Wątroba jest centralnym laboratorium ciała. Syntetyzuje białka (albumina, protrombina, fibrynogen, inne czynniki krzepnięcia krwi), tworzą się lipidy (cholesterol), lipoproteiny, kwasy żółciowe, bilirubina, żółć. Toksyczne substancje, które występują w organizmie i wchodzą do organizmu (funkcja antytoksyczna) są wykorzystywane w wątrobie. Wątroba syntetyzuje glikogen i bierze udział w trzustce w regulacji rezerw węglowodanów w organizmie. Jego aktywna rola w trawieniu polega na tym, że żółć emulguje tłuszcze i poprawia ich rozkład przez lipazę trzustkową. Produkty dzielące żywność (tłuszcze, kwasy tłuszczowe, gliceryna, aminokwasy, węglowodany, minerały, woda, witaminy) przedostają się przez naczynia żyły wrotnej do wątroby. Są w niej częściowo zdeponowane, częściowo przetworzone, wykorzystane i częściowo przygotowane do użycia przez inne tkanki.
Choroby wątroby powodują zaburzenia jednej lub drugiej z jej funkcji, które są wykorzystywane do celów diagnostycznych. Najczęściej przeprowadzane w laboratoriach klinicznych badania zaburzeń funkcji barwnikowych, węglowodanowych, białkowych. W ostrym zapalnym i toksycznym uszkodzeniu wątroby znaczna ilość enzymów wewnątrzkomórkowych jest uwalniana z wątroby. Badania nad aldolazą, alaniną i asparaginianowymi aminotransferazami (aminoferazy), dehydrogenazą mleczanową i jej frakcjami, cholinesterazami, arginazą i innymi osiągnęły wartość diagnostyczną. fosfataza wytwarzana w tkance kostnej. Wskaźniki jego aktywności są wykorzystywane w diagnostyce żółtaczki obturacyjnej. Badanie spektrum enzymów krwi jest wykorzystywane w diagnostyce różnicowej różnych chorób wątroby, zwłaszcza żółtaczki.
Poniżej znajduje się podstawowa informacja o wartości diagnostycznej najbardziej znanych próbek, odzwierciedlająca stan wątroby w warunkach normalnych i patologicznych. Metody niektórych próbek lub zasady ich realizacji są podane, jeśli metody wymagają szczegółowego opisu. Biochemiczne metody badania funkcji wątroby można znaleźć w następujących publikacjach: Wytyczne dotyczące stosowania standardowych metod badań klinicznych i laboratoryjnych.
Testy funkcjonalne odzwierciedlające rolę wątroby w metabolizmie węglowodanów. W chorobach wątroby poziom cukru we krwi na czczo u większości pacjentów jest prawidłowy - 4,44-6,11 mmol / l (80-110 mg%). Czasami występuje hiperglikemia, często z powodu dysfunkcji wegetatywnego układu nerwowego współczulnego. Gdy marskość wątroby, gdy synteza glikogenu jest zaburzona i jej rezerwy są znacznie wyczerpane, może wystąpić hipoglikemia.
Próbki tolerancji na węglowodany z obciążeniem glukozą wykonuje się w taki sam sposób, jak w badaniu funkcji aparatu wyspiarskiego. Test stosuje się głównie z pojedynczym ładunkiem glukozy (cukier, fruktoza, lewuloza).
Test galaktozuryczny opiera się na fakcie, że galaktoza jest trudniejsza niż glukoza, zamienia się w glikogen, aw przypadku choroby wątroby w większej ilości jest wydalana przez nerki. 40 g galaktozy podaje się do testu w 200 ml wody. Następnie mocz zbierany jest w trzech oddzielnych porcjach co 2 godziny, przez 6 godzin uwalnia się 2-2,5 g galaktozy. Według A. I. Khazanova (1968) w przewlekłym zapaleniu wątroby test jest pozytywny u 4-12% pacjentów, aw przypadku marskości wątroby u 47,1% pacjentów.
Krzywe galaktozemiczne są bardziej czułe niż próbki galaktozuryczne. Pusty żołądek u zdrowej osoby zawiera 0,1–0,9 mmol / l we krwi lub 2–17 mg% galaktozy. Po obciążeniu 40 g galaktozy u osoby zdrowej, gwałtowny wzrost poziomu galaktozy do 6,6 mmol / l lub 120 mg% obserwuje się przez 30–60 minut, a następnie po 2-3 godzinach wskaźnik zmniejsza się do 2,20 mmol / l, lub 40 mg%. U osób z chorobami wątroby poziom galaktozy jest wyższy, trwa dłużej i nie powraca do normy po 3 godzinach.
Testy funkcjonalne odzwierciedlające rolę wątroby w metabolizmie lipidów. Wątroba jest zaangażowana we wszystkie etapy metabolizmu tłuszczów. Do normalnego wchłaniania tłuszczu w jelitach potrzebna jest żółć. Działa jako detergent i emulgator tłuszczu, ułatwia pracę lipazy trzustkowej, poprawia wchłanianie tłuszczu w jelitach. W wątrobie fosfolipidy są syntetyzowane w obecności substancji lipotropowych, które działają jako dawcy grup lipidowych (metionina, cholina) lub czynnika przyczyniającego się do syntezy fosfolipidów (witamina B12). Przy braku substancji lipotropowych w wątrobie gromadzą się tłuszcze obojętne, a ilość glikogenu spada. Gdy choroba wątroby w niej zmniejsza zawartość adenozynotrifosforanu, który daje energię do procesów syntetycznych.
Poziom cholesterolu we krwi jest najważniejszym wskaźnikiem syntezy lipidów w wątrobie. Cholesterol jest spożywany z jedzeniem. Jego wchłanianie w jelicie następuje przy udziale kwasów żółciowych. Jednak cholesterol dietetyczny nie jest jedynym lub nawet głównym źródłem cholesterolu w organizmie. Jest stale syntetyzowany w wątrobie z acetylokenzymu A. Synteza cholesterolu przekracza jego spożycie. Nadmiar zarówno zsyntetyzowanego, jak i dietetycznego cholesterolu jest wydalany z organizmu przez jelita. Część z nich jest przekształcana w wątrobie w kwasy żółciowe i jest również stosowana w innych narządach (nadnerczach, jądrach) jako materiał wyjściowy do syntezy hormonów steroidowych. Część cholesterolu łączy się w wątrobie z kwasami tłuszczowymi, tworząc estry cholesterolu.
Zawartość cholesterolu we krwi określa się metodą Ilka. Cholesterol jest wstępnie ekstrahowany chloroformem. W obecności bezwodnika octowego i mieszaniny kwasów octowego i siarkowego nadaje zielony roztwór. Stężenie cholesterolu określa się metodą kalorymetryczną w FEC. U zdrowych osób surowica zawiera 3,0–6,5 mmol / l (116–150 mg%) cholesterolu. W zapaleniu wątroby i marskości wątroby dochodzi do naruszenia cholesterolu we krwi: hipercholesterolemii, widocznie związanej z naruszeniem funkcji wydalniczej wątroby, rzadziej - hipocholesterolemii, związanej ze zmniejszeniem jej syntezy w wątrobie.
Estry cholesterolu w zapaleniu wątroby są wytwarzane w mniejszych ilościach niż normalnie, a stosunek estrów i cholesterolu jest obniżony do 0,3-0,4 zamiast 0,5-0,7 u zdrowych.
W wątrobie synteza lipoprotein jest również bardzo niska i ma wysoką gęstość. Chylomikrony i niewielka część lipoprotein o bardzo niskiej gęstości powstają w komórkach nabłonkowych jelita cienkiego. Synteza i rozkład lipoprotein zachodzi z udziałem lipazy lipoproteinowej, która jest związana z heparyną. Należy zauważyć, że w przypadku marskości wątroby zawartość heparyny we krwi maleje. Zatem wątroba bierze udział zarówno w tworzeniu lipoprotein, jak iw ich niszczeniu. W chorobie wątroby występuje dyslipoproteinemia, głównie zwiększone powstawanie lipoprotein (zapalenie wątroby, początkowe formy marskości wątroby). Występuje zwiększone stężenie beta-lipoprotein we krwi.
Badanie lipoprotein we krwi przeprowadza się głównie metodą elektroforetyczną.
W ciężkich chorobach wątroby - śpiączce wątrobowej, marskości wątroby, zaburzony jest metabolizm lipoprotein śródmiąższowych. W tym przypadku zawartość kwasu mlekowego (norma wynosi 0,78–1,2 mmol / l (7–14 mg%) i kwasu pirogronowego (norma wynosi 57–136 µmol / l (0,5–1,2 mg%)) wzrasta we krwi.
Po wykryciu śpiączki wątrobowej wzrasta poziom acetonu we krwi.
Testy funkcjonalne odzwierciedlające rolę wątroby w metabolizmie białek. Wątroba transaminuje aminokwasy, utlenia je do kwasu pirogronowego w cyklu kwasu trikarboksylowego (Krebs) i syntezę białek. Wszystkie albuminy, 75–90% alfa globulin, 50% beta globulin są syntetyzowane w wątrobie. Zdrowa wątroba może produkować 13-18 g albuminy dziennie. Protrombina, proconvertin, proacceleryna jest syntetyzowana tylko w wątrobie. Synteza białka zachodzi z udziałem energii. Jedną z przyczyn zmniejszenia syntetycznej funkcji wątroby jest spadek zawartości związków mikroergicznych w niej. W ciężkiej chorobie wątroby całkowita ilość białka serwatkowego może spaść. 40 g / l zamiast 80 g / l. Zawartość albuminy jest znacznie zmniejszona (do 20 g / l zamiast 40 g / l). W warunkach patologicznych wątroba syntetyzuje globuliny o niezwykłych właściwościach (paraproteiny). Wiadomo, że takie białko jest gorzej wybarwione odczynnikiem biuretowym, mniej stabilnym w roztworze soli (na przykład chlorku wapnia), w obecności tymolu. Dzięki tym właściwościom zbudowano osadowe próbki diagnostyczne.
Całkowite białko surowicy określa się metodą polarymetryczną lub w reakcji z odczynnikiem biuretowym. Norma - 60-80 g / l. Frakcje białkowe ustala się przez elektroforezę na papierze lub w żelu akryloamidowym. Zawartość albuminy w surowicy krwi, według V. E. Predtechensky'ego, 56,5–66,8%, alfarglobulina - 3,0–5,6, alfagglobulina - 6,9–10,5, beta-globulina - 7,3 -12,5 i gamma globuliny - 12,8–19,0%. W chorobach wątroby następuje spadek zawartości albuminy we krwi, zwiększenie zawartości globulin gamma. W ostrych procesach zapalnych (zapalenie wątroby) poziom alfa-globulin wzrasta 1,5-2 razy. Gamma globuliny są wytwarzane przez limfocyty i komórki układu siateczkowo-śródbłonkowego. W przewlekłym zapaleniu wątroby występującym z wyraźnymi procesami autoimmunologicznymi, zawartość gamma globulin we krwi znacznie wzrasta (do 30%). A. I. Khazanov zauważa, że znaczny wzrost beta lub gamma globuliny obserwuje się u pacjentów z marskością wątroby dekensirovanny i często wskazuje na złe rokowanie choroby. Odzwierciedla reorganizację syntezy białek w wątrobie i zwiększone tworzenie paraprotein.
Próbki osadów są oparte na zmianach stabilności koloidalnej surowicy krwi podczas interakcji z różnymi elektrolitami. Stabilność koloidalnego układu krwi jest zaburzona w wyniku dysproteinemii i paraproteinemii.
Test sublimacyjny (reakcja sublimatyczno-osadowa), reakcja Takat-Ara, polega na tym, że podczas oddziaływania sublimatu i węglanu sodu z białkami surowicy krwi wytrącają się osady, tworząc płatki. Obecnie reakcja jest wykorzystywana w modyfikacji Grinstedta (1948). Do 0,5 ml niezhemolizowanej surowicy rozcieńczonej 1 ml soli fizjologicznej dodaje się 0,1% roztwór sublimacyjnych kropelek, aż pojawi się trwałe zmętnienie, podczas czytania tekst gazety staje się niemożliwy przez pionową warstwę cieczy. Szybkość wynosi 1,6–2,2 ml 0,1% roztworu chlorku rtęciowego. Test jest pozytywny w miąższowym uszkodzeniu wątroby, zwłaszcza w marskości wątroby, ostrym i przewlekłym zapaleniu wątroby, krzemicy i krzemicy.
Test Veltmanna (test krzepnięcia, reakcja termoagulacji) zaproponowano w 1930 r. W celu odróżnienia procesów włóknisto-produkcyjnych i martwiczych w wątrobie. Świeżą surowicę bez śladów hemolizy wlewa się do 11 ponumerowanych probówek 0,1 ml. Następnie dodaje się 5 ml roztworu chlorku wapnia w malejących stężeniach: 0,1, 0,09, 0,08 itd. Do 0,01%, zawartość probówek delikatnie wstrząsa się i umieszcza we wrzącej łaźni wodnej na 15 minut, po czym wynik jest zaznaczony. Próbka jest uważana za pozytywną w przypadku wytrącania się białka. Liczba probówek z wynikiem dodatnim nazywa się pasmem koagulacji. Normalnie jest to 6-7 tub. Jej zmniejszenie (przesunięcie w lewo) obserwuje się w procesach zapalnych w płucach, guzach, zawale mięśnia sercowego; wydłużenie (przesunięcie w prawo) - w procesach zapalnych w wątrobie, ostra dystrofia wątroby, marskość wątroby, a także choroba hemolityczna, nerczyca, włóknista gruźlica płuc. Obecnie próbkę Veltmanna zmodyfikowano w następujący sposób: 4,9 ml wody dodano do 0,1 ml surowicy krwi, a następnie dodano 0,1 ml 0,5% roztworu chlorku wapnia. Mieszaninę ogrzewa się do wrzenia, przy braku osadu wylewa się kolejne 0,1 ml roztworu chlorku wapnia. Procedurę powtarza się, aż w probówce pojawi się mysie białko. Wyniki ocenia się na podstawie całkowitej ilości chlorku wapnia wydanego na reakcję. Zwykle wymagane jest 0,4-0,5 ml chlorku wapnia.
Test tymolowy (test zmętnienia tymolu) w modyfikacji Huerg i Popper (test tymolowo-tonerowy) opiera się na tworzeniu zmętnienia testowanej surowicy w obecności nasyconego roztworu tymolu w buforze veronalnym. Osad powstaje w wyniku pojawienia się kompleksu globulina-timolofosfatyd ze spadkiem zawartości albuminy we krwi, wzrostem beta i gamma globulin. Stopień zmętnienia zależy od temperatury otoczenia i pH. Reakcję ocenia się metodą fotokalorymetryczną przy 660 nm wobec roztworu tymloveronalnego. Obliczenia przeprowadza się zgodnie z krzywą kalibracji sporządzoną z zawiesiny siarczanu baru. Zwykle zmętnienie w surowicy wynosi 0–5 jednostek. M (Maklagana). Wzrost zmętnienia (dodatni wynik testu) obserwuje się w warunkach uszkodzenia wątroby w epidemicznym zapaleniu wątroby (test jest pozytywny przed wystąpieniem żółtaczki), w marskości wątroby, po ostrym zapaleniu wątroby i tak dalej.
Gdy poważne naruszenia wątroby, proces deaminacji aminokwasów jest zakłócany, co prowadzi do zwiększenia ich zawartości we krwi i moczu. Jeśli u osób zdrowych zawartość azotu aminowego w surowicy wynosi 50-80 mg / l, wówczas w ciężkich procesach dystroficznych w wątrobie może wzrosnąć do 300 mg / l (300 mg / l odpowiada 30 mg% stosunku przeniesienia azotu aminowego, wyrażone w mg%, w mmol / l wynosi 0,7139). A. I. Chazanow zauważa, że w ostrym wirusowym zapaleniu wątroby poziom glutationu, kwasu glutaminowego, metioniny, fenyloalaniny, seryny i treoniny w surowicy wzrasta. Przy przewlekłym zapaleniu wątroby ujawniły się te same zmiany w zawartości aminokwasów we krwi, ale wyrażone w mniejszym stopniu.
W ciągu dnia 100-400 mg (średnio 200 mg) aminokwasów wydalanych jest z moczem zdrowej osoby. Aminoazot jest wśród nich 1-2% całkowitego azotu z moczu, aw chorobach wątroby osiąga 5-10%. W ostrej dystrofii wątrobowej obserwuje się zwiększone wydalanie leucyny i tyrozyny z moczem. Zwykle tyrozyna jest uwalniana w ilości 10-20 mg / l, z ostrym wirusowym zapaleniem wątroby - do 1000 mg / l (2 g dziennie). W osadzie moczu można znaleźć kryształy leucyny i tyrozyny.
Resztkowy azot i mocznik w surowicy krwi w chorobach wątroby rosną, jeśli rozwija się ostra niewydolność wątroby lub ciężkie ostre uszkodzenie wątroby (ostra dystrofia w ostrym zapaleniu wątroby, zaostrzenie przewlekłego zapalenia wątroby, marskość wątroby, rak wątroby, po zabiegu chirurgicznym dróg żółciowych i inne). U zdrowych ludzi resztkowy azot we krwi wynosi 14,3–28,6 mmol / l (0,20–0,40 g / l), mocznik - 2,5–3,3 mmol / l (0,15–0,0, 20 g / l). W chorobach wątroby zawartość resztkowego azotu we krwi wzrasta nieznacznie - do 35,4-64,3 mmol / l (0,50 -; 0,90 g / l). Wzrost jego poziomu powyżej 71,4 mmol / l (1,0 g / l) obserwuje się w przypadku uszkodzenia nerek i znacznie pogarsza rokowanie choroby.
Pozostały azot we krwi określa się kilkoma metodami - po mineralizacji krwi przez bezpośrednią reakcję z odczynnikiem Nesslera lub metodą hipobromitu Rappoporta-Eichgorna. Mocznik we krwi określa się również kilkoma metodami: metoda ekspresowa opiera się na użyciu papieru reaktywnego „Ureatest”, stosuje się metodę ureazy z podchlorynem fenolu, metodę ureazy z odczynnikiem Nesslera itp.
Wątroba i hemostaza są ze sobą ściśle powiązane. W wątrobie syntetyzowane są białka biorące udział w krzepnięciu krwi. Najważniejsze z nich to protrombina i fibrynogen, a naruszenia syntezy tych białek są bardziej powszechne. Należy zauważyć, że w ostrych chorobach zapalnych płuc, stawów, wątroby zawartość fibrynogenu we krwi może znacznie wzrosnąć. U pacjentów z ostrym wirusowym, toksycznym, przewlekłym zapaleniem wątroby, marskością wątroby obserwuje się spadek zawartości protrombiny we krwi. Najważniejsze objawy kliniczne niedoboru protrombiny to spontaniczne krwotoki pod skórą, pod błonami śluzowymi, krwawienie z jamy ustnej, żołądek.
Synteza białek zapewniających proces krzepnięcia krwi z udziałem witaminy K. Witamina K jest rozpuszczalna w tłuszczach i wchodzi do organizmu wraz z tłuszczami. W chorobach wątroby z powodu zaburzeń tworzenia żółci i wydalania żółci w hipowitaminozie ciała K występuje.
Zaburzona synteza czynników krzepnięcia krwi może być związana z hamowaniem funkcji wątroby w tworzeniu białek. W tym przypadku hipoprotrombinemia występuje z wystarczającym zaopatrzeniem organizmu w witaminę K. W klinice do celów diagnostycznych ilość protrombiny we krwi jest badana przed i po załadowaniu Vikasolem.
Duża ilość heparyny jest syntetyzowana w wątrobie i płucach.
Kwestia możliwości skazy krwotocznej, związana ze wzrostem produkcji czynników przeciwzakrzepowych układu krwionośnego w chorobach wątroby, nie jest dobrze poznana.
Aktywność czynników kompleksu protrombiny (nowy wskaźnik prothrombi) bada się metodą Quick (95–105% normy), stężenie fibrynogenu we krwi bada się metodą Rutberga (norma wynosi 200–300 mg w 100 ml osocza). Zgodnie ze zunifikowaną metodą grawimetryczną zalecaną przez V. V. Menshikova (1987) wskaźnik fibrynogenu we krwi wynosi 200–400 mg% lub 2–4 g / l. Metoda określania czynników krzepnięcia krwi jest szczegółowo opisana w Podręczniku klinicznych i laboratoryjnych metod badawczych.
Testy funkcjonalne odzwierciedlające rolę wątroby w metabolizmie pigmentów. Jest to przede wszystkim oznaczenie bilirubiny w surowicy, badanie urobiliny, stercobiliny, pigmentów żółciowych w moczu. Wspomnieliśmy już o badaniu zawartości bilirubiny w żółci. Wskaźniki te bezpośrednio lub pośrednio odzwierciedlają proces konwersji bilirubiny w wątrobie. Wątroba odgrywa ważną rolę w metabolizmie pigmentów zawierających żelazo - hemoglobiny, mioglobiny, cytochromu itp.
Początkowym etapem rozpadu hemoglobiny jest zerwanie mostka metylowego i tworzenie werdohemoglobiny (verdoglobiny), która zawiera również żelazo i globinę. W przyszłości Verdoglobin traci żelazo i globinę, rozpoczyna proces rozwijania pierścienia porfirynowego i tworzenia biliwerdyny, z przywróceniem którego powstaje główny pigment żółciowy - bilirubina (bilirubina pośrednia, niezwiązana). Taka bilirubina jest łączona z diazoreaktywnym Ehrlichiem po potraktowaniu alkoholem lub odczynnikiem kofeinowym, to znaczy daje pośrednią reakcję barwną. Jest on aktywnie absorbowany przez hepatocyty i za pomocą enzymów glukuronylotransferazy w aparacie Golgiego są połączone z jedną (monoglukuronidem) lub dwoma (diglukuronidowymi) cząsteczkami kwasu glukuronowego. Piętnaście procent bilirubiny w wątrobie przez transferazę siarczanową z kwasem siarkowym i fosfosiarczan fosfoadenozyny. Taka bilirubina reaguje szybko z diazoreaktywnym i daje bezpośrednią reakcję.
W chorobach wątroby podwyższona zawartość bilirubiny we krwi zależy głównie od tego, że hepatocyty wydzielają ją zarówno do żółci, jak i naczyń włosowatych. Bilirubina gromadzi się we krwi, dając bezpośrednią reakcję z diazoreaktywnym (bezpośredni lub związany bilirubiną). Mniejsza ilość zawiera także bilirubinę w przypadku ciężkiego uszkodzenia wątroby, co powoduje pośrednią reakcję, która jest spowodowana zmniejszeniem aktywności wychwytywania nieskoniugowanej bilirubiny z krwi przez komórkę wątroby i jest najwyraźniej wynikiem naruszenia mechanizmu wychwytu bilirubiny i absorpcji w skorupkach hepatocytów.
Gdy niedrożność wspólnego przewodu żółciowego lub wątrobowego przez kamień, guz, lepki śluz, zwężenie jego światła przez blizny (na przykład po zabiegu na drogach żółciowych) w wątrobowych przewodach żółciowych zwiększa ciśnienie żółci. Wnika w naczynia krwionośne i limfatyczne. Krew gromadzi się głównie w bilirubinie, co daje bezpośrednią reakcję z diazoreaktywną (żółtaczka podnatrzowa lub mechaniczna).
Hemolizie erytrocytów towarzyszy uwalnianie dużej ilości hemoglobiny, jej część jest wydalana przez nerki, część jest wychwytywana przez komórki układu siateczkowo-śródbłonkowego i przekształcana w verdoglobinę i bilirubinę. Część takiej bilirubiny jest sprzężona z kwasem glukuronowym w wątrobie i wydalana w zwiększonej ilości z żółcią do jelita. Jednak znaczna ilość bilirubiny, która daje pośrednią reakcję, zostaje zatrzymana we krwi. Taka żółtaczka nazywana jest hemolityczną lub nadpobudliwą.
W przypadku żółtaczki obturacyjnej bardzo mało żółci (bilirubiny) przedostaje się do jelit lub nie wchodzi w ogóle. Kolor kału zależy od produktów przemiany bilirubiny - stercobiliny, która powstaje w jelicie ze stercobilinogenu - produktu pośredniego konwersji bilirubiny. Jeśli pigmenty żółciowe nie dostaną się do jelita, kał staje się jasny, biały, acholichny. Reakcja na stercobilinę i urobilinę w takich przypadkach jest negatywna.
W żółtaczce miąższowej pigmenty żółciowe dostają się do jelita w mniejszych ilościach niż normalnie, ponieważ zawartość bilirubiny w żółci zmniejsza się, a ilość samej żółci jest mała. Jednak bilirubina, która dostaje się do jelita, wystarcza do pokolorowania odchodów w jasnobrązowym kolorze. Część stercobilin jest wchłaniana i wydalana przez nerki, najpierw w postaci urobilinogenu, a następnie urobiliny. Gdy sprzężona (bezpośrednia) bilirubina jest nadmierna we krwi, jej część wchodzi w mocz, gdzie może być wykryta przez kalafonię (z alkoholowym roztworem jodu) lub próbkę z wytrącaniem bilirubiny przez sole baru.
Przy żółtaczce hemolitycznej w żółci wzrasta poziom bilirubiny. Sterobilina i urobilina powstają również w nadmiarze - odchody i mocz są intensywnie zabarwione. I we krwi zwiększa się zawartość niezwiązanej bilirubiny, jest słabo rozpuszczalna w wodzie, nie przenika przez barierę nerkową do tkanki. Dlatego nie ma bilirubiny w moczu.
Bilirubinę w surowicy określa się metodą Endrašík, Cleghorn i Grof. Metoda ta opiera się na połączeniu kwasu diazofenylosulfonowego (utworzonego przez oddziaływanie kwasu sulfanilowego z azotynem sodu) z bilirubiną w surowicy, co powoduje barwienie różowo-fioletowe. Intensywność jego oceniała na podstawie stężenia bilirubiny, wchodząc w bezpośrednią reakcję. Po dodaniu odczynnika kofeinowego do surowicy, nieskoniugowany bilirubina przechodzi w rozpuszczalny stan zdysocjowany i daje różowo-fioletowy roztwór barwiący do mieszaniny diazoreaktywnej. Technika ta jest opisana w książce referencyjnej V. G. Kolba, V. S. Kamyshnikova; Podręcznik wyd. A. A. Pokrovsky; instrukcje metodyczne ed. V. V. Menshikov i inni.
Wartość niektórych enzymów w diagnostyce chorób wątroby. Enzymy wątroby, podobnie jak inne narządy, są podzielone na specyficzne dla narządu i niespecyficzne. W wątrobie specyficznymi dla narządu enzymami są karbamylotransferaza ornityny, dehydrogenaza glutaminianowa, fosfofruktaldolaza, histidaza, dehydrogenaza sorbitolu. Ponadto piąta dehydrogenaza mleczanowa izoenzymu jest uważana za specyficzną.
Komórki wątroby są bogate w enzymy. Uszkodzenie hepatocytów prowadzi do uwolnienia znacznej ilości enzymów wewnątrzkomórkowych i ich akumulacji we krwi. Pod tym względem transaminazy, aldolazy i enzymy znajdujące się w komórkach innych narządów i tkanek uzyskały wartość diagnostyczną. Ocenić ich aktywność we krwi należy porównać z objawami klinicznymi choroby.
Aldolaza - nazwa grupy enzymów biorących udział w mechanizmach tlenowego rozszczepiania węglowodanów. Aldolaza surowicy katalizuje odwrotne rozdzielanie 1,6-difosforanu fruktozy na dwie fosfo-triozy - aldehyd fosfoglicerynowy i monofosforan diooksyacetonu. Aktywność aldolazy w surowicy jest zwiększona w ostrym epidemicznym zapaleniu wątroby i, w mniejszym stopniu, w ostrym toksycznym zapaleniu wątroby. W ostrym wirusowym zapaleniu wątroby obserwuje się 5–20-krotny wzrost aktywności aldolazy difosforanu fruktozy u 90% pacjentów. Jego wzrost występuje 3-15 dni przed pojawieniem się innych objawów klinicznych choroby. Po 5 dniach od początku okresu żółtaczki zmniejsza się aktywność aldolazy. Wzrost aktywności aldolazy odnotowuje się również w przypadku postaci ostrego zapalenia wątroby o charakterze anikterycznym. U pacjentów z przewlekłymi procesami zapalnymi w wątrobie aktywność aldolazy nieznacznie wzrasta, aw niewielkiej liczbie z nich.
Badanie aktywności aldolazy w surowicy przeprowadza się zgodnie z metodą V.I. Tovarnitsky, E.N. Voluyskaya. U zdrowych ludzi aktywność tego enzymu nie przekracza 3-8 jednostek.
Aminotransferazy (transaminazy) są często stosowane do diagnozowania zapalnych chorób wątroby. Aminotransferazy w organizmie człowieka przeprowadzają procesy transaminacji (odwrotne przeniesienie grup aminowych aminokwasów na keto kwasy). Badanie aktywności aminotransferazy asparaginianowej (AST) i aminotransferazy alaninowej (ALT) ma największe znaczenie. Enzymy te są szeroko rozpowszechnione w różnych narządach i tkankach - wątrobie, mięśniu sercowym, mięśniach szkieletowych, nerkach itp. Wzrost aktywności aminotransferaz nabiera wartości diagnostycznej w porównaniu z objawami klinicznymi choroby.
Badanie prowadzone jest zgodnie z metodą Reitmana i Fraenkel. Normą dla AST jest 0,1–0,45 mmol / (h • l) (8–40 jednostek), dla AlT to 0,1–0,68 mmol / (h • l) (5–30 jednostek). Obecnie ilość substratu w molach katalizowana przez 1 l cieczy testowej na 1 godzinę inkubacji w 37 ° C (mmol / (h • l)) przyjmuje się jako jednostkę aktywności enzymu Jednostki aktywności enzymu pobrane wcześniej przekształca się we wskazane stosując następujące wzory: dla AsT - D / 88, dla AlT - D2 / 88, gdzie D jest wskaźnikiem aktywności enzymu, wyrażonym w starym wymiarze (jednostki), 88 jest współczynnikiem konwersji, liczbowo równym masie cząsteczkowej kwasu pirogronowego.
W epidemicznym zapaleniu wątroby aktywność aminotransferaz zwiększa się z dużą konsystencją i we wczesnych stadiach, nawet przed pojawieniem się żółtaczki. Przy toksycznym zapaleniu wątroby i zaostrzeniu przewlekłej aktywności aminotransferaz zwiększa się 3-5 razy. Zmiany w marskości wątroby nie są tak regularne.
Dehydrogenaza mleczanowa (LDH) jest enzymem glikolitycznym, który odwracalnie katalizuje utlenianie 1-mleczanu do kwasu pirogronowego. Dla LDH dinukleotyd nikotynamidowy jest wymagany jako pośredni akceptor wodoru. Pięć izoenzymów LDH wykryto w surowicy. LDH, znajdujący się w mięśniu sercowym, LDH5 - w wątrobie. Piąta frakcja enzymu jest hamowana przez mocznik, a ta właściwość enzymu ułatwia jego oznaczanie.
LDH w surowicy określa się metodą Sevel i Tovarek. Normalne wartości całkowitej aktywności LDH w surowicy wynoszą 0,8–4,0 mmol kwasu pirogronowego na litr surowicy na 1 godzinę inkubacji w 37 ° C. Mocznik-LDH stanowi 54-75% całkowitego LDH.
Jest również stosowany w laboratoriach klinicznych do oznaczania LDH metodą elektroforezy surowicy krwi w żelu poliakrylamidowym. Metodę określania LDH można znaleźć w książce referencyjnej V. G. Kolba, V. S. Kamyshnikova. W wirusowym zapaleniu wątroby aktywność LDH4 i LDH5 jest zwiększona w pierwszych 10 dniach u wszystkich pacjentów, stopień jej wzrostu zależy od ciężkości choroby.
Cholinesterazy zawarte są w erytrocytach (acetylocholinesteraza) i w surowicy (acylochrolaza acylocholina). Oba enzymy rozszczepiają estry choliny do choliny i odpowiednich kwasów i wyróżniają się swoistością. Acetylocholinesteraza hydrolizuje tylko acetylocholinę (wcześniej nazywaną prawdziwą cholinoesterazą). Cholinesteraza w surowicy jest zdolna do rozkładu wraz z acetylocholiną i butyrylocholiną (i 2 razy szybciej niż acetylocholina). Dlatego jest znany również jako butyrylocholinesteraza lub fałszywa cholinesteraza w surowicy. Jest syntetyzowany w wątrobie, jego aktywność jest wykorzystywana jako znak funkcjonalnej zdolności wątroby.
Aktywność cholinesterazy w surowicy zależy od stopnia hydrolizy chlorku acetylocholiny do kwasu octowego i choliny. Ilość uwolnionego kwasu octowego określa się przez zmianę barwy roztworu buforowego w obecności wskaźnika kwasowości na FEC. Standardem jest 160–340 mmol / (h • l). W przypadku chorób wątroby (zapalenie wątroby, marskość wątroby) zmniejsza się synteza cholinesterazy w surowicy. U pacjentów z żółtaczką obturacyjną spadek aktywności cholinoesterazy występuje tylko wtedy, gdy pojawiają się objawy ciężkiego uszkodzenia wątroby. Spadek aktywności obserwuje się w hipoproteinemii, kacheksji, zatruciu truciznami fosforoorganicznymi, lekami zwiotczającymi mięśnie. W niektórych przypadkach (nadciśnienie, mięśniaki macicy, wrzód trawienny itp.) Obserwuje się wzrost aktywności cholinoesterazy.
Gamma-glutamylotranspeptydaza (G-GTP) rozkłada chromogenny substrat gamma-glutamylo-4-nitronylid i ułatwia transfer reszty gamma-glutamylowej do akceptorowej dipeptydu glikyloglicyny. Uwolnioną 4-nitroanilinę oznacza się metodą fotokalorymetryczną przy 410 nm po zatrzymaniu reakcji enzymatycznej z kwasem octowym.
GGTG występuje we wszystkich ludzkich organach i tkankach. Aktywność tego enzymu w nerkach, wątrobie, trzustce, śledzionie, mózgu jest najwyższa (około 220 mmol / h • l), w innych narządach (serce, mięśnie szkieletowe, płuca, jelita) - znacznie niższa (0,1 - 18 mmol / (h • l) Najwyższa aktywność G-GTP jest obserwowana w żółci i moczu, jej aktywność w surowicy jest 4-6 razy mniejsza niż w moczu, w czerwonych krwinkach nie ma tego enzymu, G-GTP w surowicy zdrowych mężczyzn wynosi 0,9–6,3 mmol / (h • l), dla kobiet - 0,6–3,96 mmol / (h • l) Aktywność G-GTP jest zwiększona w marskości wątroby u 90% pacjentów z Rządowe, przewlekłego zapalenia wątroby - 75% w przewlekłym cholangiohepatitis -. U niemal wszystkich pacjentów enzymatyznego aktywowane Określenie etanolu T-GTP jest czułym testem do diagnozowania chorób wątroby alkoholu toksyczny..
Fosfataza alkaliczna jest jedną z hydrolaz, które fermentują związki organiczne, estry kwasu fosforowego z eliminacją jego pozostałości. Jest aktywny w środowisku o pH 8,6–10,1 i jest silnie aktywowany pod wpływem jonów magnezu. Fosfataza alkaliczna występuje we wszystkich ludzkich tkankach i narządach. Szczególnie dużo w tkance kostnej, miąższu wątroby, nerkach, gruczole krokowym, innych gruczołach, błonie śluzowej jelit. Zawartość fosfatazy alkalicznej u dzieci jest 1,5-3 razy większa niż u dorosłych.
W żelu agarowym zastosowano elektroforezę w celu wyizolowania pięciu izoenzymów fosfatazy alkalicznej. Pierwszy z nich jest uważany za specyficzny dla wątroby, drugi dla tkanki kostnej, piąty dla dróg żółciowych. Enzym jest wydzielany z wątroby z żółcią.
Aktywność fosfatazy alkalicznej wykrywa się za pomocą fosforanu beta-glicerolu sodu, który jest hydrolizowany w celu uwolnienia fosforu nieorganicznego. To ostatnie jest kryterium aktywności enzymu. Enzym jest oznaczany w surowicy zgodnie z metodą Bodansky'ego. Zwykle aktywność fosfatazy alkalicznej wynosi 0,5-1,3 mmola fosforu nieorganicznego na 1 litr surowicy przez 1 godzinę inkubacji w 37 ° C.
Wzrost aktywności fosfatazy alkalicznej występuje głównie w dwóch stanach: choroby kości z proliferacją osteoblastów i choroby związane z cholestazą. Zwiększoną aktywność fosfatazy alkalicznej obserwuje się w następujących chorobach kości: nadczynność przytarczyc (choroba Recklinghausena), mięsak kości, deformująca osteoza lub włóknista osteodystrofia (choroba Pageta) i inne formy osteoporozy. kamień, guz, węzły chłonne w raku dróg żółciowych, żołądek, u osób z chorobami zapalnymi wątroby i dróg żółciowych, trzustka, limfogranulomatoza itp. Zmarł stały wzrost aktywności fosfatazy alkalicznej obserwowano w nowotworach wątroby, przewlekłe zapalenie wątroby i marskość wątroby, ostre zapalenie wątroby, żółtaczka, zarówno bez i żółtaczka. Aktywność enzymu zwiększa się, gdy mechaniczny składnik żółtaczki łączy się (zapalenie dróg żółciowych, ucisk wspólnego przewodu wątrobowego przez regionalne węzły chłonne, węzły regenerującej się wątroby w okolicy bramek). Zatem wzrost aktywności fosfatazy alkalicznej we krwi pacjentów z żółtaczką wskazuje na jej mechaniczny charakter.
Test czynności wątroby
Wraz z porażką wątroby nie wszystkie jej funkcje są zakłócane, a nie jednocześnie. Ponadto wątroba ma znaczne możliwości rezerwowe: wystarcza, aby zaoszczędzić 20% funkcjonującego miąższu wątroby, aby utrzymać aktywność organizmu. Zdolność regeneracyjna wątroby jest równie duża. Dlatego pewne obniżenie funkcjonalności wątroby nie może wpływać na stan pacjenta, ponieważ wątroba nawet w tych warunkach zapewnia niezbędny poziom procesów życiowych.
Istotą większości testów funkcjonalnych (nie tylko wątroby, ale także innych narządów) jest to, że narząd testowy jest tak wymagający, że chory narząd nie może sobie z nimi poradzić (metoda obciążenia). Wśród próbek, przez które bada się funkcje wątroby, niektóre odzwierciedlają specyficzną aktywność tego narządu, na przykład pigment, funkcje neutralizujące, tworzące białka; inne próbki tylko częściowo ujawniają funkcję wątroby, ponieważ jej udział w tego typu metabolizmie nie jest izolowany, ale wiąże się z rolą innych narządów. Obejmują one, na przykład, próbki badające metabolizm węglowodanów, wody, tłuszczu.
Rys. 117. Schemat izolacji bilirubiny w normie (/) oraz w różnych typach żółtaczki: hemolitycznej (2), miąższowej (J) i mechanicznej <4).
Badanie metabolizmu pigmentu Odbiciem metabolizmu pigmentu w wątrobie jest zawartość we krwi (a także w kale i moczu) bilirubiny i produktów jej regeneracji. Identyfikacja zaburzeń metabolizmu pigmentu daje wyobrażenie o stanie funkcjonalnym hepatocytów, a także pomaga odróżnić różne typy żółtaczki.
Tworzenie się bilirubiny występuje w komórkach siateczkowo-śródbłonkowych szpiku kostnego, węzłach chłonnych, ale głównie w śledzionie, a także w gwiaździstych komórkach siateczkowo-śródbłonkowych wątroby (ryc. 117). Bilirubina powstaje z hemoglobiny, która jest uwalniana podczas fizjologicznego rozpadu czerwonych krwinek; jednocześnie hemoglobina rozpada się na białko globiny i żelazo zawierające hem. W komórkach układu siateczkowo-śródbłonkowego wolna bilirubina powstaje z uwolnionego hemu, który krąży we krwi w niestabilnej relacji z białkiem albuminy. Zawartość wolnej bilirubiny we krwi wynosi 8,55–20,52 μmol / l (0,5–1,2 mg%). Większość z nich trafia do wątroby, gdzie jest uwalniana z połączenia z albuminą i, z udziałem enzymów wątrobowych, łączy się z kwasem glukuronowym, tworząc związek rozpuszczalny w wodzie, bialy-rubinglukuronid (mono- i diglukuronid lub bilirubina związana), który jest wydalany do dróg żółciowych.
W konsekwencji wątroba bierze udział w wymianie bilirubiny, spełniając następujące funkcje: 1) tworzenie bilirubiny w gwiaździstych komórkach siateczkowo-śródbłonkowych; 2) uwięzienie wolnej bilirubiny z krwi; 3) tworzenie związku bilirubiny z kwasem glukuronowym; 4) bilirubowanie wydzielania glukuronidu do żółci (bilirubina związana).
Na początku XX wieku. Van den Berg zauważył inną interakcję surowicy pacjentów z żółtaczką z sulfodiazoreaktiwom z żółtaczką o różnej etiologii. Podczas gdy surowica pacjenta z żółtaczką obturacyjną natychmiast stała się czerwona po dodaniu środka diazoreaktywnego, ta zmiana koloru surowicy pacjenta z żółtaczką hemolityczną wystąpiła dopiero po dodaniu do niej alkoholu. Reakcję w pierwszym przypadku nazwano bezpośrednią, w drugiej - pośrednią. Okazało się, że pośrednią reakcję daje wolna bilirubina i bezpośrednia reakcja przez bilirubowanie glukuronidu (sprzężonego, tj. Związanego bilirubiny). W zależności od dodania jednej lub dwóch cząsteczek kwasu glukuronowego do cząsteczki bilirubiny tworzy się bilirubina mono- lub diglukuronidowa.
We krwi zdrowych ludzi jest tylko wolny pigment. W chorobach, którym towarzyszy naruszenie lub zniekształcenie normalnego wydzielania bilirubiny związanej z żółcią, dostaje się ona do krwiobiegu, a następnie obie pigmenty krążą w niej (można je określić oddzielnie).
Jakościowa próbka Van den Berga podaje orientacyjne informacje: jeśli okaże się pośrednia, możemy założyć, że we krwi jest tylko wolna bilirubina; jeśli okaże się bezpośrednie, to nie wiadomo w jakim stosunku oba pigmenty - pozytywna reakcja bezpośrednia maskuje obecność dowolnej ilości wolnej bilirubiny. Obecnie używają głównie oddzielnego oznaczania ilościowego frakcji bilirubiny. W większości badań przeprowadzonych w tym celu stosuje się te same odczynniki diazowe jak w przypadku próbki jakościowej (odczynnik I diazo: 5 g kwasu sulfanilowego i 15 ml silnego kwasu solnego rozpuszcza się w wodzie destylowanej i objętość doprowadza się do 1 l wodą destylowaną; diazoreakt II: 0,5% roztwór azotynu sodu, mieszanina diazo: 10 ml diazoreaktywnego I + 0,25 ml diazoreaktywnego II).
Test jakościowy: do 0,5 ml surowicy wlać 0,25 ml mieszaniny diazo. W przypadku zaczerwienienia surowicy w ciągu mniej niż 1 minuty, reakcja jest uważana za szybką i wskazuje na obecność bilirubiny związanej z surowicą. Jeśli zaczerwienienie występuje powoli (w ciągu 1–10 min), co występuje, gdy względnie mała ilość związanego bilirubiny jest przyłączona do wolnej, reakcję uważa się za bezpośrednio opóźnioną. Jeśli nie ma zaczerwienienia dłużej niż 10 minut, bezpośrednia reakcja jest uważana za negatywną. Jeśli chcesz się upewnić, że żółty kolor takiej surowicy zależy od bilirubiny, dodaj do niej podwójną ilość alkoholu, przefiltruj i dodawaj do przesączu mieszaninę diazową, w wyniku czego ciecz zmienia kolor na różowy (reakcja pośrednia). Istnieje wiele metod ilościowego oznaczania frakcji bilirubiny. Niektóre z nich opierają się na fakcie, że na wolną bilirubinę wpływają takie substancje, jak kofeina, która jest stosowana w najbardziej powszechnej metodzie Endrashik, alkohol metylowy itp., Działając jak katalizator, przyspieszacz, uzyskuje zdolność do reagowania z diazoreaktantem. W pierwszej części surowicy poddanej działaniu przyspieszacza można określić całkowitą zawartość obu frakcji. W innej części, bez dodawania przyspieszacza, określa się tylko związany pigment. Odejmując jego związaną frakcję od całkowitej ilości bilirubiny, rozpoznają wolną frakcję. Inne metody oddzielnego oznaczania frakcji bilirubiny (chemicznej, chromatograficznej) są bardziej złożone.
Wolna bilirubina, nierozpuszczalna w wodzie, nie jest wydalana przez nerki; po związaniu z kwasem glukuronowym staje się rozpuszczalny w wodzie, gdy gromadzi się we krwi - z żółtaczką pod- i wątrobową, jest wykrywany w moczu. W drogach żółciowych uwalniana jest tylko związana bilirubina (bilirubinglukuronid). W dużych przewodach żółciowych i woreczku żółciowym (szczególnie podczas procesów zapalnych w nich) i dalej w jelicie, niewielka część bilirubiny jest przywracana do urobilinogenu, który jest wchłaniany w górnym jelicie cienkim i wchodzi do wątroby z krwią żyły wrotnej. Zdrowa wątroba całkowicie go łapie i utlenia się, ale chory organ nie jest w stanie pełnić tej funkcji, urobilinogen przenika do krwi i jest wydalany z moczem jako urobilina. Urobilinuria jest bardzo subtelnym i wczesnym objawem czynnościowej niewydolności wątroby. Reszta, większość bilirubiny w jelicie zostaje przywrócona do stercobilinogenu. Główna jego część jest wydalana z kałem, zamieniając się w odbyt i wydostając się z niego (w świetle i powietrzu) do stercobiliny, nadając odchodom normalny kolor. Niewielka część sterkobilinogenu, wchłaniana w dolnych częściach okrężnicy, przez żyły hemoroidalne, omijając wątrobę, wchodzi do ogólnego krążenia i jest wydalana przez nerki. Normalny mocz zawsze zawiera śladowe ilości stercobilinogenu, który pod działaniem światła i powietrza zamienia się w sterkobilinę.
Większość reakcji wykrywających produkty redukcji bilirubiny w moczu daje podobne wyniki zarówno dla urobiliny, jak i stercobiliny, chociaż te dwie substancje różnią się zarówno budową chemiczną, jak i właściwościami fizycznymi. Metody ich rozdzielania są stosunkowo złożone. Dlatego w praktyce laboratoryjnej są one otwierane razem i określane jako urobilinoidy (ciała urobilinowe).
Zawartość ciał urobilinowych w moczu zwiększa się nie tylko wtedy, gdy czynność wątroby jest niewystarczająca, ale także gdy wzrasta hemoliza. W tych przypadkach, z powodu uwolnienia znacznej ilości hemoglobiny, powstaje więcej bilirubiny i wydzielana jest do jelita. Zwiększona produkcja sterko-biliny prowadzi do zwiększonego wydalania z moczem. W przypadku żółtaczki obturacyjnej, gdy żółć w ogóle nie wchodzi do jelita, nie ma sterkobiliny w kale, nie ma ciał urobilinowych w moczu. Gdy żółtaczka wątrobowokomórkowa zmniejsza wydalanie bilirubiny w żółci i ilość stercobiliny w kale zmniejsza się, a liczba ciał urobilinowych w moczu wzrasta. Ich stosunek, wynoszący 10: 1–20: 1, jest znacznie zmniejszony, osiągając 1: 1 w przypadku ciężkich zmian w wątrobie, aw żółtaczkach hemolitycznych wzrost stercobiliny w kale znacznie przekracza wzrost wydalania moczu przez ciała urobilinowe. Ich stosunek wzrasta do 300: 1–500: 1. Stosunek produktów do odzyskiwania bilirubiny w kale i moczu jest znacznie bardziej istotny w różnicowaniu żółtaczki niż wartość bezwzględna każdego z nich.
Badanie metabolizmu węglowodanów. W komórkach wątroby z udziałem układów enzymatycznych zachodzi synteza glikogenu, jego odkładanie i glikogenoliza, a także glikoneogeneza. Utrzymywanie glukozy we krwi jest zapewniane, oprócz wątroby, przez aktywność innych narządów i układów - trzustki, układu przysadkowo-nadnerczowego itd. W związku z tym, stężenie glukozy we krwi na czczo zmienia się tylko przy skrajnie ciężkim uszkodzeniu wątroby i ujawnia się jej niewystarczający udział w węglowodanach wymiana jest możliwa tylko za pomocą próbek funkcjonalnych.
Test obciążenia glukozą jest nieskuteczny, ponieważ na zawartość tego ostatniego we krwi, oprócz wspomnianych już narządów, wpływa również stan wegetatywnego układu nerwowego, zapas glikogenu w wątrobie i mięśniach itp.
Test z obciążeniem galaktozą ma znaną wartość (galaktoza nie jest absorbowana przez żadną tkankę i narządy, z wyjątkiem wątroby, a hormony nie wpływają na jej zawartość we krwi). Pacjentowi wolno wypić roztwór 40 g galaktozy w 200 ml wody i określić jego wydalanie z moczem. Zwykle występuje nie dłużej niż 4 godziny i nie przekracza 3 g. Czynność nerek i wchłanianie jelitowe mogą wpływać na wydalanie galaktozy w moczu, dlatego oznaczenie zawartości galaktozy we krwi jest bardziej znaczące. Przy dobrej funkcji wątroby maksymalny wzrost zawartości galaktozy we krwi obserwuje się po 30–60 minutach i nie przekracza 15% poziomu początkowego; ten ostatni jest osiągany ponownie przez 2 h. Przy słabej funkcji wątroby, wzrost poziomu galaktozy jest wyższy, spadek poziomu galaktozy we krwi występuje wolniej.
Badanie metabolizmu białek Rola wątroby w metabolizmie białek jest bardzo wysoka: białka są syntetyzowane i osadzane w niej, aminokwasy, polipeptydy spożywcze i produkty rozkładu białek tkankowych przedostają się do krwiobiegu.
Tutaj są katabolizowane, neutralizują i usuwają nieużywane produkty rozkładu. Niektóre aminokwasy ulegają deaminacji i transaminacji. Uwolniony amoniak jest przekształcany przez wątrobę w mniej toksyczny mocznik Z aminokwasów sprowadzanych z zewnątrz i syntetyzowanych przez wątrobę, ponownie buduje własne białka tkanek, jak również białka krwi; albumina, globuliny (a i p, w pewnym stopniu y), fibrynogen, protrombina, heparyna, niektóre enzymy. W wątrobie powstają związki białek z lipidami (lipoproteinami) i węglowodanami (glikoproteinami).
Naruszenie funkcji tworzenia białka w wątrobie jest wykrywane przez badanie białek osocza krwi lub surowicy. Naruszenie to wpływa nie tyle na całkowitą ilość białek, ile na stosunek ich frakcji, których zmiana - dysproteinemia - jest obserwowana w większości zmian w wątrobie.
Metoda elektroforezy na papierze, najpowszechniej stosowana obecnie w praktyce klinicznej, opiera się na fakcie, że różne białka w polu elektrycznym zależą od wielkości, kształtu cząsteczki, jej ładunku i innych czynników przy różnych prędkościach w kierunku elektrody dodatniej. Podczas elektroforezy na papierze różne frakcje białkowe są skoncentrowane w różnych częściach paska papieru, gdzie można je zidentyfikować poprzez odpowiednie zabarwienie. Wielkość ułamków zależy od intensywności koloru każdego z nich. Białka osocza są podzielone na pięć głównych frakcji - albuminę; a, - i2-, (5-, jak również y-globuliny (Tabela 4). Elektroforeza w innych podłożach (agar, żel skrobiowy itp.) Pozwala podzielić białka na większą liczbę frakcji.
W chorobach wątroby spadek stosunku albumin-globulin (A / G) jest najczęstszy, głównie ze względu na spadek
Tabela 4. Normalny proteinogram
Zdrowie, medycyna, zdrowy styl życia
Ilościowy test czynności wątroby
Przewlekłe choroby wątroby charakteryzują się długim okresem utajonym z minimalnymi niespecyficznymi objawami klinicznymi (etap kompensacji). W końcowej fazie choroby rozwija się wodobrzusze, żółtaczka, encefalopatia i precoma (faza dekompensacji). Poziom albuminy i protrombiny w surowicy pozwala ocenić syntetyczną funkcję wątroby, która w większości przypadków pozostaje normalna przez długi czas. Ilościowe badanie czynności wątroby we wczesnych stadiach dynamiki pozwala monitorować skuteczność leczenia i oceniać rokowanie, ale nie ma wartości diagnostycznej.
Załaduj test galaktozy
Galaktoza jest substancją nieszkodliwą. Może być podawany dożylnie w dawce wystarczającej do nasycenia układu enzymatycznego odpowiedzialnego za jego eliminację. Szybkość eliminacji galaktozy zależy od jej fosforylacji przez kinazę galakto. W tym przypadku konieczne jest uwzględnienie części podanej dawki, która jest eliminowana drogą pozawątrobową. Ten test dość dokładnie odzwierciedla funkcję komórek wątroby, ale wymaga powtarzanego oznaczania poziomu galaktozy przez 2 godziny.
Tabela 2-2. Ilościowy test czynności wątroby
Mikrosomy (system cytochromu P450)
Glikoproteina z końcową resztą galaktozy
* Przy niskiej dawce pozwala ocenić przepływ krwi przez wątrobę.
Testy oddechowe
Aminopiryna jest przekształcana przez N-demetylację przez cytochrom P450 (znajdujący się we frakcji mikrosomalnej hepatocytów) w dwutlenek węgla. Ta substancja w swoich właściwościach spełnia wymagania testów oddechowych w badaniu funkcji wątroby. Aminopirynę znakuje się radioaktywnym izotopem 14 C i podaje doustnie. Próbki wydychanego powietrza są zbierane w dwugodzinnych odstępach. Stężenie 14 C w wydychanym CO2 korelował z tempem spadku radioaktywności w osoczu. Próbka odzwierciedla pozostałą masę funkcjonujących mikrosomów i żywej tkanki wątrobowej. Wyniki uzyskane w eksperymentach na szczurach z modelem marskości wątroby sugerują, że następuje spadek N-demetylacji z powodu utraty masy funkcjonalnej hepatocytów; jednocześnie aktywność funkcjonalna na hepatocyt pozostaje niezmieniona. Badanie ma wartość prognostyczną i pozwala monitorować skuteczność leczenia (jego rola w diagnozie jest niewielka). Test aminopirynowy można wykorzystać do badania wpływu leków na funkcję enzymów mikrosomalnych wątroby.
Oznaczone 14 kofeiną i fenacetyną można również stosować podczas przeprowadzania testów oddechowych. Próbka z ładunkiem 14 C-galaktozy pozwala na ocenę enzymów zlokalizowanych w cytozolu. Wszystkie testy oddechowe są złożone i kosztowne, więc jest mało prawdopodobne, że będą one szeroko stosowane w przyszłości.
Usuwanie kofeiny przez gruczoły ślinowe
Kofeina (1,3,7-trimetyloksantyna) jest prawie całkowicie metabolizowana przez N-demetylację w układzie mikrosomalnym wątroby (cytochrom P448). Metyloksantyny są wydalane z moczem. Poziom kofeiny w surowicy i gruczołach ślinowych można zbadać za pomocą testu immunoenzymatycznego. Szybkość wydalania kofeiny ze śliną przez noc dobrze koreluje z jej klirensem, a także z wynikami testu oddechowego z aminopiryną. Badanie wydalania kofeiny przez gruczoły ślinowe jest prostym sposobem oceny zaburzeń czynności wątroby. Na klirens kofeiny mogą wpływać różne czynniki: palenie przyspiesza metabolizm kofeiny poprzez indukowanie enzymów, niektóre leki, takie jak cymetydyna, hamują rozpad kofeiny; klirens kofeiny zmniejsza się z wiekiem. Po wielokrotnym oznaczaniu kofeiny u tego samego pacjenta dawka kofeiny powinna być taka sama, ponieważ jej klirens zależy od dawki.
Test z lidokainą
Lidokaina jest metabolizowana przez oksydacyjną N-deetylację przez cytochrom P450; w tym samym czasie powstaje monoetyloglicen-ceneksylidyd (MEGE), którego poziom koreluje z szybkością klirensu lidokainy. Określenie stężenia MEGE w surowicy po dożylnym podaniu lidokainy pozwala na ilościowe określenie czynności wątroby. Stężenie MEGE podlega znacznym wahaniom u osób ze zdrową wątrobą iu pacjentów z lekkim naruszeniem jego funkcji. Znaczący spadek tego wskaźnika obserwuje się w marskości wątroby, a stopień spadku koreluje z rokowaniem choroby. Przeprowadzając diagnostykę różnicową między marskością wątroby a niewielkim uszkodzeniem wątroby, badanie eliminacji galaktozy i badania układu oddechowego aminopiryny jest bardziej pouczające.
Test z antypiryną
Antipyrine ma długi okres półtrwania, który u pacjentów z ciężkim uszkodzeniem wątroby może przekraczać 30 godzin, więc próbki krwi i śliny do badań muszą być pobierane przez długi czas, co ogranicza wykorzystanie tej próbki do celów diagnostycznych.
Oznaczanie receptorów asialoglikoproteinowych
Hepatocyty wywodzą asialoglikoproteiny (z końcową resztą galaktozy) z łożyska naczyniowego z powodu obecności specyficznych receptorów na błonie sinusoidalnej hepatocytów. Gdy zmiany miąższowe wątroby, liczba tych receptorów zmniejsza się. Ocenia się ją na podstawie stopnia wychwytywania przez wątrobę znakowanego 99m Tc galaktozylo neoglikalbumin (analogu asialoglikoproteiny), który określa się stosując standardową komorę scyntylacyjną po pojedynczym badaniu próbki krwi. Wyniki badania korelują z ciężkością choroby (określaną przez system kryteriów Childa), wynikami testu oddechowego z aminopiryną i klirensem indocyjaninowym. Średnie stężenie receptorów w końcowej fazie marskości wątroby wynosi 0,35 ± 0,07 µmol / L w porównaniu z 0,83 ± 0,06 µmol / L w grupie kontrolnej [9]. Podobne wyniki uzyskuje się stosując albuminę surowicy ludzkiej znakowaną 99m Tc-dietylenotriamem i npenta-octanem galaktozylem [5]. Liczba receptorów zmniejsza się wraz z ostrym zapaleniem wątroby i wzrasta ponownie w okresie zdrowienia [12]. Pomimo obiecujących wyników, badania te są przeprowadzane tylko w szczególnych przypadkach.
Zdolność wydalania wątroby (test bromosulfaleinowy)
Stara metoda badania szybkości eliminacji dożylnie wstrzykniętego BS z łożyska naczyniowego pozwala ocenić absorpcję i zdolność wydalania hepatocytów. Ta metoda nie została zastosowana w klinice ze względu na jej złożoność, wysokie koszty i możliwe komplikacje [4].