenie, powtórzona analiza (po trzech dniach leczenia) pokaże spadek aktywności komórek chorobotwórczych o co najmniej osiemdziesiąt pięć procent.
Biopsja wątroby jest wykonywana tylko w przypadku, gdy sześć miesięcy leczenia wykazało, że poziomy ALT są dwa razy wyższe niż normalnie, a diagnostyka PCR wykazuje częstości niższe niż 105 kopii na mililitr krwi.
Przygotowanie do ankiety
Do analizy wymagana jest krew żylna. Aby uzyskać jak najdokładniejsze wyniki, konieczne jest przygotowanie się do procedury: odmów jedzenia co najmniej 8 godzin przed pobraniem krwi; przez dwa dni odmówić leczenia lekami (konieczne jest ostrzeżenie lekarza o zażywaniu narkotyków); przed oddaniem krwi musisz spędzić dwadzieścia minut w trybie odpoczynku; Dwanaście godzin przed zabiegiem zrezygnuj z ćwiczeń sportowych, napojów alkoholowych, palenia i jedzenia tłustych potraw.
Ważne jest: jeśli diagnoza jest konieczna dla dziecka poniżej piątego miesiąca życia, musi podawać szklankę przegotowanej wody co dziesięć minut sześćdziesiąt minut przed procedurą pobierania krwi.
Podsumowując
Analiza PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu B jest dziś najdokładniejszą metodą diagnozowania wirusa. Metoda pozwala określić zmutowane i ukryte formy choroby, aby zdiagnozować chorobę w pierwszych dniach infekcji, a zatem wybrać najskuteczniejsze leczenie. Asystent laboratoryjny porównuje wyniki analizy z normą, a następnie doprowadza je do konkluzji. Dane są przetwarzane w ciągu dwóch tygodni. Aby uzyskać skierowanie na analizę PCR, należy skontaktować się z hepatologiem, specjalistą od chorób zakaźnych lub wirusologiem. Ważne jest, aby pamiętać, że im szybciej dotrzesz do lekarza, tym szybciej uzyskasz wyniki, tym skuteczniejsze będzie leczenie.
Koszt badań krwi i PCR na zapalenie wątroby typu C
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest patologią zapalną, na którą wpływają komórki wątroby. Choroba rozwija się w wyniku przenikania wirusa zapalenia wątroby typu C (HVC) do organizmu ludzkiego.
Forma choroby może być ostra lub przewlekła.
Najczęściej objawy ostrej postaci patologii u większości pacjentów są nieobecne, czasami chorobie towarzyszą bolesne odczucia w jamie brzusznej, zmniejszona wydajność, zwiększone zmęczenie, utrata apetytu, ciemny odcień moczu, odbarwienie kału, zażółcenie skóry i błon śluzowych, bóle stawów. Takie objawy występują zwykle 6-8 tygodni po zakażeniu, ale mogą pojawić się po sześciu miesiącach.
Wraz z rozwojem takich zjawisk konieczne jest skontaktowanie się z placówką medyczną i poddanie kompleksowemu badaniu całego organizmu. Badanie krwi na zapalenie wątroby typu C jest przeprowadzane w ramach badania lekarskiego.
Dzisiaj, dzięki nowoczesnym technikom diagnostycznym, można zidentyfikować tę patologię na początkowym etapie rozwoju, co znacznie zwiększa szanse całkowitego wyleczenia choroby.
Następujące grupy osób są zobowiązane do badania na zapalenie wątroby typu C:
- kobiety w okresie noszenia dziecka;
- osoby z objawami zapalenia wątroby;
- personel medyczny;
- potencjalni dawcy narządów i krwi;
- narkomani, osoby zakażone HIV, rozwiązłe życie intymne.
Lista wymaganych badań
Jakie testy powinienem wziąć na wirusowe zapalenie wątroby typu C? Aby dokładnie zdiagnozować chorobę, zidentyfikować jej przyczyny i określić stan miąższu wątroby, wymagane są następujące badania:
- ogólne badania moczu i krwi;
- analiza biochemiczna krwi;
- Analiza PCR;
- badanie krwi w celu wykrycia przeciwciał przeciwko HVC;
- badanie krwi pod kątem dostępnych przeciwciał na własne komórki wątroby;
- biopsja wątroby.
Rozszyfrowanie badania krwi na zapalenie wątroby typu C wykonuje specjalista. Rozważ każdą metodę badań bardziej szczegółowo, jak również zrozumiemy, która analiza zapalenia wątroby typu C jest najdokładniejsza.
Ogólna analiza
Wykonując pełną morfologię krwi na zapalenie wątroby typu C, możesz ocenić stan pacjenta. Zmiany parametrów krwi nie są postrzegane jako specyficzne objawy zapalenia wątroby, jednak w przypadku tej choroby występują takie zaburzenia, jak:
- zmniejsza się stężenie hemoglobiny, płytek krwi i leukocytów;
- zwiększa zawartość limfocytów;
- krzepnięcie krwi jest naruszone;
- wzrasta szybkość sedymentacji erytrocytów (ESR).
Ogólna analiza moczu umożliwia wykrycie w jego składzie urobeliny - pigmentu żółciowego, który występuje w moczu w wyniku upośledzonego funkcjonowania wątroby.
Analiza biochemiczna
Analiza biochemiczna krwi w wirusowym zapaleniu wątroby typu C umożliwia identyfikację takich zaburzeń, jak:
- podwyższony poziom enzymów wątrobowych (transaminaza alaninowa - ALT i aminotransferaza asparaginianowa - AST), które dostają się do krwi, gdy hepatocyty są uszkodzone. W normalnym stanie wskaźniki te dla mężczyzn nie powinny przekraczać 37 IU / l, dla kobiet - nie więcej niż 31 IU // l. Zwiększone stężenie ALT i AST w bezobjawowym zapaleniu wątroby typu C jest często jedynym objawem tej choroby. Ponadto wzrasta poziom fosfatazy alkalicznej transpeptydazy glutamylowej we krwi (zwykle nie wyższej niż 150 IU / l).
- zawartość bilirubiny (zarówno ogólnej, jak i bezpośredniej) we krwi jest przekroczona. Jeśli poziom żółtego pigmentu w surowicy przekracza 27-34 µmol / l, występuje żółtaczka (do 80 µmol / lw łagodnej postaci, 86-169 µmol / lw umiarkowanie ciężkiej, powyżej 170 µmol / lw ciężkiej postaci).
- Obniża się poziom albuminy, przeciwnie, stężenie gamma globulin. Gamma globuliny składają się z immunoglobulin - przeciwciał, które chronią organizm przed substancjami powodującymi choroby.
- zwiększone stężenie triglicerydów we krwi.
Test PCR
Za pomocą techniki PCR można zdiagnozować czynnik chorobotwórczy. Przeprowadzenie tej analizy umożliwia wykrycie wirusa we krwi, nawet jeśli jego ilość jest minimalna. Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C umożliwia określenie istniejącej infekcji we krwi już po 5 dniach od momentu zakażenia, to znaczy na długo przed pojawieniem się przeciwciał.
Jeśli wynik badania krwi na zapalenie wątroby typu C metodą PCR jest pozytywny, wskazuje to na obecność czynnej infekcji w organizmie. Korzystając z tej metody, można przeprowadzić jakościowe i ilościowe badanie RNA HVC.
Podczas analizy jakościowej PCR dla zapalenia wątroby typu C możliwe jest wykrycie istniejącego wirusa w organizmie człowieka.
Ta procedura diagnostyczna jest wykonywana, jeśli anty-HVC wykryto we krwi.
Rozszyfrowanie analizy zapalenia wątroby typu C zawiera informacje, że infekcja została wykryta lub nie została wykryta w organizmie. Zwykle we krwi nie ma substancji patologicznych.
Jeśli wynik testu na zapalenie wątroby typu C jest dodatni, oznacza to, że patogen stale dzieli się i infekuje komórki wątroby.
Wyniki tej analizy mogą być niewiarygodne, jest to możliwe w następujących przypadkach:
- wykorzystany zanieczyszczony biomateriał;
- w obecności heparyny we krwi;
- w obecności substancji chemicznych lub białkowych (inhibitorów) w badanym biomateriałie, wpływających na elementy PCR.
Analiza ilościowa wirusowego zapalenia wątroby typu C dostarcza informacji o ilości wirusa zawartego we krwi, to znaczy określa wiremię. Przez tę koncepcję rozumie się objętość RNA HVC obecnego we krwi (na przykład w 1 ml). W interpretacji analizy ilościowej dla wirusowego zapalenia wątroby typu C wartość tę wyraża się w cyfrowym ekwiwalencie, mierzonym w IU / ml.
Krew do PCR na zapalenie wątroby typu C jest pobierana przed zastosowaniem środków terapeutycznych. Po analizie przeprowadza się po 1, 4, 12 i 24 tygodniach. Badanie w 12 tygodniu ma charakter orientacyjny i jest przeprowadzane w celu oceny skuteczności procedur terapeutycznych.
Jeśli wynik testu na wirusowe zapalenie wątroby typu C w czasie ciąży jest pozytywny, a wartości wiremii przekroczone, ryzyko przeniesienia patogenów od chorej matki na dziecko zwiększa się kilkakrotnie. Ponadto, przy podwyższonym obciążeniu wirusowym, wdrożenie środków terapeutycznych jest trudne.
Zgodnie z transkrypcją testów na wirusowe zapalenie wątroby typu C, jeśli wartości wiremii przekraczają 800 000 IU / ml, to jest wysoka. Jeśli liczby są poniżej 400 000 IU / ml, poziom miana wirusa jest uważany za niski.
Analiza zapalenia wątroby typu C metodą PCR jest uważana za najbardziej dokładną i ma kilka zalet w porównaniu z innymi opcjami badawczymi, a mianowicie:
- bezpośrednia diagnoza czynnika chorobotwórczego. Podczas wykonywania tradycyjnych badań określa się obecność markerów białkowych, które są odpadami patogenów. Oznacza to tylko, że infekcja jest obecna we krwi. Podczas badania na wirusowe zapalenie wątroby typu C metodą PCR możliwe jest określenie rodzaju patogenu niebezpiecznej patologii.
- specyfika techniki. Podczas tej procedury w biomateriałach określa się unikalny region DNA, który odpowiada tylko jednemu typowi patogenu. Minimalizuje to prawdopodobieństwo fałszywych wyników.
- wysoka czułość. Podczas wykonywania analizy PCR można wykryć minimalną ilość wirusa. Jest to ważne, jeśli zidentyfikowane zostaną warunkowo patogenne substancje, które stanowią zagrożenie tylko wtedy, gdy ich poziom wzrasta.
- Przy stosowaniu tej techniki w jednej próbce biomateriału można wykryć kilka patogenów na raz.
- potrafi wykryć ukryte infekcje. Ponadto analiza pozwala na zdiagnozowanie patogennych mikroorganizmów, które żyją wewnątrz komórek i mają wysoką zmienność antygenową.
Jeśli wyniki testu są dodatnie, ślady wirusa znajdują się w biomateriałie, a sieć ma infekcję w organizmie.
Negatywna analiza PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C oznacza, że biomateriał nie zawiera śladów infekcji.
Badanie immunologiczne
Ta metoda pozwala zidentyfikować przeciwciała dla wszystkich typów wirusa zapalenia wątroby, a także przeciwciała dla komórek wątroby własnego ciała, których pojawienie się przyczynia się do rozwoju autoimmunologicznego zapalenia wątroby.
Wyniki uzyskane podczas badania są istotne przez 3 miesiące, a następnie należy ponownie oddać krew na zapalenie wątroby typu C.
Możliwe jest również wykonanie ekspresowego badania za pomocą specjalnych pasków testowych. Ta analiza umożliwia określenie przeciwciał przeciwko wirusowi C w składzie krwi i śliny.Ta procedura może być przeprowadzona niezależnie, w domu.
Biopsja wątroby
W celu przeprowadzenia tej analizy pobiera się element miąższu wątroby i wykonuje badanie histologiczne otrzymanego biomateriału. Pozwala to ocenić stan ciała: zidentyfikować ogniska zapalne, martwicze, stadium zwłóknienia i tak dalej.
Obecnie stosuje się testy zastępujące analizę histologiczną miąższu wątroby.
Aby ocenić stopień uszkodzenia wątroby i intensywność procesu zapalnego, wykorzystuje się specyficzne biomarkery krwi żylnej. Za pomocą Fibrotest można oszacować stopień wzrostu tkanki włóknistej.
Podczas wykonywania Actitest można uzyskać informacje o intensywności procesów patologicznych w miąższu wątroby. Za pomocą Steatototesta można zdiagnozować tkankę tłuszczową wątroby i ocenić zakres tego procesu. Fibromax składa się ze wszystkich powyższych testów i może zawierać inne badania.
Przygotowanie do badania
Jakie testy są wykonywane w przypadku wirusowego zapalenia wątroby typu C i jak odkryliśmy ten lub inny rodzaj badań. Równie ważne jest, aby wiedzieć, jak przygotować się do analizy.
Aby uzyskać wiarygodne wyniki, zaleca się spełnienie następujących wymagań:
- Testy zapalenia wątroby typu C należy wykonywać rano, na pusty żołądek. Ostatni raz jedzenie powinno być spożywane co najmniej 8 godzin przed badaniem.
- Biomateriał można zbierać w ciągu dnia lub wieczorem. W tym przypadku ważne jest, aby upłynąć co najmniej 5-6 godzin między ostatnim posiłkiem a analizą.
- przed oddaniem krwi na zapalenie wątroby typu C, herbatę, kawę, sok lub inne napoje należy wyrzucić, tylko woda jest dozwolona.
- 48 godzin przed badaniem należy wykluczyć stosowanie tłustych, smażonych potraw i napojów zawierających alkohol.
- przez co najmniej godzinę przed analizą musisz powstrzymać się od palenia.
- analizy nie należy wykonywać bezpośrednio po badaniu USG, instrumentalnym, RTG, masażu lub fizjoterapii.
- dzień przed wdrożeniem badania należy wykluczyć stosowanie leków i intensywną aktywność fizyczną. Stres emocjonalny jest również przeciwwskazany.
- Zaleca się spędzić 15 minut przed wykonaniem badania w spokojnym stanie.
Przeprowadzenie procedury pobierania krwi
Gdzie można przeprowadzić badanie na wirusowe zapalenie wątroby typu C? Biomateriał jest pobierany do dalszego badania w laboratorium instytucji medycznej lub w domu pacjenta.
Krew z żyły przyjmuje się w następujący sposób:
- za pomocą specjalnej opaski uciskowej owiniętej wokół przedramienia pacjenta przepływ krwi żylnej zostaje zatrzymany. Dzięki takim manipulacjom żyły zostaną wypełnione krwią i będą bardziej widoczne, co znacznie ułatwi proces wprowadzania igły.
- obszar skóry, do którego zostanie włożona igła, jest dokładnie traktowany alkoholem lub płynem zawierającym alkohol.
- Igła jest delikatnie wprowadzana do żyły, a następnie dołączana jest probówka, specjalnie zaprojektowana do pobierania krwi.
- Natychmiast po włożeniu igły do żyły, szelki ściskające wyjmuje się z ramienia pacjenta.
- po zebraniu objętości krwi niezbędnej do analizy, igła jest delikatnie usuwana z żyły.
- sterylny wacik lub gazik nasączony alkoholem należy nanieść na miejsce wstrzyknięcia.
- aby zapobiec wystąpieniu krwiaka, tampon należy naciskać z pewnym wysiłkiem na obszar wprowadzania igły, zginać ramię na stawie łokciowym i trzymać go w tej pozycji przez kilka minut. Takie działania pomogą również szybciej zatrzymać krew.
Pod warunkiem, że technika administracji wewnętrznej jest dobra, procedura ta jest całkowicie bezpieczna i nie powoduje bolesnych wrażeń.
W rzadkich przypadkach, po pobraniu krwi, żyły mogą puchnąć. Zjawisko to nazywane jest „zapaleniem żył”. Kompres (nie gorący) pomoże rozwiązać problem, należy go nakładać na obrzęknięte obszary skóry kilka razy dziennie.
Pewne problemy mogą również wystąpić, jeśli wystąpią zaburzenia krwawienia. Przyjmowanie aspiryny, warfaryny i innych leków rozrzedzających krew może powodować krwawienie. Dlatego przed przeprowadzeniem analizy należy odmówić przyjęcia jakiegokolwiek leku. Jeśli leczenie nie może zostać anulowane, należy poinformować specjalistę.
Daty i ceny
Ile testuje się na zapalenie wątroby typu C? Wyniki badania krwi na zapalenie wątroby mogą być gotowe w ciągu kilku godzin i za kilka dni (zwykle nie więcej niż 8 dni). Czas przygotowania wyników zależy od rodzaju wirusa i wybranej metody analizy. Szybsze jest badanie przeprowadzone metodą PCR. Wyniki w tym przypadku będą gotowe w ciągu zaledwie kilku godzin.
Ile kosztuje test na zapalenie wątroby typu C? W zależności od kliniki i złożoności badania cena procedury może wahać się od 400 do 11 000 rubli.
Powinieneś być świadomy, że utworzenie wystarczającej ilości przeciwciał przeciwko HVC może potrwać kilka tygodni. Dlatego na wczesnym etapie rozwoju patologii wynik badania może być fałszywie ujemny.
Ponadto uzyskanie niewiarygodnych danych jest możliwe dzięki analizie złej jakości i naruszeniu warunków transportu uzyskanego biomateriału (próbki muszą być dostarczone do laboratorium maksymalnie 2 godziny po pobraniu krwi).
Jeśli wynik badania jest pozytywny, należy natychmiast skontaktować się z lekarzem chorób zakaźnych. Specjalista przeprowadzi dodatkowe badanie i zaleci odpowiednie leczenie.
Istota analizy PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu B i jego wyników
Wirusowe zapalenie wątroby typu B jest skutecznie leczone, jeśli zostanie wykryte na czas, a liczba przeciwciał i antygenów we krwi pacjenta jest prawidłowo określona. Za pomocą testu immunoenzymatycznego na zapalenie wątroby można wykryć obecność markerów wirusowych, ale nie można określić dokładnego etapu procesu.
Do oceny ilościowej użyto diagnostyki PCR. Za pomocą testu można policzyć liczbę markerów, przewidzieć przebieg choroby i prawdopodobieństwo wyleczenia za pomocą leków przeciwwirusowych.
Główną zaletą badania jest możliwość wykrycia nawet minimalnych stężeń wirusa, aby zidentyfikować patogen na etapie gatunku.
Diagnoza zapalenia wątroby typu B
Wirus zapalenia wątroby typu B jest wysoce zaraźliwy i odporny na wpływy zewnętrzne. Pozostaje aktywny we krwi pacjenta przez kilka tygodni. Dlatego każda osoba jest narażona na zakażenie, nawet jeśli obserwuje się profilaktykę.
Aby zdiagnozować chorobę, przepisz następujące badania:
Istota metody PCR
Amerykański chemik K.Mullis otrzymał Nagrodę Nobla, a jego metoda diagnostyczna jest nadal stosowana.
Przodek metody PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) uważany jest za naukowca z Norwegii H. Kleppe. Najpierw zaczął przeprowadzać amplifikację (odzyskiwanie) DNA za pomocą krótkiego łańcucha DNA, czyli syntetycznego startera (rodzaj kopii).
Jednak naukowiec nie zrealizował swojego pomysłu. Podobne badania przeprowadził amerykański chemik K.Mullis, który w 1993 r. Otrzymał Nagrodę Nobla za swój wynalazek. Od tego czasu PCR wykorzystano do ustalenia ojcostwa, diagnozowania chorób genetycznych i wykrywania wirusów.
Istotą reakcji jest to, że za pomocą enzymów kopiowany jest pewien fragment DNA. Możesz skopiować tylko obszar, który odpowiada określonym parametrom i jeśli jest w prezentowanej próbce. Następujące składniki są używane do rozpoczęcia reakcji:
- Matrycowy DNA z miejscem do skopiowania.
- Startery o podobnej strukturze do DNA.
- Polimeraza, czyli enzym, który wyzwala reakcję. Powinno być termostabilne, to znaczy wytrzymywać ekstremalne temperatury.
- Rozwiązanie o określonych parametrach, zapewniające przejście reakcji.
Reakcja przebiega w kilku etapach:
Do wykrywania wirusowego zapalenia wątroby typu B stosuje się dwa rodzaje reakcji: ilościową i jakościową.
Ilościowa PCR
Metoda ilościowa określa ilość genomu HBV
Ilościowa PCR obejmuje równoczesne tworzenie kopii fragmentów DNA i określenie liczby cząsteczek. Pomiar jest przeprowadzany po każdym etapie, czyli w czasie rzeczywistym. Osiąga się to za pomocą sond fluorescencyjnych, które są zawarte w łańcuchu cząsteczek i świecą w pewnym okresie badania.
Ta metoda służy do wykrywania fragmentów DNA, które są markerami wirusa zapalenia wątroby. Korzystając z metody ilościowej, można dokładnie wyizolować genotyp wirusa. Innymi słowy, oblicza się liczbę kopii genomu HBV na liczbę komórek pacjenta.
Analiza ilościowa dostarcza odpowiedzi na następujące pytania:
- Z jaką intensywnością postępuje choroba.
- Jak skuteczne jest leczenie.
- Czy rozwinęła się oporność na leki?
Również pomiar ilościowy jest konieczny do rozpoznania przewlekłego stadium zakażenia. Jeśli ilość DNA jest niższa niż 100 sztuk / ml przy normalnym poziomie transaminazy, osoba ta jest nosicielem wirusa.
W fazie ostrej ilość przeciwciał jest znacznie większa: w terapii przeciwwirusowej wzrost liczby przeciwciał wskazuje na rozwój oporności na leki, jest to sygnał do dostosowania leczenia.
Wysokiej jakości PCR
Wysokiej jakości PCR daje mniej informacji, ale może wyeliminować infekcję.
Wysokiej jakości PCR może tylko ustalić obecność patogenu we krwi. Jeśli są nieobecne, pacjent nie jest zakażony, jeśli patogen dostanie się do krwi, wynik będzie pozytywny.
Jednak z pomocą reakcji jakościowej nie jest możliwe wyjaśnienie genomu wirusa, stadium choroby. Dlatego w diagnostyce HBV przeprowadzono zarówno pomiar ilościowy, jak i jakościowy.
Przygotowanie do ankiety
Do analizy PCR wymagana jest krew żylna. Należy to zrobić rano na czczo.
Pacjent powinien właściwie przygotować się do badania:
- Przez 10 godzin, aby odmówić jedzenia, możesz pić tylko czystą wodę.
- W przeddzień przerwania przyjmowania alkoholu przez 4 godziny nie palić.
- Przed badaniem należy unikać stresu fizycznego i emocjonalnego.
- Przestań stosować leki przez 2 dni, jeśli nie jest to możliwe, należy powiadomić technika laboratoryjnego. Niektóre leki mają wpływ na wynik końcowy.
Interpretacja danych
W reakcji ilościowej uzyskane wskaźniki są oceniane w zależności od liczby kopii DNA.
Łatwo jest interpretować dane pomiaru jakości. Daje odpowiedź pozytywną lub negatywną.
W reakcji ilościowej można ocenić uzyskane wskaźniki w zależności od liczby kopii DNA. Jednostką miary są kopie / ml.
Dane są dekodowane w następujący sposób:
- Jeśli ilość DNA HBV jest mniejsza niż 90, infekcja jest nieobecna. Pacjent rozwinął odporność poszczepienną lub został wyleczony z choroby.
- Gdy liczba kopii 2x100 mówi o nosicielu wirusa.
- Liczba 2x106 wskazuje na przewlekły stan choroby.
- Z DNA większym niż 2x109, pacjent ma ostry etap zapalenia wątroby.
Błędne wyniki
Zalety metody diagnostycznej wykorzystującej reakcje polimerazy są następujące:
- Bezpośrednie wykrywanie patogenów. W przeciwieństwie do tego ELISA dostarcza informacji o obecności przeciwciał przeciwko wirusowi.
- Specyfika. Oznacza to, że region DNA jest obecny w próbce biomateriału, która jest kopiowana.
- Nadwrażliwość. Metoda może nawet wykryć pojedyncze fragmenty komórek.
- Diagnoza chorób w stadiach ostrych i utajonych. Oznacza to, że możliwe jest zdiagnozowanie choroby na etapie przedklinicznych objawów.
Metoda ma wady, które prowadzą do fałszywych wyników. Najważniejszą wadą jest prawdopodobieństwo zanieczyszczenia materiału. Głównym źródłem zanieczyszczeń są źle przetworzone probówki, ręce laboratoryjne, odczynniki.
Część DNA z poprzedniej reakcji może dostać się do krwi. Dlatego na laboratoria nakładane są zwiększone wymagania sanitarne: oddzielne pomieszczenia, rury z tworzyw sztucznych, ultrafioletowe traktowanie laboratoriów itp.
Fałszywie negatywne wyniki mogą wynikać ze zmniejszonej wrażliwości reakcji. Dzieje się tak w następujących sytuacjach:
- pacjent przyjmuje leki, na przykład antykoagulanty;
- osoba cierpiała na stres fizyczny przed analizą (uprawianie sportu, ciężka praca);
- infekcja wystąpiła niedawno.
Jeśli pacjent ma wysokie prawdopodobieństwo zakażenia, a wynik badania jest negatywny, należy go ponownie zbadać.
Zobacz także:
Wniosek
Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy jest głównym i najbardziej pouczającym dla diagnozy HBV. Umożliwia nie tylko ustalenie statusu zakażenia, ale także wyjaśnienie stadium choroby, ocenę wyników leczenia.
W celu dokładniejszej diagnozy stosuje się pomiar jakościowy i ilościowy. Wady tej metody obejmują prawdopodobieństwo zanieczyszczenia, zmniejszoną czułość i raczej wysoką cenę.
Aby wyniki były jak najbardziej wiarygodne, należy odpowiednio przygotować się do badania i przeprowadzić je w klinice z odpowiednią licencją i dobrą reputacją.
Przeprowadzenie analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C i dekodowanie wyników
Analiza wirusowego zapalenia wątroby typu C to badanie, którego głównym celem jest identyfikacja materiału genetycznego czynnika sprawczego. Analiza ujawnia czynnik wywołujący chorobę za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy. Diagnoza ta charakteryzuje się wysokim stopniem dokładności, specyficzności w celu wykrycia nieobecności lub obecności infekcji wirusowej.
Istota diagnozy
W celu przeprowadzenia analizy PCR w celu określenia wirusa zapalenia wątroby typu C od pacjenta pobierana jest krew żylna, która potencjalnie zawiera HCV RNA (kwas rybonukleinowy) pożądanego wirusa.
Test PCR na zapalenie wątroby typu C implikuje procedurę dodawania do cząstek krwi pacjenta:
- startery (krótkie sztucznie zsyntetyzowane regiony niezbędnego genu);
- specjalny enzym (polimeraza RNA).
Po pobraniu próbki materiał biologiczny jest wysyłany do badań do laboratorium. Jedna porcja krwi jest potrzebna do bezpośredniej analizy PCR, druga jest wysyłana do badania metodą ELISA. Enzym jest w stanie w krótkim czasie zwiększyć liczbę materiału genetycznego wirusa patogenu. W specjalnym urządzeniu przeprowadza się kilka cykli procesów ogrzewania i chłodzenia. Na ostatnim etapie uzyskany materiał porównuje się z genami wirusa i wyciąga wniosek o obecności lub braku patologii w ciele pacjenta.
Istota i przebieg analizy PCR w laboratorium. Nakręcony przez SiberianMedicalLaboratory.
Rodzaje badań
Istnieją 3 rodzaje diagnostyki, które umożliwiają określenie obecności wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie człowieka:
- genotypowanie;
- jakość;
- ilościowy.
Metoda jakościowa
Rozpoznanie zapalenia wątroby typu C metodą jakościową ma zastosowanie u pacjentów, u których wykryto przeciwciała przeciwko wirusowi w badaniu krwi. W przypadku obecności ostrej fazy HCV RNA, takie pomiary diagnostyczne mogą określić obecność choroby w ciągu 1-2 tygodni po zakażeniu. W tym okresie nie można jeszcze opracować przeciwciał przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C.
Metoda ilościowa
Ilościowa metoda diagnostyczna jest stosowana do określenia stężenia wirusa w próbkach krwi. Taki test wiremii (stopień koncentracji) umożliwia dokładne określenie liczby jednostek wirusowego RNA. Wynik końcowy jest wyrażony w odpowiedniej objętości. Jeśli mówimy o analizie ilościowej, wskaźniki mierzy się w 1 ml (1 m3 Cm).
Parametr obciążenia wirusem oznacza poziom zakaźności choroby, to znaczy odzwierciedla stopień „zakaźności” pacjenta. W praktyce oznacza to, że im wyższe jest stężenie wirusa we krwi, tym większe są szanse na zakażenie pacjenta wirusem zapalenia wątroby typu C. Metoda badania ilościowego pozwala również ustalić jakość i skuteczność leczenia.
Genotypowanie
Genotypowanie ujawnia mutacje czynnika wywołującego chorobę. Przed przepisaniem planu leczenia określa się genotyp wirusa: od tego zależy jakość i czas trwania terapii. Na przykład w leczeniu choroby typu I sprawność wynosi 60%, w przypadku II, III - około 80%.
Zalety analizy zapalenia wątroby typu PCR
Do głównych zalet procedury należą:
- Możliwość wczesnej diagnozy. Analiza PCR jest w stanie wykryć obecność wirusa we wczesnych stadiach zakażenia.
- Niski wynik błędu. Badany zasób biologiczny pozwala zdiagnozować fragment materiału genetycznego, który jest charakterystyczny tylko dla jednego rodzaju zakażenia wirusowego. Ta okoliczność pozwala zapobiec fałszywym wynikom diagnostycznym.
- Wysoki stopień czułości. Analiza PCR jest w stanie wykryć RNA wirusa w małych ilościach, co również umożliwia śledzenie utajonych infekcji w czasie.
Wskazania dla
Konieczne jest przeprowadzenie testu PCR na zapalenie wątroby typu C, jeśli jest dostępne:
- kontakt z chorymi ludźmi, co może prowadzić do zakażenia;
- objawy marskości wątroby (powiększenie śledziony, nietypowe zmiany w wielkości wątroby, wykrycie splotu żylnego na brzuchu pod skórą);
- pozytywne wyniki testu ELISA;
- zwiększona aktywność AST i ALT (przejawiająca się w analizie biochemicznej krwi);
- potrzeba kontrolowania przebiegu terapii przeciwwirusowej;
- początkowy etap leczenia potrzeby ustalenia obciążenia wirusem;
- przeprowadzenie ostatniego etapu terapii w celu wykluczenia możliwych nawrotów;
- pacjent ma wirusowe zapalenie wątroby typu B, aby wykluczyć rozwój mieszanego uszkodzenia wątroby.
Jak przygotować się do oddawania krwi do badań PCR
Przygotowanie do analizy PCR obejmuje następujące zalecenia:
- krew jest pobierana rano;
- analiza jest przeprowadzana na pusty żołądek, dlatego zaleca się przerwę między ostatnim spożyciem 8-10 godzin;
- kilka dni przed diagnozą należy wykluczyć tłuste, pikantne i smażone potrawy, napoje alkoholowe i palenie;
- jeden dzień przed analizą należy powstrzymać się od ciężkiego wysiłku fizycznego, wykluczyć zajęcia na siłowni lub basenie.
Wyniki analizy: normy i odchylenia
Sama analiza nie jest długotrwała, a wysoko wykwalifikowany specjalista hepatolog lub specjalista chorób zakaźnych odszyfrowuje wyniki PCR dla zapalenia wątroby typu C. Na podstawie wyników analizy diagnozuje się pacjenta.
Aby poprawnie rozszyfrować wyniki ankiety, biorą pod uwagę wskaźniki:
- analiza biochemiczna krwi;
- dane ultradźwiękowe;
- wyniki biopsji.
Interpretacja analizy ilościowej
Po uzyskaniu wyników analizy ilościowej PCR brane są pod uwagę następujące wskaźniki:
Diagnostyka PCR na zapalenie wątroby typu C
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest stanem zapalnym komórek wątroby, który powstaje w wyniku zakażenia wirusem HCV (wirusowym zapaleniem wątroby typu C) poprzez kontakt z krwią osoby zakażonej. Kod genetyczny flawiwirusa HCV jest przenoszony przez cząsteczkę RNA (kwas rybonukleinowy) zawartą w strukturze wirusa. To zagrażające życiu zjawisko wyróżnia się tajemnicą na początkowym etapie patologii. Odstęp czasu między zakażeniem a wystąpieniem objawów (odpowiedź układu odpornościowego) może wynosić od jednego miesiąca do sześciu miesięcy. Z reguły choroba przyjmuje postać przewlekłą i jest trudna do wyleczenia.
Współczesna medycyna pozwala zdiagnozować patologię z niewielkim uszkodzeniem wątroby. Najbardziej powszechne i skuteczne metody diagnostyczne obejmują analizę PCR. Rozważ w tym artykule, co to jest i jakie istnieją.
Jakie jest badanie
Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C jest badaniem laboratoryjnym wykrywającym flawirus, materiał genetyczny kwasu rybonukleinowego (RNA). Określa liczbę cząsteczek RNA we krwi, jakość materiału biologicznego, typ genetyczny wirusa HCV.
Metoda PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C umożliwia wykrycie minimalnej ilości flawirusa przed utworzeniem przeciwciał, co do zasady, wkrótce po zakażeniu.
Badanie jest często określane jako analiza RNA, ponieważ wykrywa cząsteczki kwasu rybonukleinowego o wielkości 30-60 nm zawarte w flawawirusie.
Badanie przeprowadza się w następujący sposób: na pusty żołądek pacjent podaje krew z żyły, która jest następnie testowana różnymi metodami:
- PCR w czasie rzeczywistym jest przeprowadzany w sposób zamknięty w sposób zautomatyzowany i ma niższy limit wykrywania wirusa RNA, równy 15 IU / ml;
- COBAS AMPLICOR o czułości 50-100 IU / ml.
Im wyższy próg czułości techniki diagnostycznej, tym większe szanse na znalezienie najniższej zawartości wirusa w badanym materiale biologicznym.
Jakie rodzaje analizy używają
Analiza, która była z powodzeniem stosowana przez kilka dziesięcioleci, nazywana jest zapaleniem wątroby typu PCR, i można ją wykryć dość łatwo i szybko. W medycynie istnieją dwie metody reakcji, zasadniczo różne od siebie:
- metoda jakościowa ujawnia obecność w materiale biologicznym źródła genetycznego określonego wirusa;
- analiza ilościowa mierzy liczbę materii genetycznej, co pozwala określić etap patologii lub ocenić skuteczność kursu terapeutycznego;
- Genotypowanie określa rodzaj wirusa obecnego w organizmie.
Ogólnie rzecz biorąc, badanie krwi pomaga zidentyfikować naturę wiremii i rodzaj genetyczny patogenu. Z reguły badania przeprowadza się 1 raz w zależności od stopnia czułości systemu diagnostycznego. Jeśli to konieczne, ponowne badanie przeprowadza się przy użyciu odczynnika ultraczułego.
Wysokiej jakości PCR
Co to jest wysokiej jakości RNA PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C? Istota reakcji polega na obecności sekwencji RNA zapalenia wątroby, a reakcja jest możliwa tylko w obecności białek wirusowych o podobnej etymologii w teście ELISA. W procesie porównywania wykrywa się obciążenie i możliwe uszkodzenie obszaru wątroby.
Charakterystyczną cechą tej metody jest zdolność do wykrywania nawet obecności oddzielnego genu.
Należy zauważyć, że po otrzymaniu wyników testów PCR i ELISA pacjent wymaga odpowiedniego leczenia, niezależnie od ostatecznego wyniku testu immunologicznego. Pozytywny wskazuje na infekcję, a negatywny PCR wskazuje na zmniejszoną liczbę cząstek wirusowych w stosunku do poziomu czułości.
Istnieje kilka warunków, które wpływają na produkcję negatywnej reakcji PCR i ELISA:
- brak odpowiednich warunków odbioru materiałów;
- wynikowa analiza zawiera zanieczyszczenie;
- w przypadku wczesnego wstrzyknięcia heparyny pacjentowi.
Pacjent nie musi przestrzegać pewnych zasad pobierania próbek krwi do analizy PCR, w tym przypadku jakość tej analizy zależy od lekarza wykonującego zabieg. Zdolność do ustalenia obecności choroby (zwłaszcza w postaci ostrej) pojawia się w ciągu kilku tygodni po zakażeniu.
Analiza ilościowa
Zaleca się test ilościowy do wykrywania obciążenia wirusowego bezpośrednio przed utworzeniem dalszej terapii i reakcją organizmu. Proces pobierania krwi odbywa się w podobny sposób, jak przy wysokiej jakości PCR i ELISA, jedynym warunkiem jest brak możliwości palenia pacjenta przed zabiegiem.
W odniesieniu do cech uzyskanych z badania danych, zwiększone obciążenie charakteryzuje się wskaźnikami od 800000 IU / ml, niskie - 400000 IU / ml. Obecność wirusa w ciele pacjenta jest wskazana przez PCR dla zapalenia wątroby nie jest negatywnym testem jakościowym.
Ten rodzaj badań pozwala określić, jak niebezpieczny jest pacjent dla otaczających go ludzi. Na przykład identyfikacja wysokiego poziomu wskazuje na zwiększoną zakaźność pacjenta. Ponadto wyniki analizy pomagają sformułować dalsze najskuteczniejsze leczenie i określić, ile istniejącej terapii uważa się za skuteczną.
Szybka negatywna reakcja testów wskazuje na powodzenie wybranej techniki, a powolna wskazuje na potrzebę dostosowania i zastosowania leczenia wieloaspektowego.
Proces przyjmowania procedury analizy zależy od konkretnego dnia przebiegu choroby. Pierwsze oznaczenie wykonuje się pierwszego dnia po przyjęciu pacjenta do szpitala, a następnie procedurę powtarza się po 4, 12 i 24 tygodniach po przyjęciu leków.
Tak więc analiza ilościowa pokazuje, które leczenie jest najskuteczniejsze, czas trwania dostępnej terapii i niebezpieczeństwo pacjenta w stosunku do innych osób.
Genotypowanie
W badaniu analizy materiału ważne jest określenie dokładności genotypu wirusa, który ma miejsce. Obecnie istnieje 11 odmian wirusa zapalenia wątroby typu C, które z kolei obejmują pewne podgatunki.
Wszystkie te gatunki różnie reagują na różne zabiegi, a poszczególne odmiany są całkowicie odporne na wiele leków.
Genotyp umożliwia określenie i pokazanie stanu wątroby. Nie jest niczym niezwykłym, że wyniki nie są „wpisywane” w wynikach, co oznacza, że wirus we krwi pacjenta nie jest wykrywany przez ten system testowy. Można to wykryć, jeśli dany genotyp nie pasuje do tej strefy. W takiej sytuacji analiza jest powtarzana, a do badania materiału używany jest bardziej czuły system.
Metoda Ultra Sensitive
Metoda ultraczuła jest niezbędna w niektórych przypadkach, gdy diagnozy zapalenia wątroby nie można przeprowadzić innymi metodami, a kiedy wykonać analizę, decyduje lekarz prowadzący:
- jeśli podejrzewasz obecność wirusa zapalenia wątroby typu C u pacjentów z ukrytą odmianą choroby;
- obecność przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C, nie potwierdzonych przez diagnostykę PCR;
- w celu określenia jakości skuteczności wybranej metody leczenia i potwierdzenia eliminacji choroby.
Czułość tej metody jest znacznie wyższa niż powszechnie stosowana, jednak metoda ta nie wyklucza uzyskiwania fałszywych wyników, zarówno pozytywnych, jak i negatywnych. W takiej sytuacji ważne jest kontrolowanie jakości procedury i możliwości zanieczyszczenia samego materiału.
Wyjaśnienie analizy PCR
Dekodowanie analizy odbywa się na podstawie prezentowanych materiałów, natomiast wyniki badań laboratoryjnych zawierają pewne dane opisane powyżej.
Transkrypt może zawierać pozytywną reakcję łańcuchową polimerazy PCR i ujemny test ELISA w teście, co oznacza, że pacjent nie ma żadnych objawów zapalenia wątroby typu C we krwi, ale w przeszłości przeniósł ostrą postać choroby. Z reguły przy diagnozowaniu specjaliści korzystają z wskaźników testowych PCR.
Podsumowując powyższe, można stwierdzić, że w trakcie analizy ważne jest przestrzeganie wszystkich zasad i zaleceń, aby uzyskane wyniki były jak najdokładniejsze, a na podstawie uzyskanych danych można określić skuteczność zastosowanej terapii i dalszą szansę pełnego wyzdrowienia.
Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C
Do diagnozy „przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu C (CVHS)” wymagane jest kompleksowe badanie osoby, obejmujące badania kliniczne, laboratoryjne i instrumentalne. Ważna z punktu widzenia diagnozy prawidłowa diagnoza jest metoda PCR - reakcja łańcuchowa polimerazy.
Co pokazuje ta analiza i dlaczego jest potrzebna?
Ta metoda laboratoryjna wykrywa RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w ludzkiej krwi. Wraz z testem immunoenzymatycznym (ELISA) dla przeciwciał przeciwko wirusowi, PCR jest wykorzystywany do diagnozy CVHC i jego genotypu patogenu. Badanie to jest jedną z najnowszych metod diagnostyki laboratoryjnej. Jego niezawodność w CVHS przekracza 97%, co jest uważane za bardzo dobry wskaźnik do badań.
Istnieją trzy testy PCR na obecność CVHS: jakościowe, ilościowe i wirusowe. Pierwsze badanie (analiza jakościowa) wirusa wykrywa go we krwi i dlatego jest wykorzystywane wyłącznie do diagnozy.
Drugie (ilościowe) badanie określa stopień obciążenia wirusem organizmu, dlatego jest używane do monitorowania skuteczności terapii.
Trzecia PCR (genotypowanie) wyjaśnia diagnozę, ustanawiając genotyp wirusa, co jest bardzo ważne dla wyznaczenia prawidłowego leczenia przeciwwirusowego.
Istotą techniki reakcji łańcuchowej polimerazy jest zastosowanie enzymów, które zwielokrotniają materiał genetyczny patogenu w biomateriale. W procesie takiej replikacji probówkę z krwią ogrzewa się kilka razy i chłodzi do temperatury wymaganej do przyspieszenia reakcji enzymatycznej. W wyniku tych manipulacji ilość genomu wirusa wzrasta wielokrotnie, co pozwala wykryć go nawet przy minimalnej ilości.
Diagnostyka PCR ma wiele zalet w porównaniu z innymi testami laboratoryjnymi:
- wysoka czułość - 97-98%;
- gwarantowana specyficzność analityczna (ujawnia dokładnie patogen, który chcesz znaleźć, a nie związany z nim szczep);
- szybkość prowadzenia (uzyskanie wniosku zajmuje nie więcej niż 2 dni).
Trzy rodzaje testów PCR
Wysokiej jakości analiza PCR jest przypisywana wszystkim pacjentom, u których analiza ELISA wykryła przeciwciała przeciwko wirusowi HVGS. Po przeprowadzeniu PCR wysokiej jakości można uzyskać dwie opcje odpowiedzi: „wykryto RNA” lub „nie wykryto RNA”. Aby wykryć minimalną ilość wirusa we krwi, potrzebne są systemy testowe o czułości co najmniej 50 IU / ml. Jeśli stężenie wirusa we krwi pacjenta jest mniejsze niż może to określić diagnosta, wynik badania może być fałszywie ujemny. Aby uniknąć takiego błędu diagnostycznego, laboratoriom wykonującym diagnostykę PCR należy zapewnić wysoce czułe systemy testowe. Na przykład w laboratorium „Invitro” stosuje się testy o czułości 15 IU / ml. Pracownicy laboratorium są zobowiązani do przekazywania informacji na temat wrażliwości testów pacjentom i lekarzom na ich pierwszą prośbę.
Ilościowa analiza PCR określa stopień wiremii, czyli stężenie patogenu we krwi, obciążenie wirusem. Wynik tego badania, w przeciwieństwie do PCR wysokiej jakości, wyraża się w liczbach, na przykład 2 x 10 * 6 IU / ml, co oznacza 2 miliony jednostek międzynarodowych w 1 ml krwi. Niektóre laboratoria używają innego wskaźnika - liczby kopii / ml. Te dwa wskaźniki są łatwe do konwersji: 1 jednostka międzynarodowa to 4 kopie RNA. Zatem, 2 x 10 * 6 IU / ml będzie oznaczać, że 8 x 10 * 6 kopii wirusowego RNA w 1 ml, tj. 8 milionów kopii w 1 ml krwi.
Genotypowanie to definicja jednego z sześciu genotypów wirusa. Obraz kliniczny, tempo rozwoju powikłań wątroby i rokowanie dla przyszłego życia pacjenta zależą od genotypu czynnika sprawczego. Genotyp wirusa jest bardzo ważny już na etapie diagnozy, ponieważ połączenie leków i czas trwania kursu terapeutycznego, który ma być przypisany pacjentowi, zależy od jego prawidłowego określenia.
Jednak nawet to pozornie „doskonałe” badanie laboratoryjne ma swoje wady:
- badanie powiela materiał genetyczny wszystkich patogenów, nawet nieożywionych, co może zniekształcić wynik. Dlatego, aby monitorować skuteczność za pomocą PCR, ponowna analiza jest przeprowadzana nie wcześniej niż 2 miesiące po poprzedniej, aby martwe wirusy mogły „opuścić” organizm pacjenta;
- część genomu wirusa, która jest określana za pomocą systemów testowych, może teoretycznie występować w innych wirusach lub mikroorganizmach, więc istnieje możliwość fałszywej pozytywnej odpowiedzi;
- wirusy szybko się mutują. Czasami szybkość i zasięg mutacji wirusa jest tak wysoka, że system testowy przestaje łapać swój genom. W rezultacie możliwy jest fałszywy wynik negatywny.
Aby zniwelować te niedociągnięcia, producenci laboratoryjnych systemów testowych do diagnostyki PCR stale przeprowadzają swoje testy, w tym reakcje krzyżowe i wrażliwość na określony genotyp wirusa.
Jak wykonać test PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C?
Aby zakończenie badania PCR było wiarygodne, konieczne jest ścisłe przestrzeganie zasad przygotowania do jego przeprowadzenia:
- badanie prowadzone jest na czczo (glukoza, tłuszcze, minerały, które dostają się do krwi z pożywienia, mogą wpływać na szybkość i jakość reakcji enzymatycznej);
- różnica między ostatnim posiłkiem a pobraniem krwi do analizy powinna wynosić co najmniej 8 godzin;
- w przeddzień badania zabrania się spożywania alkoholu i spożywania tłustych potraw, których okres eliminacji jest długi;
- dzień przed pójściem do laboratorium należy unikać silnego stresu fizycznego i emocjonalnego;
- dopóki czas pobierania krwi nie jest zalecany do palenia.
Aby uniknąć pojawienia się fałszywych wniosków, domniemany pacjent musi przyjść do laboratorium nieco wcześniej niż krew zostanie pobrana. To zajmuje 15-20 minut, aby osoba złapała oddech, uspokój się. Adrenalina, która jest obecna we krwi po szybkim spacerze, może mieć wpływ na wynik badania.
Jeśli pacjent skierowany do analizy przyjmuje jakiekolwiek leki, powinien o tym powiadomić lekarza. Możliwe, że niektóre z nich będą musiały zostać odrzucone na jakiś czas (jeśli to możliwe).
Wynik analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C
Dekodowanie wyników w laboratorium lekarza prowadzącego laboratorium. Dekodowanie to określenie odchylenia wyniku uzyskanego od normy. Szybkość wskaźników jest ustalana bezpośrednio przez producenta systemu testowego, który jest wykorzystywany przez laboratorium do diagnostyki. Dlatego nie jest zaskakujące, że w niektórych laboratoriach obciążenie wirusem określa się w IU / ml, aw innych w kopiach / ml.
Po otrzymaniu wniosku konieczne jest prawidłowe zinterpretowanie go. Leczenie wyników badania powinno być prowadzone przez lekarza prowadzącego pacjenta z wirusowym zapaleniem wątroby typu C. Dopiero po obiektywnym, instrumentalnym i laboratoryjnym badaniu pacjenta lekarz może uzyskać wystarczającą ilość danych do prawidłowej interpretacji uzyskanych wyników PCR.
Ocena jakościowa z reguły nie powoduje trudności, nawet u pacjentów. Wynik może być tylko jeden: „wykryty” lub „nie wykryty”. W tym przypadku druga z nich jest normą.
Wskaźniki analizy ilościowej są trudniejsze do zinterpretowania. Pokazuje stopień obciążenia wirusem pacjenta. Nawet wśród hepatologów nie ma zgody co do sposobu leczenia wykrytej wiremii. Większość lekarzy jest skłonna sądzić, że należy wziąć pod uwagę duże obciążenie przekraczające 8 × 10 * 5 IU / ml. Obciążenie większe niż 1 × 10 * 7 IU / ml jest uważane za bardzo wysokie, podczas gdy niskie obciążenie jest mniejsze niż 4 × 10 * 5 IU / ml.
Stopień obciążenia wirusem wskazuje na wirulencję (agresywność) wirusa: im większa jest jego ilość we krwi, tym szybciej mogą rozwinąć się komplikacje wątroby. Wysokie stężenie wirusa we krwi kobiety ciężarnej zwiększa prawdopodobieństwo jego przeniknięcia przez barierę hemato-łożyskową do płodu. Wiremia wpływa również na skuteczność leczenia: przy niskich liczbach skuteczność terapii jest wyższa niż w przypadku terapii wysokoprocentowych.
Aby mieć pewność co do dokładności analizy PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C, należy dać pierwszeństwo tylko sprawdzonym laboratoriom. Polityka cenowa w tym przypadku nie powinna odgrywać głównej roli.