Jakościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C

Zapalenie wątroby jest poważną chorobą, która ma wiele przyczyn. Podstawą jego rozwoju jest bezpośrednie lub pośrednie uszkodzenie wątroby. Biorąc pod uwagę jego znaczenie dla całego organizmu, można tylko zgadywać, jak trudna jest patologia. W tym artykule przyjrzymy się bardziej szczegółowo cechom kursu i diagnostyce laboratoryjnej zapalenia wątroby typu C.

Przyczyną choroby jest czynnik wirusowy, który odnosi się do patogenów zawierających RNA. Ma charakterystyczną cechę - zdolność do mutacji, czyli do zmiany jej struktury. Z tego powodu zakażenie wymyka się atakowi układu odpornościowego iw większości przypadków prowadzi do przewlekłego zapalenia wątroby.

Biorąc pod uwagę istnienie różnych podtypów wirusa, wybór leków powinien opierać się na wynikach genotypowania. Pomimo długich badań nad chorobą i cechami struktury HCV, nie udało się jeszcze opracować specyficznej szczepionki na tę chorobę.

Trudności związane z wczesną diagnozą wynikają z bezobjawowego przebiegu zapalenia wątroby, w wyniku którego osoba odwiedza lekarza na etapie marskości wątroby. Aby wykryć chorobę na czas, wymagane są regularne badania lekarskie. Tylko dzięki laboratoryjnym badaniom krwi możliwe jest wykrycie HCV i zapobieganie zakażeniom osób wokół ciebie. Faktem jest, że nosiciel zakażenia może przez długi czas nie zgadywać o patologii i nadal przekazywać wirusa zdrowym ludziom.

Sposoby transmisji

W większości przypadków wirus rozprzestrzenia się przez krew, ponieważ zawiera najwyższe stężenie czynników chorobotwórczych. W ten sposób infekcja jest przesyłana:

• z hemodializą;
• z zainfekowaną igłą;
• w procesie walki, gdy skóra jest zraniona, i występuje kontakt z krwią;
• z transfuzją krwi (transfuzja krwi).

Prawdopodobieństwo zakażenia podczas intymności jest nieznaczne, ponieważ w nasieniu i wydzielinie z pochwy występuje niewielka liczba patogenów. Ryzyko infekcji jest znacznie zwiększone z naruszeniem integralności błony śluzowej narządów płciowych. Jest to obserwowane przy agresywnym i analnym seksie.

Jeśli chodzi o pionowy tryb transmisji, odbywa się on w procesie pracy. W okresie ciąży płodu patogen nie może przeniknąć przez łożysko do zarodka. Podczas naturalnego porodu czynnik chorobotwórczy jest przekazywany dziecku, gdy skóra jest uszkodzona, gdy obserwuje się kontakt z krwią matki.

Po przeniknięciu patogenu do zdrowego organizmu rozpoczyna się synteza przeciwciał, które chronią przed infekcją i należą do struktur immunologicznych. Znajdują się one w początkowym badaniu osoby stosującej ELISA.

Aby potwierdzić diagnozę, pacjenta poddaje się reakcji łańcuchowej polimerazy. Jest to analiza materiału genetycznego czynnika chorobotwórczego i określenie obciążenia wirusem.

Diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby typu C

Diagnostyka laboratoryjna rozpoczyna się od testu immunoenzymatycznego. Jego głównym zadaniem jest wykrywanie przeciwciał wytwarzanych przeciwko patogenowi. Jego wydajność wynosi prawie 95%. Dzięki tym badaniom możliwe jest zidentyfikowanie nosiciela wirusa na etapie przedklinicznym i przesłanie go do dalszego badania.

Analiza jakościowa testu ELISA wskazuje na obecność lub brak immunoglobulin we krwi pacjenta. Jego wynik może być „pozytywny” lub „negatywny”. Po otrzymaniu pierwszej odpowiedzi osoba zostaje wysłana na następne badanie - PCR. Jego cena zależy od jakości odczynników i laboratorium. Koszt reakcji łańcuchowej polimerazy może osiągnąć 4 tysiące rubli.

Funkcje PCR

Korzystając z reakcji łańcuchowej polimerazy, nawet niewielka ilość materiału biologicznego pozwala nam oszacować obciążenie wirusowe we krwi, to znaczy obliczyć stężenie patogenów w jednym mililitrze płynu.

Wraz z pojawieniem się PCR, diagnoza zapalenia wątroby stała się znacznie łatwiejsza. Analiza umożliwia identyfikację RNA HCV, ustalenie stadium procesu zakaźnego i zakaźności nosiciela wirusa.

Istnieje kilka rodzajów diagnozy genetycznej:

1. Jakościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C - potwierdza obecność lub brak HCV we krwi pacjenta:
2. ilościowy, dzięki któremu można obliczyć stężenie wirusów i ustalić stadium choroby. Wynik podaje się w IU / ml lub kopiach / ml (w zależności od laboratorium);
3. genotypowanie - niezbędne do określenia genotypu HCV. Jest to wymagane do dokładnego wyboru leków, które będą najbardziej skuteczne w tym przypadku. Analiza pośrednio wskazuje na ciężkość procesu patologicznego w wątrobie. Tak więc w trzecim genotypie patogenu najczęściej obserwuje się stłuszczenie, którego podstawą jest akumulacja tłuszczu w hepatocytach (jego komórkach). Ponadto rodzaj wirusa wpływa na wynik i czas trwania kursu terapeutycznego.

Jakościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C

Po pierwsze, materiał biologiczny jest badany w laboratorium pod kątem obecności HCV RNA. Ważne jest, aby pamiętać, że jakościowa analiza wirusowego zapalenia wątroby typu C ma pewien poziom wrażliwości i dlatego nie zawsze daje właściwą odpowiedź. W takim przypadku zaleca się przeprowadzenie diagnostyki laboratoryjnej przy użyciu innych odczynników.

Aby uzyskać wiarygodne wyniki, należy zastosować systemy testowe o czułości co najmniej 50 IU / ml.

Wynik diagnostyczny może być „pozytywny” lub „negatywny”. Jeśli patogenu nie ma we krwi, badanie jest zakończone. Jeśli w próbce wykryty zostanie czynnik patogenny, oznacza się ilościowo wirusa.

Odpowiedź fałszywie ujemna jest uzyskiwana, gdy proces jest naruszany, na przykład aktywne składniki, które tłumią budowę kopii patogenu, wchodzą do ośrodka. Dlatego nie jest możliwe wyświetlenie prawdziwego obrazu krwi, dlatego nie rozpoznaje się zakażenia.

Fałszywie dodatni wynik można uzyskać, jeśli probówka do pobierania materiału biologicznego, jak również środowisko do badania były zanieczyszczone. Ponadto taka odpowiedź na analizę jest możliwa w przypadku infekcji mieszanych, gdy na wątrobę wpływa kilka wirusów, na przykład wirusowe zapalenie wątroby typu C i D.

Wskazania do badań jakościowych

Lekarz może przepisać pacjentowi badanie jakościowe dotyczące identyfikacji RNA wirusa zapalenia wątroby typu C:

• po otrzymaniu pozytywnej lub wątpliwej odpowiedzi immunoenzymatycznej;
• do weryfikacji diagnozy;
• określić obciążenie wirusem;
• ustalenie stadium choroby;
• diagnoza mieszanej infekcji. Wirusowe zapalenie wątroby typu C często zakaża wątrobę równocześnie z wirusem „D”;
• określenie taktyk terapeutycznych z uwzględnieniem genotypu czynnika sprawczego;
• ocena dynamiki zmian podczas leczenia lekami przeciwwirusowymi.

Zalety reakcji łańcuchowej polimerazy obejmują:

1. wysoka czułość techniki, która pozwala ustalić fakt zakażenia na etapie przedklinicznym;
2. identyfikacja materiału genetycznego patogenu, a nie jego przeciwciał;
3. możliwość ustanowienia podtypu czynnika chorobotwórczego;
4. wysoki wskaźnik diagnostyczny, ponieważ nie jest wymagane wysiewanie materiału na pożywkę, a wystarczy użyć specjalnych systemów testowych. Osoba otrzymuje wynik po 5 godzinach;
5. wszechstronność. Analiza pozwala zidentyfikować dowolny materiał genetyczny (RNA, DNA). Dzięki temu lekarz może potwierdzić zapalenie wątroby typu C i inne rodzaje choroby (B);
6. zdolność do wykrywania utajonej infekcji.

Badania ilościowe

W badaniu krwi za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy można obliczyć liczbę patogenów w ustalonej objętości materiału biologicznego. Wskaźnik jest przedstawiony w IU / ml. Poprzez analizę można określić stopień zakażenia pacjenta, określić etap procesu zakaźnego, a także ocenić skuteczność terapii lekowej.

Na podstawie PCR specjalista decyduje, które dawki leków mogą blokować reprodukcję patogenów. Ponadto określa się czas trwania leczenia przeciwwirusowego i rokowania na całe życie. Ważne jest, aby pamiętać, że systemy testowe mają wysoką czułość, dlatego metoda umożliwia potwierdzenie zakażenia osoby na etapie przedklinicznym.

Genotypowanie

Biorąc pod uwagę zdolność mutanta patogenu, jego genotyp jest niezbędny do określenia taktyki leczenia i wyboru leków przeciwwirusowych. Na przykład leczenie HCV 1 trwa 48 tygodni, a pozytywny trend obserwuje się tylko w 60% przypadków. Genotypy 2 i 3 mają korzystniejsze rokowanie. Leki przeciwwirusowe są przepisywane przez 8 miesięcy, a ich skuteczność sięga 85%.

Według statystyk, w większości przypadków HCV 1, 2 i 3 są zarejestrowane w Federacji Rosyjskiej.

Podczas odczytywania testu laboratoryjnego odpowiedź ta może być wskazana - „nie wpisano”. Oznacza to, że wirus krąży w układzie krążenia pacjenta i nie może zostać rozpoznany przez system testowy. Wynik analizy w tym przypadku wskazuje, że patogen nie jest typowy dla danego obszaru geograficznego.

Jak uzyskać wiarygodne wyniki?

Aby jakościowe badanie PCR w celu wykrycia RNA czynnika sprawczego zapalenia wątroby typu C wykazało prawidłowe wyniki, konieczne jest przestrzeganie wymagań dotyczących przygotowania do diagnostyki laboratoryjnej:

1. pobieranie krwi odbywa się na pusty żołądek, a „głodna” przerwa nie powinna być krótsza niż 8 godzin;
2. dwa dni przed badaniem zaleca się zaprzestanie picia napojów alkoholowych i porzucenie pikantnych, tłustych i wędzonych potraw;
3. anulować wprowadzenie leków zmniejszających krzepliwość krwi, na przykład heparyny. Jeśli te leki są przepisane ze względów zdrowotnych, należy powiadomić o tym lekarza. Ponadto specjalista powinien być świadomy przyjmowania innych leków, które mogą mieć wpływ na wyniki badań laboratoryjnych;
4. W przeddzień zbiórki materiału biologicznego procedury fizjoterapeutyczne nie powinny być przeprowadzane i powinny być poddawane ciężkiemu wysiłkowi fizycznemu.

Na wyniki analizy może mieć wpływ nie tylko osoba, która oddaje krew, ale także inne czynniki, a mianowicie:

• złe pobieranie próbek krwi;
• niezgodność z zaleceniami dotyczącymi transportu materiału biologicznego;
• niewystarczające szkolenie pracowników laboratoriów;
• nieprzestrzeganie techniki badawczej;
• wprowadzenie antykoagulantów (heparyny) w przeddzień pobierania krwi. Ta grupa leków zmniejsza krzepnięcie, spowalniając pracę odczynników.

W różnych laboratoriach odpowiedź diagnostyczna może się nieznacznie różnić, ale błędy te nie wpływają na końcowy wynik badania.

Szczególną uwagę poświęca się rodzajom systemów testowych stosowanych w laboratorium. Często preferowane są odczynniki o wysokiej czułości. Jest to ważne dla pacjentów z niskim obciążeniem wirusowym, ponieważ jest trudne do wykrycia.

Jak często przeprowadzany jest test laboratoryjny?

Pierwotną reakcję łańcuchową polimerazy przeprowadza się u ludzi, którzy zostali wykryci za pomocą testu immunologicznego na przeciwciała przeciwko patogenowi zapalenia wątroby. W tym przypadku jest on przeznaczony do potwierdzenia faktu zakażenia osoby i ustalenia stadium choroby. Ponadto analiza pozwala na określenie podtypu wirusa, co jest szczególnie ważne przy wyborze leków.

Następny okres obowiązkowych badań laboratoryjnych to 3 miesiące od rozpoczęcia leczenia przeciwwirusowego. Diagnostyka umożliwia ocenę skuteczności leków, dostosowanie dawki lub ich zastąpienie.

Oprócz testów podstawowych, PCR można dodatkowo wykonać w 4 i 24 tygodnie od rozpoczęcia leczenia. Pozytywną prognozę choroby potwierdza spadek miana wirusa po trzech miesiącach terapii. Na przykład powinno się zmniejszyć z 1 miliona IU / ml do kilkuset tysięcy.

Jeśli stężenie czynników chorobotwórczych we krwi pozostaje na tym samym poziomie lub nieznacznie wzrasta, wskazuje to na nieskuteczność środków przeciwwirusowych i wymaga ich zastąpienia. Za pomocą PCR na koniec leczenia można potwierdzić powrót pacjenta do zdrowia.

Aby prawidłowo zinterpretować wyniki diagnostyki laboratoryjnej, wymagana jest konsultacja z hepatologiem lub specjalistą chorób zakaźnych. Biorąc pod uwagę wysoką częstość fałszywych odpowiedzi w teście ELISA, analiza jest wykorzystywana wyłącznie do pierwotnych badań przesiewowych. W celu dokładniejszego zbadania pacjenta zastosowano reakcję łańcuchową polimerazy.

Pro analiza PCR dla wirusa zapalenia wątroby typu C.

Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest poważną chorobą wątroby dla każdej osoby. Patologia jest powodowana przez flawiwirus HCV, w którego strukturze obecna jest cząsteczka RNA, która nosi ogólny kod genetyczny wirusa.

Patologia może mieć różne formy, wszystko bezpośrednio zależy od ogólnego stanu osoby i cech każdego indywidualnego organizmu.

Ta struktura umożliwia analizę PCR na obecność w organizmie wirusa kategorii zapalenia wątroby typu C.

Pozwala na szybkie zidentyfikowanie wirusa, który jest niebezpieczny dla ludzi, poddany leczeniu farmakologicznemu i przywróceniu zdrowia, chroniąc organizm przed zniszczeniem wątroby.

Wirus HCV może manifestować się zarówno w ostrej - niebezpiecznej postaci, jak iw przewlekłej. Jeśli dana osoba została w tym samym czasie wykryta, musi zostać przypisana do analizy PCR.

Dlaczego przeprowadzana jest analiza PCR?

Na podstawie wyników analizy lekarz będzie mógł opracować schemat leczenia.

Laboratoryjna analiza medyczna PCR dla zapalenia wątroby typu C jest badaniem materiału biologicznego pobranego w celu określenia flawawirusa. Badanie oznacza reakcję łańcuchową polimerazy.

Pokazuje całkowitą wartość ilościową zmiany wirusowej, jej właściwości jakościowe, a także możliwe jest określenie genotypu wirusa zawierającego RNA.

To ważne! Na podstawie tej analizy lekarz określa metodę, rodzaj terapii i czas jej trwania. Ponadto poprzez analizę można określić ogólny czynnik epidemiologiczny, czyli poziom ryzyka przeniesienia choroby na innych nosicieli.

Analiza we współczesnej medycynie nazywana jest również analizą RNA. Powodem jest to, że wrodzony flawawirusowi zapalenia wątroby typu C składa się z cząsteczki RNA, której rozmiar wynosi około 30-60 nm. Jedną z charakterystycznych cech tego wirusa jest pewna skłonność do mutacji.

Każdy obecny podgatunek lub genotyp ma różnorodną odporność. Ta okoliczność staje się podstawą różnych metod badań i leczenia choroby, a także dalszych rokowań przy dobrze przeprowadzonej terapii.

Jak to zrobić

Analizę przeprowadza się wyłącznie na czczo, to znaczy krew żylną podaje się przed śniadaniem. Metodę testowania przeprowadza się za pomocą Real-Time PCR lub wysoce czułej dzięki nowoczesnej diagnostyce standardów, która jest przeprowadzana w czasie rzeczywistym.

Dolna granica wykrywalności w tym przypadku wynosi 15 IU / ml. Analiza przeprowadzana jest ściśle przy użyciu zamkniętych systemów automatycznych. Wirusowe zapalenie wątroby typu C można określić za pomocą testów, takich jak COBAS AMPLICOR z jego całkowitym poziomem czułości 50-100 IU / ml.

To ważne! Wszystkie rodzaje podobnych nowoczesnych badań laboratoryjnych są prowadzone na podstawie uwzględnienia pewnego progu wrażliwości.

Mówimy o zdolności odczynnika do wykrywania minimalnego poziomu zdolności odczynnika do określania wirusa w badanym materiale biologicznym. Jeśli w ciele nie ma choroby, wynik badania będzie wyglądał jak „nie znaleziono”.

Zdjęcie przedstawia obwód analizy PCR:

Rodzaje analizy PCR i jej wyniki

Jeśli masz najmniej drobne dolegliwości i ból w dziedzinie ciasteczek, natychmiast skonsultuj się z lekarzem, który przeprowadzi dokładne badanie. Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C opiera się na trzech głównych punktach:

1. Analiza ilościowa.
2. Analiza jakościowa.
3. Genotypowanie

Wykonane testy dają możliwość określenia i identyfikacji dokładnej natury wiremii i różnych objawów planu genetycznego obecności patogenu. Bezpośrednio proporcjonalnie do wrażliwości z przeprowadzonego systemu diagnostycznego, badania medyczne mogą być przeprowadzone raz, jak również pewne potwierdzenie.

Należy to zrobić w celu wyjaśnienia wcześniej uzyskanych wyników i jest w tym przypadku stosowane przez bardziej wrażliwy odczynnik.

Wysokiej jakości PCR

Analiza jakościowa PCR jest inną nazwą badania, taką jak reakcja łańcuchowa polimerazy. Przy standardowej czułości testu, która pozwala określić obecność drobnoustroju wirusowego, wskaźniki będą w zakresie 10-500 IU / ml.

Przy negatywnej analizie choroby analiza wykaże, że całkowity poziom stężenia we krwi pacjenta będzie o rząd wielkości niższy niż ogólny próg wrażliwości dla systemu diagnostycznego.

Jeśli podczas jakościowego PCR uzyskano odpowiedź „nie wykryto”, w celu dalszego leczenia należy znać całkowity próg czułości odczynnika. Jeśli chodzi o pozytywną odpowiedź, podczas analizy PCR można ją uzyskać już 4 dnia po zakażeniu. Standardowe frakcje białkowe do ustalonych flawawirusów mogą pojawić się znacznie później.

Ogólny schemat analiz PCR można przedstawić w następujący sposób:

Ilościowa PCR

Ilościowa PCR jest specjalnym wskaźnikiem wytwarzanego wirusa, odzwierciedlającym ogólny poziom stężenia RNA wirusa w organizmie człowieka. Wskaźnik ten pokazuje ilość wirusowych enzymów RNA obecnych na centymetr sześcienny pobranych z żyły krwi.

Wyniki tego badania w systemie badań medycznych oznaczono w jednostkach jednego mililitra. W przypadku certyfikatów wydawanych w ręce wskaźnik ten może wyglądać jak 1,7 mln lub 1 700 000 IU / ml.

Ilościowa analiza PCR jest przypisywana tym pacjentom przed przeprowadzeniem terapii przeciwwirusowej. Drugi raz odbywa się w 12 tygodniu leczenia, co pozwala na prawidłową ocenę wyników leczenia zapalenia wątroby typu C. Innymi słowy, analiza umożliwia określenie tak ważnych parametrów jak:

1. Określa się poziom zakaźności, czyli stopień ryzyka przenoszenia drobnoustrojów od osoby zakażonej do osoby zdrowej. Im wyższe stężenie flawawirusa RNA, tym większe prawdopodobieństwo zakażenia innej osoby, co jest ważne w relacjach seksualnych.
2. Ogólny poziom skuteczności i wybrana metoda leczenia.
3. Jest to idealna okazja do określenia czasu trwania i rokowania terapii przeciwwirusowej. Z reguły im większe obciążenie, tym dłużej trwa leczenie.

Warto wiedzieć, że ilościowy PCR zależy od konkretnego typu testu laboratoryjnego i progu czułości. Najniższą granicą ustalonej normy jest wskaźnik nie osiągający 600 000 IU / ml.

Średnia mieści się w zakresie od 600 000 do 700 000 IU / ml. Jeśli wyniki uzyskano powyżej 800 000 IU / ml, lekarz natychmiast określa wysoki poziom stężenia substancji, takiej jak RNA, z wirusem obecnym w kompozycji.

To ważne! Bezpośrednia zależność między poziomem RNA HCV a nasileniem choroby wskazuje, że wirus ten jest obecny w ogólnym składzie krwi, a także zauważa złożoność patologii. Pacjent może mieć wystarczająco wysokie obciążenie wirusem. Ponadto zależność ta wskazuje, że komórki są poważnie uszkodzone.

Genotypowanie

Ze względu na stosunkowo wysoką aktywność mutacyjną HCV w naturze, w trakcie przeprowadzanych testów można określić, jak typ wirusa jest obecny we krwi chorego. We współczesnej medycynie znanych jest 11 genotypów wirusa, takiego jak wirusowe zapalenie wątroby typu C. Obejmuje ono dość dużą liczbę różnych podgatunków lub podtypów.

Typy 1, 2 i 3 są znane i powszechne w Rosji, generalnie genotypowanie jest bardzo ważnym elementem przeprowadzanej analizy. Dzięki temu lekarz rozumie poziom oporności lub odporności patologii na wybrane leki.

Prawie zawsze, na podstawie tej analizy, budowane jest przyszłe leczenie. Jest to ważne, ponieważ istnieją zasady leczenia, takie jak:

Analiza jakościowa zapalenia wątroby typu C

8 marca 2017, 12:29 Artykuły eksperckie: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10 547

Analiza jakościowa reakcji łańcuchowej polimerazy - PCR dla zapalenia wątroby typu C określa obecność lub brak HCV w organizmie. W warunkach laboratoryjnych bada się strukturę RNA, która obejmuje wirusa. W przypadku wykrycia wirusa C konieczne jest przeprowadzenie leczenia, ponieważ zaniedbany stan wątroby spowoduje poważne konsekwencje. PCR wysokiej jakości przeprowadza się po odzyskaniu, aby potwierdzić brak przeciwciał. Powołany i do rutynowej kontroli. Przy niskim stężeniu czynnika sprawczego we krwi, PCR (jakościowy) może niczego nie wykryć, ponieważ system diagnostyczny ma własne progi czułości. W przypadku początkowej fazy choroby lub łagodnej postaci PCR przeprowadza się za pomocą ultradiagnostyki na ultraczułym sprzęcie.

Co to jest wirus RNA?

Termin RNA wirusa zapalenia wątroby typu C (lub RNA wirusa zapalenia wątroby typu C) jest chorobą wątroby. Wirus C wiąże się ze zdrową komórką ciała, penetrując do środka. Z biegiem czasu, rozprzestrzeniając się po całym ciele, konieczne jest tylko dostanie się do krwi. W rezultacie patogen przenika do wątroby, łączy się z komórkami i ciężko pracuje. Komórki wątrobowe (hepatocyty) działają pod jego wpływem, ulegają zmianom i z tego powodu umierają. Im dłużej wirus C znajduje się w wątrobie, tym większa liczba komórek umiera. Z czasem rozwijają się niebezpieczne choroby, prowadzące do złośliwej degeneracji i śmierci.

Zakażenie wątroby tym typem wirusa może nie objawiać się zewnętrznie. Przez wiele lat lub dziesięcioleci zakażona osoba czuje się całkowicie zdrowa, a tylko przypadkowe badanie ujawnia patologię. Przy oddawaniu krwi na zapalenie wątroby badana jest część łańcucha RNA (kwasu rybonukleinowego), który jest częścią ludzkiego genu (DNA). Wyniki badań laboratoryjnych nie powinny być wykorzystywane do samoleczenia, ponieważ jest to tylko wskaźnik. Dokładny obraz i dalsza diagnoza są lepiej określone przez lekarza.

Po zakończeniu: wskazania do badań

W potwierdzeniu HCV przeprowadza się analizę PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy). Badania PCR pomagają znaleźć czynnik sprawczy w strukturze RNA i zalecają skuteczną terapię. Wyznaczony w następujących przypadkach:

• wykrywanie objawów zapalenia wątroby;
• badania przesiewowe w celu zapobiegania;
• badanie osób mających kontakt;
• diagnoza zapalenia wątroby o mieszanym pochodzeniu (oznaczanie głównego patogenu);
• określenie poziomu aktywności reprodukcyjnej wirusa w postaci przewlekłej;
• marskość wątroby;
• określić skuteczność przepisanego leczenia.

Badanie PCR zaleca lekarzowi określenie skuteczności leczenia zapalenia wątroby.

Istnieje jakościowa i ilościowa analiza PCR. Ilościowa PCR pokazuje procent RNA z nosicielami wirusa we krwi, a jakość wskazuje na obecność lub nieobecność wirusa. Pozytywny wskaźnik jakości (obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C) również wymaga badań ilościowych. Wysoki poziom stężenia czynnika wywołującego wirusowe zapalenie wątroby typu C wiąże się z ryzykiem jego przeniesienia, czyli zakażenia innych. Niskie liczby są lepsze do leczenia. Ilość wirusów RNA we krwi nie jest związana z intensywnością choroby. Analiza PCR jest również przeprowadzana w przypadku terapii interferonem w celu określenia czasu trwania i złożoności przebiegu leczenia.

Cechy wysokiej jakości analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C

Analizie jakościowej przypisuje się wskaźnik reakcji łańcuchowej polimerazy dla wszystkich pacjentów, którzy mają we krwi przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C. Ci, którzy byli chorzy i wyzdrowieni, muszą ponownie przystąpić do testu. Zaleca się zaliczenie testu na wirusowe zapalenie wątroby typu B, a następnie, w przypadku pozytywnego wyniku, i na wirusowe zapalenie wątroby typu D. Również jakościowo analizowana reakcja powinna być przeprowadzona w połączeniu z innymi badaniami krwi. Analizy pokażą pełny obraz rozprzestrzeniania się wirusa.

Z wyników testu wynika, że ​​tylko pozytywny wynik testu na wirusowe zapalenie wątroby typu C będzie widoczny lub negatywny, czyli obecność lub brak wirusa. Jeśli dane wyjściowe są „wykrywane”, wirus jest i nadal jest aktywny. Oznaczenie „nie wykryto” wskazuje na brak wirusa lub jego niewielką ilość. Przy tym wskaźniku należy pamiętać, że czułość analityczna systemów diagnostycznych jest różna i że wirusowe zapalenie wątroby typu C może nadal znajdować się we krwi, ale nie przejawia się w analizie.

Szczególnie wrażliwa metoda PCR ujawnia ultra hepatitis C nawet w niewielkich ilościach. Stosuje się badanie hybrydyzacji fluorescencyjnej, które jest wielokrotnie wyższe niż standardowe systemy PCR. Metoda jest stosowana w kilku przypadkach:

• podejrzewane ukryte formy wirusowego zapalenia wątroby typu C;
• Diagnostyka PCR nie potwierdziła patogenu, ale istnieją przeciwciała;
• w przypadku odzyskiwania;
• wykryć wczesne zakażenie.

Powrót do spisu treści

Analiza dekodowania

Dekodowanie PCR HCV wpływa na ostateczną decyzję podczas diagnozy, w szczególności metodą ultrametodową. Główną wadą tego badania jest ścisłe przestrzeganie sterylnych warunków dla próbki i materiałów. Nieznaczne odchylenie czasami pokazuje niedokładne wnioski analityczne, komplikuje diagnozę i późniejsze leczenie. Analiza PCR w celu określenia zapalenia wątroby RNA nie zawsze z pewnością pokazuje obraz choroby, czasami dopuszcza się niedokładności iw obu kierunkach.

Diagnozowanie wirusa zapalenia wątroby zaleca się przeprowadzenie kompleksowego badania.

Norma wskaźników

Brak przeciwciał JgM przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C w wynikach badania jest uważany za normę w analizie reakcji łańcuchowej polimerazy. Jednocześnie wyniki analizy serologicznej wskazują na obecność przeciwciał przeciwko wirusowi C i jest to również w normalnym zakresie. Definicja jakościowa nie pokazuje intensywności choroby, ujawnia jedynie czynnik sprawczy wirusowego zapalenia wątroby typu C w RNA. Ta analiza jest powtarzana po zabiegu, aby potwierdzić faktyczny powrót do zdrowia.

Odchylenia

Jeśli obecne są przeciwciała JgM na RNA HCV, wskazuje to na rozwijającą się infekcję. Choroba w tym samym czasie postępuje ostro lub chronicznie, objawia się w różnych stadiach. Jeśli odnotowano spadek liczby przeciwciał, analiza wskaże, że wyniki leczenia zostały osiągnięte podczas powrotu do zdrowia. Istnieją niezwykle rzadkie przypadki fałszywie dodatnich wyników w diagnostyce. Występują u kobiet w czasie ciąży iu osób z innymi chorobami zakaźnymi.

Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C

Do diagnozy „przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu C (CVHS)” wymagane jest kompleksowe badanie osoby, obejmujące badania kliniczne, laboratoryjne i instrumentalne. Ważna z punktu widzenia diagnozy prawidłowa diagnoza jest metoda PCR - reakcja łańcuchowa polimerazy.

Co pokazuje ta analiza i dlaczego jest potrzebna?

Ta metoda laboratoryjna wykrywa RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w ludzkiej krwi. Wraz z testem immunoenzymatycznym (ELISA) dla przeciwciał przeciwko wirusowi, PCR jest wykorzystywany do diagnozy CVHC i jego genotypu patogenu. Badanie to jest jedną z najnowszych metod diagnostyki laboratoryjnej. Jego niezawodność w CVHS przekracza 97%, co jest uważane za bardzo dobry wskaźnik do badań.

Istnieją trzy testy PCR na obecność CVHS: jakościowe, ilościowe i wirusowe. Pierwsze badanie (analiza jakościowa) wirusa wykrywa go we krwi i dlatego jest wykorzystywane wyłącznie do diagnozy.

Drugie (ilościowe) badanie określa stopień obciążenia wirusem organizmu, dlatego jest używane do monitorowania skuteczności terapii.

Trzecia PCR (genotypowanie) wyjaśnia diagnozę, ustanawiając genotyp wirusa, co jest bardzo ważne dla wyznaczenia prawidłowego leczenia przeciwwirusowego.

Istotą techniki reakcji łańcuchowej polimerazy jest zastosowanie enzymów, które zwielokrotniają materiał genetyczny patogenu w biomateriale. W procesie takiej replikacji probówkę z krwią ogrzewa się kilka razy i chłodzi do temperatury wymaganej do przyspieszenia reakcji enzymatycznej. W wyniku tych manipulacji ilość genomu wirusa wzrasta wielokrotnie, co pozwala wykryć go nawet przy minimalnej ilości.

Diagnostyka PCR ma wiele zalet w porównaniu z innymi testami laboratoryjnymi:

• wysoka czułość - 97-98%;
• gwarantowana specyficzność analityczna (ujawnia dokładnie patogen, który chcesz znaleźć, a nie związany z nim szczep);
• szybkość prowadzenia (uzyskanie wniosku zajmuje nie więcej niż 2 dni).

Trzy rodzaje testów PCR

Wysokiej jakości analiza PCR jest przypisywana wszystkim pacjentom, u których analiza ELISA wykryła przeciwciała przeciwko wirusowi HVGS. Po przeprowadzeniu PCR wysokiej jakości można uzyskać dwie opcje odpowiedzi: „wykryto RNA” lub „nie wykryto RNA”. Aby wykryć minimalną ilość wirusa we krwi, potrzebne są systemy testowe o czułości co najmniej 50 IU / ml. Jeśli stężenie wirusa we krwi pacjenta jest mniejsze niż może to określić diagnosta, wynik badania może być fałszywie ujemny. Aby uniknąć takiego błędu diagnostycznego, laboratoriom wykonującym diagnostykę PCR należy zapewnić wysoce czułe systemy testowe. Na przykład w laboratorium „Invitro” stosuje się testy o czułości 15 IU / ml. Pracownicy laboratorium są zobowiązani do przekazywania informacji na temat wrażliwości testów pacjentom i lekarzom na ich pierwszą prośbę.

Ilościowa analiza PCR określa stopień wiremii, czyli stężenie patogenu we krwi, obciążenie wirusem. Wynik tego badania, w przeciwieństwie do PCR wysokiej jakości, wyraża się w liczbach, na przykład 2 x 10 * 6 IU / ml, co oznacza 2 miliony jednostek międzynarodowych w 1 ml krwi. Niektóre laboratoria używają innego wskaźnika - liczby kopii / ml. Te dwa wskaźniki są łatwe do konwersji: 1 jednostka międzynarodowa to 4 kopie RNA. Zatem, 2 x 10 * 6 IU / ml będzie oznaczać, że 8 x 10 * 6 kopii wirusowego RNA w 1 ml, tj. 8 milionów kopii w 1 ml krwi.

Genotypowanie to definicja jednego z sześciu genotypów wirusa. Obraz kliniczny, tempo rozwoju powikłań wątroby i rokowanie dla przyszłego życia pacjenta zależą od genotypu czynnika sprawczego. Genotyp wirusa jest bardzo ważny już na etapie diagnozy, ponieważ połączenie leków i czas trwania kursu terapeutycznego, który ma być przypisany pacjentowi, zależy od jego prawidłowego określenia.

Jednak nawet to pozornie „doskonałe” badanie laboratoryjne ma swoje wady:

• badanie powiela materiał genetyczny wszystkich patogenów, nawet nieożywionych, co może zniekształcić wynik. Dlatego, aby monitorować skuteczność za pomocą PCR, ponowna analiza jest przeprowadzana nie wcześniej niż 2 miesiące po poprzedniej, aby martwe wirusy mogły „opuścić” organizm pacjenta;
• część genomu wirusa, która jest określana za pomocą systemów testowych, może teoretycznie występować w innych wirusach lub mikroorganizmach, więc istnieje możliwość fałszywej pozytywnej odpowiedzi;
• wirusy szybko się mutują. Czasami szybkość i zasięg mutacji wirusa jest tak wysoka, że ​​system testowy przestaje łapać swój genom. W rezultacie możliwy jest fałszywy wynik negatywny.

Aby zniwelować te niedociągnięcia, producenci laboratoryjnych systemów testowych do diagnostyki PCR stale przeprowadzają swoje testy, w tym reakcje krzyżowe i wrażliwość na określony genotyp wirusa.

Jak wykonać test PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C?

Aby zakończenie badania PCR było wiarygodne, konieczne jest ścisłe przestrzeganie zasad przygotowania do jego przeprowadzenia:

• badanie prowadzone jest na czczo (glukoza, tłuszcze, minerały, które dostają się do krwi z pożywienia, mogą wpływać na szybkość i jakość reakcji enzymatycznej);
• różnica między ostatnim posiłkiem a pobraniem krwi do analizy powinna wynosić co najmniej 8 godzin;
• w przeddzień badania zabrania się spożywania alkoholu i spożywania tłustych potraw, których okres eliminacji jest długi;
• dzień przed pójściem do laboratorium należy unikać silnego stresu fizycznego i emocjonalnego;
• dopóki czas pobierania krwi nie jest zalecany do palenia.

Aby uniknąć pojawienia się fałszywych wniosków, domniemany pacjent musi przyjść do laboratorium nieco wcześniej niż krew zostanie pobrana. To zajmuje 15-20 minut, aby osoba złapała oddech, uspokój się. Adrenalina, która jest obecna we krwi po szybkim spacerze, może mieć wpływ na wynik badania.

Jeśli pacjent skierowany do analizy przyjmuje jakiekolwiek leki, powinien o tym powiadomić lekarza. Możliwe, że niektóre z nich będą musiały zostać odrzucone na jakiś czas (jeśli to możliwe).

Wynik analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C

Dekodowanie wyników w laboratorium lekarza prowadzącego laboratorium. Dekodowanie to określenie odchylenia wyniku uzyskanego od normy. Szybkość wskaźników jest ustalana bezpośrednio przez producenta systemu testowego, który jest wykorzystywany przez laboratorium do diagnostyki. Dlatego nie jest zaskakujące, że w niektórych laboratoriach obciążenie wirusem określa się w IU / ml, aw innych w kopiach / ml.

Po otrzymaniu wniosku konieczne jest prawidłowe zinterpretowanie go. Leczenie wyników badania powinno być prowadzone przez lekarza prowadzącego pacjenta z wirusowym zapaleniem wątroby typu C. Dopiero po obiektywnym, instrumentalnym i laboratoryjnym badaniu pacjenta lekarz może uzyskać wystarczającą ilość danych do prawidłowej interpretacji uzyskanych wyników PCR.

Ocena jakościowa z reguły nie powoduje trudności, nawet u pacjentów. Wynik może być tylko jeden: „wykryty” lub „nie wykryty”. W tym przypadku druga z nich jest normą.

Wskaźniki analizy ilościowej są trudniejsze do zinterpretowania. Pokazuje stopień obciążenia wirusem pacjenta. Nawet wśród hepatologów nie ma zgody co do sposobu leczenia wykrytej wiremii. Większość lekarzy jest skłonna sądzić, że należy wziąć pod uwagę duże obciążenie przekraczające 8 × 10 * 5 IU / ml. Obciążenie większe niż 1 × 10 * 7 IU / ml jest uważane za bardzo wysokie, podczas gdy niskie obciążenie jest mniejsze niż 4 × 10 * 5 IU / ml.

Stopień obciążenia wirusem wskazuje na wirulencję (agresywność) wirusa: im większa jest jego ilość we krwi, tym szybciej mogą rozwinąć się komplikacje wątroby. Wysokie stężenie wirusa we krwi kobiety ciężarnej zwiększa prawdopodobieństwo jego przeniknięcia przez barierę hemato-łożyskową do płodu. Wiremia wpływa również na skuteczność leczenia: przy niskich liczbach skuteczność terapii jest wyższa niż w przypadku terapii wysokoprocentowych.

Aby mieć pewność co do dokładności analizy PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C, należy dać pierwszeństwo tylko sprawdzonym laboratoriom. Polityka cenowa w tym przypadku nie powinna odgrywać głównej roli.

Zastosowanie diagnostyki PCR

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w biologii molekularnej jest eksperymentalną metodą wykrywania wirusów. Pozwala znacząco zwiększyć stężenie niektórych fragmentów kwasu nukleinowego (DNA) w próbkach materiału biologicznego, co umożliwia ich określenie (rozpoznanie) i policzenie.

Analizę przeprowadza się w następujący sposób. Materiał genetyczny (próbka krwi), który potencjalnie może zawierać pożądany gen, jest wprowadzany do probówki. Umieszczono także startery - chemicznie zsyntetyzowane segmenty o małej długości pożądanego genu.

Do naczynia dodaje się również polimerazę DNA lub RNA, która jest w stanie ustawić łańcuch kwasu nukleinowego całkowicie identyczny z oryginalnym. Powstałą kompozycję wstrzykuje się i zestaw czterech wolnych nukleotydów - specjalny materiał budowlany na RNA lub DNA, z których jeden zawiera radioaktywne cząstki fosforu.

Powstała mieszanina jest podgrzewana do 95–96 ° C, dlatego tkane są dwie helisy DNA, które są zwykle splecione. Następnie lek jest chłodzony, w którym to czasie startery same przyłączają się do pożądanego regionu genomu wirusa, zapobiegając ponownemu tworzeniu podwójnej helisy RNA (lub DNA).

W procesie chłodzenia polimeraza szuka wolnego łańcucha nukleotydowego. Do funkcjonowania tego enzymu potrzebny jest pojedynczy łańcuch nukleotydów. Ponieważ polimeraza ślizga się wzdłuż łańcucha DNA (jak pierścień na linie), nie jest w stanie pracować na podwójnej helisie.

Następnie przeprowadzany jest powtarzany cykl ogrzewania, dzięki któremu łańcuchy nukleotydów są rozdzielane. W każdym z tych cykli PCR ilość próbki pożądanego genu zapalenia wątroby wzrasta wykładniczo, a reszta materiału genetycznego jest wytwarzana (rośnie) liniowo.

Po oczyszczeniu roztworu z reszt nukleotydowych i rozdzieleniu przez elektroforezę łańcuchów DNA za pomocą parametru masy cząsteczkowej, można łatwo określić, czy w badanej próbce znajduje się pożądany gen, czy nie.

Zalety PCR

Testy laboratoryjne z użyciem PCR pozwalają uzyskać jeszcze więcej informacji niż obecność RNA wirusa. Określając parametr poziomu promieniowania radioaktywnego, można określić, ile materiału genetycznego pierwotnie znajdowało się w badanej próbce. W przypadku zapalenia wątroby należy określić wskaźnik poziomu wiremii.

Kolejną zaletą tej metody jest bardzo wysoki stopień czułości reakcji CR. Jest znacznie wyższy niż klasyczne metody wykrywania wirusów. Idealnie, w celu zidentyfikowania pożądanego genu, do PCR wystarczy tylko jeden wirus w próbce.

Ponadto PCR jest całkowicie specyficzna. Jego startery są zaprojektowane w taki sposób, że w pełni odpowiadają unikalnym regionom pożądanych genów, których nie ma żadna inna sekwencja. Podobnie jak odciski palców są unikalne, każdy gen ma unikalne sekwencje nukleotydów.

Analiza jakościowa PCR

Analiza jakościowa ujawnia jedynie obecność wirusa we krwi. Ten test należy przeprowadzić u wszystkich pacjentów, u których we krwi wykryto przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C. Może to spowodować tylko jedną z dwóch wartości: „wykryta” lub „nie wykryta”. U zdrowej osoby norma (wartość referencyjna) powinna być „niewykrywana”.

Istnieje specjalna interpretacja takich wyników badań jakościowych:

• Wynik jest „wykrywany”. Oznacza to, że w analizowanej próbce materiału biologicznego znaleziono fragment RNA, który jest specyficzny dla wirusa zapalenia wątroby typu C. W konsekwencji, istnieje fakt, że pacjent jest zakażony wirusem zapalenia wątroby typu C. Jeśli wynik wysokiej jakości PCR jest „wykryty”, oznacza to, że wirus mnoży się iw tym czasie infekuje nowe komórki wątroby w organizmie.
• Wynik „nie został wykryty”. Taki werdykt wskazuje, że w analizowanej próbce uzyskanego materiału biologicznego w tym laboratorium nie znaleziono fragmentu RNA specyficznego dla wirusa zapalenia wątroby typu C. Alternatywnie, stężenie RNA zakażenia patogenem w tej próbce było poniżej granicy czułości testu.

W ostrej fazie RNA wirusa zapalenia wątroby typu C takie badania jakościowe metodą PCR można wykryć już po 1-2 tygodniach bezpośrednio po zakażeniu organizmu, to znaczy na długo przed pojawieniem się przeciwciał na samo zapalenie wątroby.

Niewiarygodne wyniki badań tego badania można uzyskać przez:

• zanieczyszczony biomateriał;
• obecność heparyny we krwi pacjenta;
• obecność w próbce substancji chemicznych lub białkowych (inhibitorów), które wpływają na różne składniki PCR.

Aby przeprowadzić analizę jakościową PCR, nie jest wymagane specjalne przygotowanie pacjenta do badania. Użyty materiał to krew żylna.

Ocena wyników

Wysokiej jakości testy PCR mają pewien stopień czułości iw zależności od dokładności badań oraz poziomu wyposażenia w laboratorium mogą wahać się od 10 do 500 IU / ml.

Oznacza to, że jeśli wirus w próbce krwi jest obecny w bardzo niskim stężeniu (mniejszym niż wartość progowa czułości tego laboratorium), wynik dla chorego pacjenta można „nie wykryć”. Z tego powodu, przeprowadzając analizę jakościową PCR z niskim poziomem wiremii (niskie stężenie wirusa), na przykład dla pacjentów poddawanych terapii przeciwwirusowej, bardzo ważne jest poznanie progu czułości tego systemu diagnostycznego.

Warianty systemów diagnostycznych

Aby kontrolować odpowiedź wirusologiczną, zaleca się stosowanie systemów diagnostycznych o progu czułości co najmniej 50 IU / ml podczas prowadzenia leczenia przeciwwirusowego. Kryteria te są spełnione, na przykład, z analizatorami Cobas Ampicolor HCV-Test (z dokładnością do 50 IU / ml), a także z RealBest HCV RNA (z czułością 15 IU / ml).

Zgodnie z zaleceniami WHO, aby ustalić ostateczną diagnozę wirusowego zapalenia wątroby typu C, konieczne jest oparcie się jedynie na trzykrotnym wykryciu RNA wirusa C w próbkach surowicy pacjenta, przy braku innych odmian markerów zapalenia wątroby.

Oprócz metod PCR, test TMA (metoda amplifikacji transkrypcji) jest również stosowany do wykrywania RNA HCV u pacjentów. Ma najlepszy próg czułości (5–10 IU / ml), ale w naszym kraju taka metoda testowania nie jest jeszcze bardzo powszechna.

Zakres wykrytych modyfikacji wirusów

Takie jakościowe oznaczenie w surowicy obecności RNA wirusa zapalenia wątroby typu C umożliwia określenie kilku genotypów tego wirusa. Obecnie nauka zna ponad sześć genotypów tego wirusa, a także około 10 podtypów tej choroby.

W naszym kraju powszechne wirusy 1, 2, 3 genotypy. Laboratoria mogą wykryć następujące genotypy: 1a i 1b, 2a, 2b i 2c, a także 3, 4, 5a i 6, niezależnie od podtypów. Dla wszystkich modyfikacji wirusów specyficzność wykrywania wynosi 100%.

Analiza ilościowa PCR

Stosując ilościowy test PCR, określa się poziom stężenia wirusa zapalenia wątroby w próbkach krwi (obciążenie wirusem). Ten test na wiremię (stężenie wirusa) pozwala określić liczbę jednostek określonego materiału genetycznego (samego wirusowego RNA), które jest wykrywane w określonej ilości. W takim przypadku należy określić jego stężenie w 1 ml, co odpowiada 1 cu. zobacz

Parametry analizy ilościowej są wyrażone w liczbach, w tym celu jednostki miary (IU) na mililitr (ml), określane jako IU / ml, są używane jako jednostki miary. Teraz, w niektórych laboratoriach, ilość wirusa można określić w innych jednostkach: liczba kopii na ml jest wskazana jako kopie / ml.

• Terminy W przypadku wirusowego zapalenia wątroby typu C taką ilościową analizę PCR przeprowadza się bezpośrednio przed rozpoczęciem terapii. Następnie w 1., 4., 12. i 24. tygodniu. Ocena w 12. tygodniu ma charakter orientacyjny, pozwala określić skuteczność terapii.
• Przygotowanie do analizy. Aby przeprowadzić analizę ilościową PCR, nie jest wymagane specjalne przygotowanie pacjenta do badania. Pół godziny przed pobieraniem próbek nie należy palić. Krew żylna jest używana jako materiał laboratoryjny.

Ocena wyników

Dla różnych laboratoryjnych systemów badawczych istnieją różne współczynniki konwersji dla tego wskaźnika w IU / ml. Średnio przyjmują parametr konwersji, w którym 4 kopie / ml = 1 IU / ml. To znaczy, na przykład, jeśli laboratorium daje wynik analizy PCR 2,4 * 10 6 kopii / ml, to ten parametr należy podzielić na 4, a otrzymamy 6 * 10 5 IU / ml.

Obciążenie 800 000 IU / ml jest uważane za wysokie, co w przybliżeniu odpowiada 3 000 000 kopii / ml. Niska wiremia, według niektórych autorów, odpowiada parametrom ilościowej PCR poniżej 400 000 IU / ml.

W wyniku testu ilościowego wyniki końcowe mogą być dostarczane nie w postaci wartości cyfrowej, ale: „poniżej zakresu pomiarowego” lub „nie wykryte”.

• Ocena: „poniżej zakresu pomiarowego”. Wskazuje to, że test ilościowy nie wykrył wirusowego RNA wirusa zapalenia wątroby typu C, jednak sam wirus jest obecny w organizmie w bardzo niskich stężeniach. Dowodem na to jest dodatkowy test jakości potwierdzający obecność wirusa.
• Ocena: nie wykryto. Wynik ten wskazuje, że testu ilościowego nie znaleziono w próbkowym wirusie RNA.

Parametr obciążenia wirusem określa przede wszystkim stopień zakaźności choroby, poziom „zakaźności” pacjenta. Im wyższa koncentracja wirusa u pacjenta, tym większe prawdopodobieństwo przekazania go innym osobom. Na przykład podczas stosunku seksualnego z chorym lub pionowo. Ten wskaźnik ilościowy pomaga również określić skuteczność leczenia pacjenta.

Przeprowadzenie analizy ilościowej CCP jest ważne dla terapii przeciwwirusowej, oceny jej sukcesu i zaplanowania czasu trwania kursu. Tak więc, dzięki szybkiej reakcji organizmu na leczenie i niskiemu poziomowi wiremii, czas trwania terapii może zostać skrócony.

Jeśli ilościowy parametr PCR jest powoli zmniejszany, terapia przeciwwirusowa powinna zostać rozszerzona lub zmodyfikowana. Jeśli poziom miana wirusa jest niski, jest to korzystny czynnik w terapii, jeśli jest podwyższony, zastosowana metoda jest nieskuteczna, a leki lub metody ich stosowania powinny zostać zmienione.

Jakościowa i ilościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C: negatywna, dodatnia, transkrypcja

Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest wirusową chorobą wątroby wywoływaną przez flawiwirus HCV (z angielskiego wirusa zapalenia wątroby typu C), którego struktura zawiera cząsteczkę kwasu rybonukleinowego (RNA). RNA niesie kod genetyczny wirusa. Jego obecność pozwala na analizę PCR dla zapalenia wątroby typu C.

Niebezpieczeństwo HCV dla osoby polega na tym, że tak zwane okno serologiczne (czas między zakażeniem a pojawieniem się reakcji układu odpornościowego) może być dość długie - od kilku tygodni do sześciu miesięcy.

Nie wykrywa infekcji i rozpoczyna leczenie na czas.

W zależności od indywidualnych cech organizmu, nośnik HCV może manifestować się w postaci ostrej, jak również występować jako choroba przewlekła, która wymaga długiego i kosztownego leczenia. W wykrywaniu przeciwciał przeciwko HCV przeprowadza się serię testów laboratoryjnych, w tym PCR na zapalenie wątroby typu C. Test ten wykonuje się u wszystkich osób, u których wykryto przeciwciała przeciwko HCV.

Czym jest analiza PCR?

Analiza laboratoryjna PCR dla zapalenia wątroby typu C - badanie materiału biologicznego w celu identyfikacji obecności flawawirusa.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (co oznacza skrót) pokazuje wartość ilościową uszkodzenia wirusowego organizmu, jego cechy jakościowe, a także genotyp wirusa zawierającego RNA.

Na ich podstawie, a także na podstawie dodatkowych analiz, określana jest metoda i czas trwania terapii, a także czynnik epidemiologiczny (stopień ryzyka transmisji do innego przewoźnika).

Co to jest analiza RNA wirusa zapalenia wątroby typu C?

PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C jest również nazywany analizą RNA (HCV RNA), ponieważ Flawawirus zawiera cząstkę RNA o rozmiarze wirionu 30-60 nm. Jedną z cech tego mikroorganizmu jest wysoka skłonność do mutacji.

Każdy z podgatunków (genotypów) wirusa ma inną oporność, co powoduje różne metody leczenia i charakter dalszych rokowań dla pacjenta.

Materiał biologiczny (krew żylna) podawany jest na pusty żołądek i, co do zasady, jest testowany metodą PCR w czasie rzeczywistym (wysoce czuła diagnostyka w czasie rzeczywistym z niższym limitem wykrywania 15 IU / ml przy użyciu zamkniętych zautomatyzowanych systemów).

Istnieją inne testy, na przykład COBAS AMPLICOR o czułości 50-100 IU / ml. Dla każdego badania laboratoryjnego próg czułości jest ważny, tj. zdolność odczynnika do wykrywania minimalnego stężenia wirusa w materiale biologicznym.

Rodzaje analiz zapalenia wątroby typu C metodą PCR

PCR na zapalenie wątroby typu C obejmuje trzy ważne elementy:

• analiza jakościowa;
• analiza ilościowa;
• genotypowanie.

Testy te mogą określić naturę wiremii, a także cechy genetyczne patogenu. W zależności od czułości systemu diagnostycznego badanie przeprowadza się raz, a czasami wykonuje się drugi test z bardziej czułym odczynnikiem w celu potwierdzenia lub udoskonalenia wyników.

Wysokiej jakości zapalenie wątroby typu C PCR

Jakościowa analiza PCR wirusa zapalenia wątroby typu C jest kolejną popularną nazwą do analizy reakcji łańcuchowej polimerazy. Standardowa czułość testu, która pozwala wykryć obecność zmian wirusowych, mieści się w zakresie 10-500 IU / ml.

Negatywna analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C pokazuje, że stężenie wirusa we krwi pacjenta jest poniżej progu podatności systemu diagnostycznego.

Jeśli wysokiej jakości PCR dało odpowiedź „nie wykryto”, to w przypadku dalszego leczenia ważne jest ustalenie progu czułości odczynnika.

Frakcje białkowe do flawawirusa pojawiają się znacznie później.

Ilościowe PCR w wirusowym zapaleniu wątroby typu C

Ilościowe PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C jest wskaźnikiem obciążenia wirusowego, które odzwierciedla poziom stężenia RNA flawawirusa w organizmie. Jest to wskaźnik pokazujący, ile fragmentów wirusowego RNA jest zawartych na centymetr sześcienny krwi. Wyniki PCR RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w teście ilościowym w systemie konwencjonalnym są wskazane w jednostkach międzynarodowych na mililitr (IU / ml) i mogą być rejestrowane na różne sposoby, na przykład 1,7 miliona lub 1 700 000 IU / ml.

Ilościowa diagnostyka PCR zapalenia wątroby typu C jest przepisywana pacjentom przed rozpoczęciem leczenia przeciwwirusowego oraz w 12. tygodniu leczenia, w celu oceny wyników wybranej metody postępowania z HCV. Obciążenie wirusowe pozwala określić trzy ważne wskaźniki choroby:

• zakaźność, tj. stopień ryzyka przeniesienia wirusa z jednego nośnika na drugiego (im wyższe stężenie flawawirusa RNA, tym większe prawdopodobieństwo zarażenia innej osoby, na przykład poprzez kontakt seksualny);
• metoda i skuteczność leczenia;
• czas trwania i rokowanie terapii przeciwwirusowej (im wyższe obciążenie wirusem, tym dłużej trwa leczenie).

Ilościowa diagnostyka PCR zapalenia wątroby typu C zależy od rodzaju badania laboratoryjnego i progu jego czułości. Dolna granica normy jest uważana za wskaźnik do 600 000 IU / ml, średnia wartość mieści się w zakresie 600 000-700 000 IU / ml. Wyniki 800 000 IU / ml i powyżej uważa się za wysoki poziom wirusa zawierającego RNA.

Genotypowanie

Ze względu na wysoką aktywność mutacyjną HCV w naturze, podczas badania ważne jest, aby zidentyfikować genotyp wirusa w krwi pacjenta. W sumie na planecie zarejestrowano 11 genotypów wirusa zapalenia wątroby typu C, w tym wiele podgatunków (podtypy). Na terytorium Federacji Rosyjskiej rozmieszczone 1,2 i 3.

RNA wirusa zapalenia wątroby typu C RNA wraz z genotypowaniem jest bardzo ważnym elementem analizy pozwala lekarzowi określić oporność (oporność) wirusa, wybrać odpowiednie leki i przepisać przebieg leczenia.

Genotypowanie umożliwia również pośrednie określenie stanu wątroby. Na przykład, genotypowi 3 HCV często towarzyszy stłuszczenie, w którym tłuszcz gromadzi się w komórkach narządu.

Badanie krwi w kierunku PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C powinno dać postać, która określa genotyp. Odpowiedzi laboratoryjne mogą powiedzieć „nie wpisane” - a to oznacza, że ​​wirus znajduje się w ludzkiej krwi, która nie jest wykrywana przez system testowy. Może to wskazywać, że genotyp nie jest typowy dla danego obszaru geograficznego. W takim przypadku należy powtórzyć analizę z większą czułością systemu diagnostycznego.

Dekodowanie analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C

Test ilościowego odszyfrowania PCR na zapalenie wątroby typu C można oprzeć na powyższych danych. Przy uzyskiwaniu wyników badań laboratoryjnych zwykle zapisywane są następujące dane:

• „Found” / „not found” (wysokiej jakości PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C);
• liczba frakcji zawierających RNA, na przykład 831,680 ME / ml (ilościowa analiza PCR);
• figura określająca genotyp HCV, na przykład - 1, 2, 3, 4;
• Nazwa testu jest najczęściej w czasie rzeczywistym.

Najważniejszą rzeczą w rozszyfrowaniu analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C jest drugi element, który pokazuje obciążenie wirusem, które określa rokowanie, metodę i czas trwania leczenia.

Jeśli test PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C jest ujemny, a test ELISA jest pozytywny - co to oznacza?

Aby rozszyfrować badania laboratoryjne, ważne jest skontaktowanie się z hepatologiem lub specjalistą od chorób zakaźnych, który wyjaśni informacje uzyskane zgodnie z rodzajem systemu diagnostycznego i jego progiem czułości. W praktyce medycznej istnieje wiele danych z badań krwi, które mogą wprowadzić w błąd osobę bez wykształcenia medycznego.

Na przykład, jeśli wynik testu na zapalenie wątroby typu C jest ujemny, a test ELISA jest dodatni, może to oznaczać, że w krwi pacjenta nie ma obecnie HCV, ale wcześniej cierpiał na ostrą postać zapalenia wątroby typu C. we krwi znajdują się przeciwciała, które zostały wyprodukowane po inwazji wirusa w przeszłości. Jednak w nowoczesnej praktyce medycznej analiza ELISA jest uważana za niewystarczająco wiarygodną i często daje nietypowe wyniki, więc lekarze używają jej jako podstawowego badania przesiewowego. Podczas diagnozowania choroby specjaliści są precyzyjnie kierowani testami PCR.

Przydatne wideo

Poniższy film przedstawia w bardzo szczegółowy i interesujący sposób istotę metody PCR, sposób przeprowadzania analizy:

Wniosek

W celu analizy PCR zapalenia wątroby typu C zwykle pobiera się krew żylną. Najczęściej występuje podwójne spożycie materiału biologicznego - do testu ELISA i bezpośrednio do testu PCR. W celu uzyskania poprawnych wyników badań wymagana jest zgodność z podstawowymi zasadami zbierania materiału biologicznego przez laboratorium:

• krew do analizy podaje się w pierwszej połowie dnia na pusty żołądek;
• między posiłkiem a pobraniem krwi powinno trwać co najmniej 8 godzin;
• Alkohol i potrawy smażone należy również wykluczyć przed przystąpieniem do testu.
• w ciągu dnia przed oddaniem krwi konieczne jest uniknięcie dużego wysiłku fizycznego.

Wyniki badań krwi są zazwyczaj gotowe następnego dnia.