Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest stanem zapalnym komórek wątroby, który powstaje w wyniku zakażenia wirusem HCV (wirusowym zapaleniem wątroby typu C) poprzez kontakt z krwią osoby zakażonej. Kod genetyczny flawiwirusa HCV jest przenoszony przez cząsteczkę RNA (kwas rybonukleinowy) zawartą w strukturze wirusa. To zagrażające życiu zjawisko wyróżnia się tajemnicą na początkowym etapie patologii. Odstęp czasu między zakażeniem a wystąpieniem objawów (odpowiedź układu odpornościowego) może wynosić od jednego miesiąca do sześciu miesięcy. Z reguły choroba przyjmuje postać przewlekłą i jest trudna do wyleczenia.
Współczesna medycyna pozwala zdiagnozować patologię z niewielkim uszkodzeniem wątroby. Najbardziej powszechne i skuteczne metody diagnostyczne obejmują analizę PCR. Rozważ w tym artykule, co to jest i jakie istnieją.
Jakie jest badanie
Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C jest badaniem laboratoryjnym wykrywającym flawirus, materiał genetyczny kwasu rybonukleinowego (RNA). Określa liczbę cząsteczek RNA we krwi, jakość materiału biologicznego, typ genetyczny wirusa HCV.
Metoda PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C umożliwia wykrycie minimalnej ilości flawirusa przed utworzeniem przeciwciał, co do zasady, wkrótce po zakażeniu.
Badanie jest często określane jako analiza RNA, ponieważ wykrywa cząsteczki kwasu rybonukleinowego o wielkości 30-60 nm zawarte w flawawirusie.
Badanie przeprowadza się w następujący sposób: na pusty żołądek pacjent podaje krew z żyły, która jest następnie testowana różnymi metodami:
- PCR w czasie rzeczywistym jest przeprowadzany w sposób zamknięty w sposób zautomatyzowany i ma niższy limit wykrywania wirusa RNA, równy 15 IU / ml;
- COBAS AMPLICOR o czułości 50-100 IU / ml.
Im wyższy próg czułości techniki diagnostycznej, tym większe szanse na znalezienie najniższej zawartości wirusa w badanym materiale biologicznym.
Jakie rodzaje analizy używają
Analiza, która była z powodzeniem stosowana przez kilka dziesięcioleci, nazywana jest zapaleniem wątroby typu PCR, i można ją wykryć dość łatwo i szybko. W medycynie istnieją dwie metody reakcji, zasadniczo różne od siebie:
- metoda jakościowa ujawnia obecność w materiale biologicznym źródła genetycznego określonego wirusa;
- analiza ilościowa mierzy liczbę materii genetycznej, co pozwala określić etap patologii lub ocenić skuteczność kursu terapeutycznego;
- Genotypowanie określa rodzaj wirusa obecnego w organizmie.
Ogólnie rzecz biorąc, badanie krwi pomaga zidentyfikować naturę wiremii i rodzaj genetyczny patogenu. Z reguły badania przeprowadza się 1 raz w zależności od stopnia czułości systemu diagnostycznego. Jeśli to konieczne, ponowne badanie przeprowadza się przy użyciu odczynnika ultraczułego.
Wysokiej jakości PCR
Co to jest wysokiej jakości RNA PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C? Istota reakcji polega na obecności sekwencji RNA zapalenia wątroby, a reakcja jest możliwa tylko w obecności białek wirusowych o podobnej etymologii w teście ELISA. W procesie porównywania wykrywa się obciążenie i możliwe uszkodzenie obszaru wątroby.
Charakterystyczną cechą tej metody jest zdolność do wykrywania nawet obecności oddzielnego genu.
Należy zauważyć, że po otrzymaniu wyników testów PCR i ELISA pacjent wymaga odpowiedniego leczenia, niezależnie od ostatecznego wyniku testu immunologicznego. Pozytywny wskazuje na infekcję, a negatywny PCR wskazuje na zmniejszoną liczbę cząstek wirusowych w stosunku do poziomu czułości.
Istnieje kilka warunków, które wpływają na produkcję negatywnej reakcji PCR i ELISA:
- brak odpowiednich warunków odbioru materiałów;
- wynikowa analiza zawiera zanieczyszczenie;
- w przypadku wczesnego wstrzyknięcia heparyny pacjentowi.
Pacjent nie musi przestrzegać pewnych zasad pobierania próbek krwi do analizy PCR, w tym przypadku jakość tej analizy zależy od lekarza wykonującego zabieg. Zdolność do ustalenia obecności choroby (zwłaszcza w postaci ostrej) pojawia się w ciągu kilku tygodni po zakażeniu.
Analiza ilościowa
Zaleca się test ilościowy do wykrywania obciążenia wirusowego bezpośrednio przed utworzeniem dalszej terapii i reakcją organizmu. Proces pobierania krwi odbywa się w podobny sposób, jak przy wysokiej jakości PCR i ELISA, jedynym warunkiem jest brak możliwości palenia pacjenta przed zabiegiem.
W odniesieniu do cech uzyskanych z badania danych, zwiększone obciążenie charakteryzuje się wskaźnikami od 800000 IU / ml, niskie - 400000 IU / ml. Obecność wirusa w ciele pacjenta jest wskazana przez PCR dla zapalenia wątroby nie jest negatywnym testem jakościowym.
Ten rodzaj badań pozwala określić, jak niebezpieczny jest pacjent dla otaczających go ludzi. Na przykład identyfikacja wysokiego poziomu wskazuje na zwiększoną zakaźność pacjenta. Ponadto wyniki analizy pomagają sformułować dalsze najskuteczniejsze leczenie i określić, ile istniejącej terapii uważa się za skuteczną.
Szybka negatywna reakcja testów wskazuje na powodzenie wybranej techniki, a powolna wskazuje na potrzebę dostosowania i zastosowania leczenia wieloaspektowego.
Proces przyjmowania procedury analizy zależy od konkretnego dnia przebiegu choroby. Pierwsze oznaczenie wykonuje się pierwszego dnia po przyjęciu pacjenta do szpitala, a następnie procedurę powtarza się po 4, 12 i 24 tygodniach po przyjęciu leków.
Tak więc analiza ilościowa pokazuje, które leczenie jest najskuteczniejsze, czas trwania dostępnej terapii i niebezpieczeństwo pacjenta w stosunku do innych osób.
Genotypowanie
W badaniu analizy materiału ważne jest określenie dokładności genotypu wirusa, który ma miejsce. Obecnie istnieje 11 odmian wirusa zapalenia wątroby typu C, które z kolei obejmują pewne podgatunki.
Wszystkie te gatunki różnie reagują na różne zabiegi, a poszczególne odmiany są całkowicie odporne na wiele leków.
Genotyp umożliwia określenie i pokazanie stanu wątroby. Nie jest niczym niezwykłym, że wyniki nie są „wpisywane” w wynikach, co oznacza, że wirus we krwi pacjenta nie jest wykrywany przez ten system testowy. Można to wykryć, jeśli dany genotyp nie pasuje do tej strefy. W takiej sytuacji analiza jest powtarzana, a do badania materiału używany jest bardziej czuły system.
Metoda Ultra Sensitive
Metoda ultraczuła jest niezbędna w niektórych przypadkach, gdy diagnozy zapalenia wątroby nie można przeprowadzić innymi metodami, a kiedy wykonać analizę, decyduje lekarz prowadzący:
- jeśli podejrzewasz obecność wirusa zapalenia wątroby typu C u pacjentów z ukrytą odmianą choroby;
- obecność przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C, nie potwierdzonych przez diagnostykę PCR;
- w celu określenia jakości skuteczności wybranej metody leczenia i potwierdzenia eliminacji choroby.
Czułość tej metody jest znacznie wyższa niż powszechnie stosowana, jednak metoda ta nie wyklucza uzyskiwania fałszywych wyników, zarówno pozytywnych, jak i negatywnych. W takiej sytuacji ważne jest kontrolowanie jakości procedury i możliwości zanieczyszczenia samego materiału.
Wyjaśnienie analizy PCR
Dekodowanie analizy odbywa się na podstawie prezentowanych materiałów, natomiast wyniki badań laboratoryjnych zawierają pewne dane opisane powyżej.
Transkrypt może zawierać pozytywną reakcję łańcuchową polimerazy PCR i ujemny test ELISA w teście, co oznacza, że pacjent nie ma żadnych objawów zapalenia wątroby typu C we krwi, ale w przeszłości przeniósł ostrą postać choroby. Z reguły przy diagnozowaniu specjaliści korzystają z wskaźników testowych PCR.
Podsumowując powyższe, można stwierdzić, że w trakcie analizy ważne jest przestrzeganie wszystkich zasad i zaleceń, aby uzyskane wyniki były jak najdokładniejsze, a na podstawie uzyskanych danych można określić skuteczność zastosowanej terapii i dalszą szansę pełnego wyzdrowienia.
Analiza jakościowa zapalenia wątroby typu C
8 marca 2017, 12:29 Artykuły eksperckie: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10 547
Analiza jakościowa reakcji łańcuchowej polimerazy - PCR dla zapalenia wątroby typu C określa obecność lub brak HCV w organizmie. W warunkach laboratoryjnych bada się strukturę RNA, która obejmuje wirusa. W przypadku wykrycia wirusa C konieczne jest przeprowadzenie leczenia, ponieważ zaniedbany stan wątroby spowoduje poważne konsekwencje. PCR wysokiej jakości przeprowadza się po odzyskaniu, aby potwierdzić brak przeciwciał. Powołany i do rutynowej kontroli. Przy niskim stężeniu czynnika sprawczego we krwi, PCR (jakościowy) może niczego nie wykryć, ponieważ system diagnostyczny ma własne progi czułości. W przypadku początkowej fazy choroby lub łagodnej postaci PCR przeprowadza się za pomocą ultradiagnostyki na ultraczułym sprzęcie.
Co to jest wirus RNA?
Termin RNA wirusa zapalenia wątroby typu C (lub RNA wirusa zapalenia wątroby typu C) jest chorobą wątroby. Wirus C wiąże się ze zdrową komórką ciała, penetrując do środka. Z biegiem czasu, rozprzestrzeniając się po całym ciele, konieczne jest tylko dostanie się do krwi. W rezultacie patogen przenika do wątroby, łączy się z komórkami i ciężko pracuje. Komórki wątrobowe (hepatocyty) działają pod jego wpływem, ulegają zmianom i z tego powodu umierają. Im dłużej wirus C znajduje się w wątrobie, tym większa liczba komórek umiera. Z czasem rozwijają się niebezpieczne choroby, prowadzące do złośliwej degeneracji i śmierci.
Zakażenie wątroby tym typem wirusa może nie objawiać się zewnętrznie. Przez wiele lat lub dziesięcioleci zakażona osoba czuje się całkowicie zdrowa, a tylko przypadkowe badanie ujawnia patologię. Przy oddawaniu krwi na zapalenie wątroby badana jest część łańcucha RNA (kwasu rybonukleinowego), który jest częścią ludzkiego genu (DNA). Wyniki badań laboratoryjnych nie powinny być wykorzystywane do samoleczenia, ponieważ jest to tylko wskaźnik. Dokładny obraz i dalsza diagnoza są lepiej określone przez lekarza.
Po zakończeniu: wskazania do badań
W potwierdzeniu HCV przeprowadza się analizę PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy). Badania PCR pomagają znaleźć czynnik sprawczy w strukturze RNA i zalecają skuteczną terapię. Wyznaczony w następujących przypadkach:
- wykrywanie objawów zapalenia wątroby;
- badania przesiewowe w celu zapobiegania;
- badanie osób mających kontakt;
- diagnoza zapalenia wątroby o mieszanym pochodzeniu (oznaczanie głównego patogenu);
- określenie poziomu aktywności reprodukcyjnej wirusa w postaci przewlekłej;
- marskość wątroby;
- określić skuteczność przepisanego leczenia.
Istnieje jakościowa i ilościowa analiza PCR. Ilościowa PCR pokazuje procent RNA z nosicielami wirusa we krwi, a jakość wskazuje na obecność lub nieobecność wirusa. Pozytywny wskaźnik jakości (obecność RNA wirusa zapalenia wątroby typu C) również wymaga badań ilościowych. Wysoki poziom stężenia czynnika wywołującego wirusowe zapalenie wątroby typu C wiąże się z ryzykiem jego przeniesienia, czyli zakażenia innych. Niskie liczby są lepsze do leczenia. Ilość wirusów RNA we krwi nie jest związana z intensywnością choroby. Analiza PCR jest również przeprowadzana w przypadku terapii interferonem w celu określenia czasu trwania i złożoności przebiegu leczenia.
Cechy wysokiej jakości analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C
Analizie jakościowej przypisuje się wskaźnik reakcji łańcuchowej polimerazy dla wszystkich pacjentów, którzy mają we krwi przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C. Ci, którzy byli chorzy i wyzdrowieni, muszą ponownie przystąpić do testu. Zaleca się zaliczenie testu na wirusowe zapalenie wątroby typu B, a następnie, w przypadku pozytywnego wyniku, i na wirusowe zapalenie wątroby typu D. Również jakościowo analizowana reakcja powinna być przeprowadzona w połączeniu z innymi badaniami krwi. Analizy pokażą pełny obraz rozprzestrzeniania się wirusa.
Z wyników testu wynika, że tylko pozytywny wynik testu na wirusowe zapalenie wątroby typu C będzie widoczny lub negatywny, czyli obecność lub brak wirusa. Jeśli dane wyjściowe są „wykrywane”, wirus jest i nadal jest aktywny. Oznaczenie „nie wykryto” wskazuje na brak wirusa lub jego niewielką ilość. Przy tym wskaźniku należy pamiętać, że czułość analityczna systemów diagnostycznych jest różna i że wirusowe zapalenie wątroby typu C może nadal znajdować się we krwi, ale nie przejawia się w analizie.
Szczególnie wrażliwa metoda PCR ujawnia ultra hepatitis C nawet w niewielkich ilościach. Stosuje się badanie hybrydyzacji fluorescencyjnej, które jest wielokrotnie wyższe niż standardowe systemy PCR. Metoda jest stosowana w kilku przypadkach:
- podejrzewane ukryte formy wirusowego zapalenia wątroby typu C;
- Diagnostyka PCR nie potwierdziła patogenu, ale istnieją przeciwciała;
- w przypadku odzyskiwania;
- wykryć wczesne zakażenie.
Analiza dekodowania
Dekodowanie PCR HCV wpływa na ostateczną decyzję podczas diagnozy, w szczególności metodą ultrametodową. Główną wadą tego badania jest ścisłe przestrzeganie sterylnych warunków dla próbki i materiałów. Nieznaczne odchylenie czasami pokazuje niedokładne wnioski analityczne, komplikuje diagnozę i późniejsze leczenie. Analiza PCR w celu określenia zapalenia wątroby RNA nie zawsze z pewnością pokazuje obraz choroby, czasami dopuszcza się niedokładności iw obu kierunkach.
Diagnozowanie wirusa zapalenia wątroby zaleca się przeprowadzenie kompleksowego badania.
Norma wskaźników
Brak przeciwciał JgM przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C w wynikach badania jest uważany za normę w analizie reakcji łańcuchowej polimerazy. Jednocześnie wyniki analizy serologicznej wskazują na obecność przeciwciał przeciwko wirusowi C i jest to również w normalnym zakresie. Definicja jakościowa nie pokazuje intensywności choroby, ujawnia jedynie czynnik sprawczy wirusowego zapalenia wątroby typu C w RNA. Ta analiza jest powtarzana po zabiegu, aby potwierdzić faktyczny powrót do zdrowia.
Odchylenia
Jeśli obecne są przeciwciała JgM na RNA HCV, wskazuje to na rozwijającą się infekcję. Choroba w tym samym czasie postępuje ostro lub chronicznie, objawia się w różnych stadiach. Jeśli odnotowano spadek liczby przeciwciał, analiza wskaże, że wyniki leczenia zostały osiągnięte podczas powrotu do zdrowia. Istnieją niezwykle rzadkie przypadki fałszywie dodatnich wyników w diagnostyce. Występują u kobiet w czasie ciąży iu osób z innymi chorobami zakaźnymi.
Diagnoza za pomocą PCR dla zapalenia wątroby typu C
Nie wszyscy wiedzą, dlaczego stosują metodę diagnostyczną PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C. Jedną z najczęstszych grup chorób są choroby zakaźne przewodu pokarmowego. Najczęściej dotyczy to żołądka (wrzody), jelit (zapalenie okrężnicy, zapalenie jelit) i wątroby (zapalenie wątroby).
Spośród wszystkich wymienionych powyżej organów największy ciężar nałożony jest na wątrobę. W organizmie niezwykle ważna jest rola wątroby:
- Prawie wszystkie reakcje metaboliczne zachodzą w wątrobie (w tym miejscu powstają wszystkie istotne składniki, które pozwalają organizmowi w pełni funkcjonować).
- Wątroba jest głównym organem detoksykacyjnym. Z jego pomocą (w szczególności poprzez żółć) usuwa się wiele substratów, które mogą powodować zatrucie i prowadzić do poważnych konsekwencji.
Niestety, wiele osób nie monitoruje swojego zdrowia, dlatego wątroba zaczyna cierpieć. Zazwyczaj rozwija się zapalenie wątroby o różnej etiologii (wirusowej, toksycznej).
Definicja zapalenia wątroby
Wirusowe zapalenie wątroby zajmuje ważne miejsce wśród chorób wątroby. Ciężkość przebiegu choroby, złożoność leczenia stawiają je na pierwszym miejscu wśród patologii innej natury tego narządu.
Wszystkie zapalenie wątroby dzieli się na ostre i przewlekłe. Wirusowe zapalenie wątroby typu A i B klasyfikuje się jako ostre, w przewlekłym zapaleniu wątroby typu C pierwsze miejsce.
Choroba ta jest wywoływana przez wirus zapalenia wątroby typu C. Charakterystyczną cechą jest to, że choroba może trwać przez długi czas bez żadnych objawów klinicznych.
Przenosi się głównie przez krew. Wraz z przepływem krwi wirus dostaje się do wątroby, gdzie zaczyna się namnażać w komórkach. W wyniku akumulacji wirionów następuje zniszczenie zakażonego hepatocytu. W odpowiedzi na to zaczynają powstawać przeciwciała, które zaczynają atakować resztki hepatocytów. Z tego powodu z czasem rozwija się pula przeciwko komórkom wątroby, która pogarsza przebieg choroby.
Ze względu na to, że choroba jest łagodna bezobjawowo lub bezobjawowo, a objawy kliniczne pojawiają się tylko wtedy, gdy komórki są znacząco dotknięte, choroba ta wymaga stworzenia metod diagnostycznych w celu wykrycia jej obecności i podjęcia odpowiednich środków.
Diagnoza zapalenia wątroby typu C: analizy jakościowe i ilościowe
Obecnie do diagnozy zapalenia wątroby typu C stosuje się takie metody, jak biopsja wątroby i immunogram.
Pozwalają one bezpośrednio określić obecność zakażonych hepatocytów (próbki biopsji wątroby) lub swoistych przeciwciał przeciwko zaatakowanym komórkom (immunogram). Istnieje jednak metoda, która pozwala wiarygodnie określić obecność samego wirusa. Jest to reakcja łańcuchowa polimerazy PCR.
Istota tej metody polega na tym, że w pewnych warunkach zachodzi produkcja łańcuchów RNA. Wynika to z faktu, że we krwi znajdują się fragmenty cząsteczki wirusa lub biopsja. Podczas łączenia ich z niektórymi cząsteczkami w podłożu następuje synteza łańcuchów komplementarnych do wirusowego RNA. W późniejszej analizie i porównaniu ze znaną sekwencją nukleotydową wirusa zapalenia wątroby typu C możliwe jest określenie, czy wirus jest obecny w organizmie i czy występuje uszkodzenie wątroby.
PCR przeprowadza się po wykryciu swoistych przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby we krwi. Po przeprowadzeniu testu wynik - RNA zostaje „wykryty” lub „nie wykryty”. Czasami może powiedzieć „za mało materiału” - w tym przypadku konieczne jest ponowne przebadanie w kierunku wirusowego zapalenia wątroby typu C.
Jeśli liczba cząstek wirusowych jest mniejsza niż wymagana ilość minimalna, to możemy powiedzieć, że nie ma zapalenia wątroby, a minimalne ilości materiału genetycznego mogą być „zmieszane” z powodu naśladowania materiału genetycznego lub niektórych sekwencji nukleotydowych, które mogą pokrywać się z wirusem.
- W przypadku PCR można zaobserwować negatywny wynik, gdy rzeczywiście występują cząsteczki wirusa we krwi, ale są one tak małe (niedawno pojawiła się infekcja lub analiza była poprzedzona długotrwałą i intensywną terapią antywirusową), że system testowy po prostu nie mógł normalnie określić ich stężenia. RNA - „nie wykryto”.
- Jeśli wynik PCR daje wynik pozytywny, we krwi jest tak wiele cząstek wirusa, że ich liczba przekracza dolny próg czułości systemu testowego. W tym przypadku istnieje wysokie ryzyko rozwoju procesu zakaźnego (lub jest on już obecny w dość zaawansowanym stadium). Zazwyczaj duża ilość wirusa jest już wskazaniem do leczenia i późniejszego przeszczepu wątroby.
Czasami test może stać się fałszywie dodatni lub fałszywie ujemny.
Fałszywie ujemny wynik PCR zapalenia wątroby obserwuje się w przypadku, gdy niektóre składniki są obecne w ośrodku reakcji, które hamują tworzenie kopii cząstki wirusa. Z tego powodu nie jest możliwe uzyskanie prawdziwego obrazu stanu krwi, który przyczynia się do przejścia wirusa i postępu choroby. Obecność heparyny we krwi może również wpływać na reakcję (przez zmniejszenie względnej lepkości krwi). Nieprawidłowa interpretacja analizy jest możliwa nawet wtedy, gdy warunki transportu i przechowywania badanego materiału nie zostały spełnione.
Wyniki fałszywie dodatnie, w przypadku rozpoznania zapalenia wątroby typu C, najczęściej powstaje reakcja PCR, gdy probówka lub środowisko pracy są zanieczyszczone. Ponadto można zaobserwować pozytywne wyniki w obecności wirusów zapalenia wątroby innych grup (z powodu reakcji krzyżowej).
Jakościowa analiza PCR w celu wykrycia zapalenia wątroby typu C
Obecność we krwi dużej liczby krioglobulin również bezpośrednio wpływa na przebieg reakcji PCR. Z tego powodu konieczne jest określenie ich stężenia we krwi przed badaniem na wirusowe zapalenie wątroby typu C w celu wykrycia wcześniejszego zniekształcenia wyniku i zapobieżenia temu.
Po tych testach staje się jasne, czy we krwi znajdują się cząstki wirusowe. Przy ich określaniu zaleca się natychmiastowe rozpoczęcie leczenia przeciwwirusowego w celu spowolnienia postępu procesu. W przeciwieństwie do wirusowego zapalenia wątroby typu B, nie ma całkowitego wyleczenia zapalenia wątroby typu C; choroba przechodzi tylko w etap utajony i zaczyna postępować wolniej. Uszkodzenie wątroby jest nieuniknione. Na ostatnim etapie procesu, gdy wątroba nie może już poradzić sobie z funkcją, może wymagać jej przeszczepienia.
Leczenie odbywa się głównie za pomocą dwóch leków - interferonu i rybawiryny.
Udowodniono ich skuteczność w spowalnianiu procesu pokonywania hepatocytów. Po drodze terapia infuzyjna jest koniecznie zalecana, aby ułatwić pracę wątroby.
Wszyscy pacjenci, u których zaobserwowano wzrost liczby cząstek wirusowych we krwi, muszą być zarejestrowani u hepatologa. Kilka razy w roku zaleca się przeprowadzenie badania profilaktycznego w celu określenia postępu procesu i terminowego wykrycia wskazań do przeszczepu. Ponadto możliwe jest stosowanie hepatoprotektorów, chociaż opinie lekarzy nieco się różnią. Niektórzy uważają, że leki te pozwalają na zawieszenie procesu i ochronę wciąż nienaruszonych hepatocytów; inni są przekonani, że nie ma sensu ich przyjmować i należy prowadzić intensywną terapię przeciwwirusową.
Zatem zapalenie wątroby typu C należy do kategorii chorób, których identyfikacja stwarza pewne trudności. Poprawa metod diagnostycznych, a także terminowe badania profilaktyczne zmniejszą częstość występowania tej choroby. Ważne jest również zapobieganie tej chorobie. Należy uważnie unikać kontaktu z krwią, odmówić przyjmowania narkotyków, tylko wtedy choroba ta zostanie wyeliminowana. Najważniejszą rzeczą w zapobieganiu i leczeniu jest świadome nastawienie pacjenta do zdrowia.
Przeprowadzenie analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C i dekodowanie wyników
Analiza wirusowego zapalenia wątroby typu C to badanie, którego głównym celem jest identyfikacja materiału genetycznego czynnika sprawczego. Analiza ujawnia czynnik wywołujący chorobę za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy. Diagnoza ta charakteryzuje się wysokim stopniem dokładności, specyficzności w celu wykrycia nieobecności lub obecności infekcji wirusowej.
Istota diagnozy
W celu przeprowadzenia analizy PCR w celu określenia wirusa zapalenia wątroby typu C od pacjenta pobierana jest krew żylna, która potencjalnie zawiera HCV RNA (kwas rybonukleinowy) pożądanego wirusa.
Test PCR na zapalenie wątroby typu C implikuje procedurę dodawania do cząstek krwi pacjenta:
- startery (krótkie sztucznie zsyntetyzowane regiony niezbędnego genu);
- specjalny enzym (polimeraza RNA).
Po pobraniu próbki materiał biologiczny jest wysyłany do badań do laboratorium. Jedna porcja krwi jest potrzebna do bezpośredniej analizy PCR, druga jest wysyłana do badania metodą ELISA. Enzym jest w stanie w krótkim czasie zwiększyć liczbę materiału genetycznego wirusa patogenu. W specjalnym urządzeniu przeprowadza się kilka cykli procesów ogrzewania i chłodzenia. Na ostatnim etapie uzyskany materiał porównuje się z genami wirusa i wyciąga wniosek o obecności lub braku patologii w ciele pacjenta.
Istota i przebieg analizy PCR w laboratorium. Nakręcony przez SiberianMedicalLaboratory.
Rodzaje badań
Istnieją 3 rodzaje diagnostyki, które umożliwiają określenie obecności wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie człowieka:
- genotypowanie;
- jakość;
- ilościowy.
Metoda jakościowa
Rozpoznanie zapalenia wątroby typu C metodą jakościową ma zastosowanie u pacjentów, u których wykryto przeciwciała przeciwko wirusowi w badaniu krwi. W przypadku obecności ostrej fazy HCV RNA, takie pomiary diagnostyczne mogą określić obecność choroby w ciągu 1-2 tygodni po zakażeniu. W tym okresie nie można jeszcze opracować przeciwciał przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C.
Metoda ilościowa
Ilościowa metoda diagnostyczna jest stosowana do określenia stężenia wirusa w próbkach krwi. Taki test wiremii (stopień koncentracji) umożliwia dokładne określenie liczby jednostek wirusowego RNA. Wynik końcowy jest wyrażony w odpowiedniej objętości. Jeśli mówimy o analizie ilościowej, wskaźniki mierzy się w 1 ml (1 m3 Cm).
Parametr obciążenia wirusem oznacza poziom zakaźności choroby, to znaczy odzwierciedla stopień „zakaźności” pacjenta. W praktyce oznacza to, że im wyższe jest stężenie wirusa we krwi, tym większe są szanse na zakażenie pacjenta wirusem zapalenia wątroby typu C. Metoda badania ilościowego pozwala również ustalić jakość i skuteczność leczenia.
Genotypowanie
Genotypowanie ujawnia mutacje czynnika wywołującego chorobę. Przed przepisaniem planu leczenia określa się genotyp wirusa: od tego zależy jakość i czas trwania terapii. Na przykład w leczeniu choroby typu I sprawność wynosi 60%, w przypadku II, III - około 80%.
Zalety analizy zapalenia wątroby typu PCR
Do głównych zalet procedury należą:
- Możliwość wczesnej diagnozy. Analiza PCR jest w stanie wykryć obecność wirusa we wczesnych stadiach zakażenia.
- Niski wynik błędu. Badany zasób biologiczny pozwala zdiagnozować fragment materiału genetycznego, który jest charakterystyczny tylko dla jednego rodzaju zakażenia wirusowego. Ta okoliczność pozwala zapobiec fałszywym wynikom diagnostycznym.
- Wysoki stopień czułości. Analiza PCR jest w stanie wykryć RNA wirusa w małych ilościach, co również umożliwia śledzenie utajonych infekcji w czasie.
Wskazania dla
Konieczne jest przeprowadzenie testu PCR na zapalenie wątroby typu C, jeśli jest dostępne:
- kontakt z chorymi ludźmi, co może prowadzić do zakażenia;
- objawy marskości wątroby (powiększenie śledziony, nietypowe zmiany w wielkości wątroby, wykrycie splotu żylnego na brzuchu pod skórą);
- pozytywne wyniki testu ELISA;
- zwiększona aktywność AST i ALT (przejawiająca się w analizie biochemicznej krwi);
- potrzeba kontrolowania przebiegu terapii przeciwwirusowej;
- początkowy etap leczenia potrzeby ustalenia obciążenia wirusem;
- przeprowadzenie ostatniego etapu terapii w celu wykluczenia możliwych nawrotów;
- pacjent ma wirusowe zapalenie wątroby typu B, aby wykluczyć rozwój mieszanego uszkodzenia wątroby.
Jak przygotować się do oddawania krwi do badań PCR
Przygotowanie do analizy PCR obejmuje następujące zalecenia:
- krew jest pobierana rano;
- analiza jest przeprowadzana na pusty żołądek, dlatego zaleca się przerwę między ostatnim spożyciem 8-10 godzin;
- kilka dni przed diagnozą należy wykluczyć tłuste, pikantne i smażone potrawy, napoje alkoholowe i palenie;
- jeden dzień przed analizą należy powstrzymać się od ciężkiego wysiłku fizycznego, wykluczyć zajęcia na siłowni lub basenie.
Wyniki analizy: normy i odchylenia
Sama analiza nie jest długotrwała, a wysoko wykwalifikowany specjalista hepatolog lub specjalista chorób zakaźnych odszyfrowuje wyniki PCR dla zapalenia wątroby typu C. Na podstawie wyników analizy diagnozuje się pacjenta.
Aby poprawnie rozszyfrować wyniki ankiety, biorą pod uwagę wskaźniki:
- analiza biochemiczna krwi;
- dane ultradźwiękowe;
- wyniki biopsji.
Interpretacja analizy ilościowej
Po uzyskaniu wyników analizy ilościowej PCR brane są pod uwagę następujące wskaźniki:
Metoda PCR do wykrywania zapalenia wątroby typu C
PCR jest reakcją łańcuchową polimerazy, która jest stosowana do określenia obecności zapalenia wątroby typu C w surowicy, a wynik może być dodatni i ujemny.
Zalety metody PCR
Ta metoda diagnostyczna ma następujące zalety:
- Metoda PCR pozwala określić następujące wyniki:
- obecność wirusa RNA;
- stopień promieniowania;
- oryginalna informacja genetyczna;
- wyjątkowość i wyjątkowość danych genetycznych.
- Możesz użyć dowolnego niezbędnego materiału klinicznego:
- krew;
- plazma;
- mocz;
- płyny ustrojowe i wydaliny;
- plwocina i inne.
- Pozwala na określenie we krwi więcej niż jednego mikroorganizmu na raz, w przeciwieństwie do innych próbek.
- Uzyskanie wyników w ciągu 24 godzin.
- Uproszczone metody przechowywania i transportu analizy, patogeny są określane nawet w martwym środowisku.
- Unikalność PCR pozwala zidentyfikować pewne mikroorganizmy, które nie podlegają żadnej innej próbce.
- Wysoki stopień czułości odczynników, test jest najdokładniejszy w swoim rodzaju.
Cechy jakościowej analizy PCR
Przeprowadza się test jakościowy w celu określenia obecności wirusa we krwi i uzyskania wyniku negatywnego lub pozytywnego.
Wskazaniem do tego typu diagnozy jest wykrycie przeciwciał przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C w ciele pacjenta.
Możliwe wyniki:
- wykryte (pozytywne);
- nie wykryto (negatywne).
Test jakości nie jest odpowiedni dla pacjentów z bardzo niską zawartością wirusa we krwi, więc ma pewną czułość.
Wynik „wykryty”
Wykrycie wirusa zapalenia wątroby typu C może nastąpić kilka tygodni po zakażeniu organizmu, nawet przy braku przeciwciał przeciwko temu patogenowi. Wynik ten wskazuje na obecność w ciele i grupie krwi fragmentu RNA charakterystycznego dla zapalenia wątroby typu C.
Pacjent jest uważany za zakażonego tym wirusem i ulega dalszemu rozprzestrzenianiu się komórek chorobotwórczych w organizmie.
Wynik „nie wykryto”
Ta opcja sugeruje, że w próbce badanego materiału biologicznego nie ma fragmentów RNA specyficznych dla zapalenia wątroby typu C. Jest to wynik negatywny.
Czułość testu nie ujawnia niskiej zawartości fragmentów RNA, więc wynik „nie wykryty” nie zawsze jest wiarygodny.
Cechy interpretacji wyników
Główną cechą interpretacji wyników jest czułość progowa metody PCR.
To zależy od następujących wskaźników:
- dokładność badania;
- rodzaj i jakość używanego sprzętu.
Należy zauważyć, że czułość może wahać się między 10-500 IU / ml. Wynika z tego, że jeśli wirus jest obecny w ciele badanego pacjenta w stężeniu mniejszym niż 10 IU / ml, test pokaże wynik „nie wykryty”. Ale to nie znaczy, że patogen jest całkowicie nieobecny.
Warianty systemów diagnostycznych
W tej chwili istnieją następujące opcje dla systemów diagnostycznych:
- Jeśli krew jest pobierana od pacjenta poddawanego leczeniu przeciwwirusowemu, należy zastosować systemy diagnostyczne o czułości co najmniej 50 IU / ml. W tym celu wykorzystywane są następujące analizatory:
- Test Cobas Ampicolor HCV;
- RealBest HCV RNA.
- Aby dokonać ostatecznej diagnozy „zapalenia wątroby typu C”, konieczne jest wykrycie wirusa RNA w trzech różnych próbkach materiału biologicznego. Zalecenia te zostały opracowane przez Światową Organizację Zdrowia. Jeśli wynik jest trzy razy ujemny, diagnoza nie jest potwierdzona.
- Obecnie, oprócz metody PCR, istnieje bardziej dokładny test, zwany TMA (metoda amplifikacji transkrypcji). Jego próg czułości jest znacznie wyższy niż w innych metodach diagnozy.
Zakres wykrytych modyfikacji wirusów
Na tym etapie rozwoju genetyki znanych jest kilka rodzajów i wariantów modyfikacji wirusów.
Diagnostyka laboratoryjna w naszym kraju z absolutną dokładnością może określić następujące genotypy:
Cechy analizy ilościowej PCR
Analiza ilościowa to definicja wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie człowieka. Podczas badania RNA i obciążenie wirusowe w materiale wyjściowym określa się metodą PCR. W przeciwnym razie możemy powiedzieć, że test pozwala określić, ile komórek wirusowych znajduje się w płynie biologicznym. Do tego typu badań używa się tylko krwi żylnej. Nie ma konkretnego przygotowania do testu.
Analiza ilościowa pozwala na monitorowanie już rozpoczętego leczenia i ocenę jego skuteczności. Do oceny dane testowe są pobierane przed i podczas interwencji terapeutycznych. Za pomocą uzyskanych wyników można przewidzieć przebieg choroby.
Po sukcesie wybranej metody leczenia po 3 miesiącach, ilość RNA powinna się kilkakrotnie zmniejszyć. Zgodnie z zaleceniami analiza ilościowa jest przeprowadzana po jednym, a następnie po trzech i sześciu miesiącach. Ostatni wynik z powodzeniem leczenia powinien być negatywny.
Ocena wyników ilościowego testu PCR
W naszym kraju istnieją 2 możliwe opcje oceny wyniku ilościowego testu PCR:
- liczba kopii na mililitr płynu biologicznego;
- liczba jednostek międzynarodowych na mililitr.
Aby uzyskać jednostki międzynarodowe, liczba kopii jest dzielona przez 4.
- wysoka z PCR powyżej 800 000 IU / ml;
- niski z PCR poniżej 400 000 IU / ml.
Wynik testu ilościowego zapewnia 2 opcje:
- „Poniżej zakresu pomiarowego”;
- „Nie wykryto” (negatywne).
Ocena: „poniżej zakresu pomiarowego”
Taki wniosek wyciąga się, gdy ilościowy test RNA nie wykrył czynnika wywołującego wirusowe zapalenie wątroby typu C w materiale źródłowym komórki, ale wirus jest nadal obecny we krwi. Wiarygodność analizy potwierdza metoda jakościowa, ponieważ próg czułości testu ilościowego może nie wykryć małych wartości i stężeń patogenu.
Ocena: „nie wykryto”
Taki wniosek wyciąga się, gdy wirusy RNA wirusa zapalenia wątroby typu C nie zostały wykryte w materiale źródłowym podczas diagnozy, co jest wynikiem negatywnym.
Interpretacja wyników analizy ilościowego testu PCR
Użycie wskaźnika obciążenia wirusowego określa:
- stopień zaniedbania choroby;
- jak zaraźliwy jest pacjent;
- skuteczność terapii przeciwwirusowej.
Im wyższy jest poziom wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie, tym bardziej niebezpieczny jest dla innych ludzi i tym bardziej postępująca jest jego choroba.
PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C jest ważną metodą diagnostyczną, zwłaszcza podczas interwencji terapeutycznych. Dzięki uzyskanym wynikom negatywnym lub dodatnim możliwa jest ocena ich skuteczności, całkowite wyleczenie pacjenta lub skrócenie czasu leczenia.
Analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C
Do diagnozy „przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu C (CVHS)” wymagane jest kompleksowe badanie osoby, obejmujące badania kliniczne, laboratoryjne i instrumentalne. Ważna z punktu widzenia diagnozy prawidłowa diagnoza jest metoda PCR - reakcja łańcuchowa polimerazy.
Co pokazuje ta analiza i dlaczego jest potrzebna?
Ta metoda laboratoryjna wykrywa RNA wirusa zapalenia wątroby typu C w ludzkiej krwi. Wraz z testem immunoenzymatycznym (ELISA) dla przeciwciał przeciwko wirusowi, PCR jest wykorzystywany do diagnozy CVHC i jego genotypu patogenu. Badanie to jest jedną z najnowszych metod diagnostyki laboratoryjnej. Jego niezawodność w CVHS przekracza 97%, co jest uważane za bardzo dobry wskaźnik do badań.
Istnieją trzy testy PCR na obecność CVHS: jakościowe, ilościowe i wirusowe. Pierwsze badanie (analiza jakościowa) wirusa wykrywa go we krwi i dlatego jest wykorzystywane wyłącznie do diagnozy.
Drugie (ilościowe) badanie określa stopień obciążenia wirusem organizmu, dlatego jest używane do monitorowania skuteczności terapii.
Trzecia PCR (genotypowanie) wyjaśnia diagnozę, ustanawiając genotyp wirusa, co jest bardzo ważne dla wyznaczenia prawidłowego leczenia przeciwwirusowego.
Istotą techniki reakcji łańcuchowej polimerazy jest zastosowanie enzymów, które zwielokrotniają materiał genetyczny patogenu w biomateriale. W procesie takiej replikacji probówkę z krwią ogrzewa się kilka razy i chłodzi do temperatury wymaganej do przyspieszenia reakcji enzymatycznej. W wyniku tych manipulacji ilość genomu wirusa wzrasta wielokrotnie, co pozwala wykryć go nawet przy minimalnej ilości.
Diagnostyka PCR ma wiele zalet w porównaniu z innymi testami laboratoryjnymi:
- wysoka czułość - 97-98%;
- gwarantowana specyficzność analityczna (ujawnia dokładnie patogen, który chcesz znaleźć, a nie związany z nim szczep);
- szybkość prowadzenia (uzyskanie wniosku zajmuje nie więcej niż 2 dni).
Trzy rodzaje testów PCR
Wysokiej jakości analiza PCR jest przypisywana wszystkim pacjentom, u których analiza ELISA wykryła przeciwciała przeciwko wirusowi HVGS. Po przeprowadzeniu PCR wysokiej jakości można uzyskać dwie opcje odpowiedzi: „wykryto RNA” lub „nie wykryto RNA”. Aby wykryć minimalną ilość wirusa we krwi, potrzebne są systemy testowe o czułości co najmniej 50 IU / ml. Jeśli stężenie wirusa we krwi pacjenta jest mniejsze niż może to określić diagnosta, wynik badania może być fałszywie ujemny. Aby uniknąć takiego błędu diagnostycznego, laboratoriom wykonującym diagnostykę PCR należy zapewnić wysoce czułe systemy testowe. Na przykład w laboratorium „Invitro” stosuje się testy o czułości 15 IU / ml. Pracownicy laboratorium są zobowiązani do przekazywania informacji na temat wrażliwości testów pacjentom i lekarzom na ich pierwszą prośbę.
Ilościowa analiza PCR określa stopień wiremii, czyli stężenie patogenu we krwi, obciążenie wirusem. Wynik tego badania, w przeciwieństwie do PCR wysokiej jakości, wyraża się w liczbach, na przykład 2 x 10 * 6 IU / ml, co oznacza 2 miliony jednostek międzynarodowych w 1 ml krwi. Niektóre laboratoria używają innego wskaźnika - liczby kopii / ml. Te dwa wskaźniki są łatwe do konwersji: 1 jednostka międzynarodowa to 4 kopie RNA. Zatem, 2 x 10 * 6 IU / ml będzie oznaczać, że 8 x 10 * 6 kopii wirusowego RNA w 1 ml, tj. 8 milionów kopii w 1 ml krwi.
Genotypowanie to definicja jednego z sześciu genotypów wirusa. Obraz kliniczny, tempo rozwoju powikłań wątroby i rokowanie dla przyszłego życia pacjenta zależą od genotypu czynnika sprawczego. Genotyp wirusa jest bardzo ważny już na etapie diagnozy, ponieważ połączenie leków i czas trwania kursu terapeutycznego, który ma być przypisany pacjentowi, zależy od jego prawidłowego określenia.
Jednak nawet to pozornie „doskonałe” badanie laboratoryjne ma swoje wady:
- badanie powiela materiał genetyczny wszystkich patogenów, nawet nieożywionych, co może zniekształcić wynik. Dlatego, aby monitorować skuteczność za pomocą PCR, ponowna analiza jest przeprowadzana nie wcześniej niż 2 miesiące po poprzedniej, aby martwe wirusy mogły „opuścić” organizm pacjenta;
- część genomu wirusa, która jest określana za pomocą systemów testowych, może teoretycznie występować w innych wirusach lub mikroorganizmach, więc istnieje możliwość fałszywej pozytywnej odpowiedzi;
- wirusy szybko się mutują. Czasami szybkość i zasięg mutacji wirusa jest tak wysoka, że system testowy przestaje łapać swój genom. W rezultacie możliwy jest fałszywy wynik negatywny.
Aby zniwelować te niedociągnięcia, producenci laboratoryjnych systemów testowych do diagnostyki PCR stale przeprowadzają swoje testy, w tym reakcje krzyżowe i wrażliwość na określony genotyp wirusa.
Jak wykonać test PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C?
Aby zakończenie badania PCR było wiarygodne, konieczne jest ścisłe przestrzeganie zasad przygotowania do jego przeprowadzenia:
- badanie prowadzone jest na czczo (glukoza, tłuszcze, minerały, które dostają się do krwi z pożywienia, mogą wpływać na szybkość i jakość reakcji enzymatycznej);
- różnica między ostatnim posiłkiem a pobraniem krwi do analizy powinna wynosić co najmniej 8 godzin;
- w przeddzień badania zabrania się spożywania alkoholu i spożywania tłustych potraw, których okres eliminacji jest długi;
- dzień przed pójściem do laboratorium należy unikać silnego stresu fizycznego i emocjonalnego;
- dopóki czas pobierania krwi nie jest zalecany do palenia.
Aby uniknąć pojawienia się fałszywych wniosków, domniemany pacjent musi przyjść do laboratorium nieco wcześniej niż krew zostanie pobrana. To zajmuje 15-20 minut, aby osoba złapała oddech, uspokój się. Adrenalina, która jest obecna we krwi po szybkim spacerze, może mieć wpływ na wynik badania.
Jeśli pacjent skierowany do analizy przyjmuje jakiekolwiek leki, powinien o tym powiadomić lekarza. Możliwe, że niektóre z nich będą musiały zostać odrzucone na jakiś czas (jeśli to możliwe).
Wynik analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C
Dekodowanie wyników w laboratorium lekarza prowadzącego laboratorium. Dekodowanie to określenie odchylenia wyniku uzyskanego od normy. Szybkość wskaźników jest ustalana bezpośrednio przez producenta systemu testowego, który jest wykorzystywany przez laboratorium do diagnostyki. Dlatego nie jest zaskakujące, że w niektórych laboratoriach obciążenie wirusem określa się w IU / ml, aw innych w kopiach / ml.
Po otrzymaniu wniosku konieczne jest prawidłowe zinterpretowanie go. Leczenie wyników badania powinno być prowadzone przez lekarza prowadzącego pacjenta z wirusowym zapaleniem wątroby typu C. Dopiero po obiektywnym, instrumentalnym i laboratoryjnym badaniu pacjenta lekarz może uzyskać wystarczającą ilość danych do prawidłowej interpretacji uzyskanych wyników PCR.
Ocena jakościowa z reguły nie powoduje trudności, nawet u pacjentów. Wynik może być tylko jeden: „wykryty” lub „nie wykryty”. W tym przypadku druga z nich jest normą.
Wskaźniki analizy ilościowej są trudniejsze do zinterpretowania. Pokazuje stopień obciążenia wirusem pacjenta. Nawet wśród hepatologów nie ma zgody co do sposobu leczenia wykrytej wiremii. Większość lekarzy jest skłonna sądzić, że należy wziąć pod uwagę duże obciążenie przekraczające 8 × 10 * 5 IU / ml. Obciążenie większe niż 1 × 10 * 7 IU / ml jest uważane za bardzo wysokie, podczas gdy niskie obciążenie jest mniejsze niż 4 × 10 * 5 IU / ml.
Stopień obciążenia wirusem wskazuje na wirulencję (agresywność) wirusa: im większa jest jego ilość we krwi, tym szybciej mogą rozwinąć się komplikacje wątroby. Wysokie stężenie wirusa we krwi kobiety ciężarnej zwiększa prawdopodobieństwo jego przeniknięcia przez barierę hemato-łożyskową do płodu. Wiremia wpływa również na skuteczność leczenia: przy niskich liczbach skuteczność terapii jest wyższa niż w przypadku terapii wysokoprocentowych.
Aby mieć pewność co do dokładności analizy PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C, należy dać pierwszeństwo tylko sprawdzonym laboratoriom. Polityka cenowa w tym przypadku nie powinna odgrywać głównej roli.
Badanie PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C: rodzaje, wskazania, transkrypt
Wirusowe zapalenie wątroby typu C jest poważną chorobą, która występuje z uszkodzeniem wątroby. U osiemdziesięciu procent pacjentów staje się przewlekła. Wirus namnaża się w komórkach wątroby - hepatocytach - i powoduje ich śmierć. Martwa tkanka zostaje zastąpiona ogniskami tkanki łącznej, rozwija się zwłóknienie.
W miarę rozwoju zwłóknienia wątroba nie jest w stanie wykonywać swoich funkcji, zaczyna się marskość wątroby, która jest niebezpieczna z powodu jej powikłań: zwiększone ciśnienie w układzie żyły wrotnej, krwawienie z przewodu pokarmowego, upośledzenie krzepnięcia krwi, zmiany umysłowe z powodu uszkodzenia jąder mózgu przez toksyczne produkty.
Przyczyną choroby jest zakażenie wirusem z rodziny Flaviviridae, który należy do typu wirusów RNA. Oznacza to, że materiał genetyczny, za pomocą którego syntetyzowane są białka patogenu, jest kodowany w cząsteczce kwasu rybonukleinowego. Zakażenie następuje przez krew, seksualnie i od kobiety w ciąży do płodu. Niestety, wystarczająco dużo czasu może upłynąć między infekcją a rozpoczęciem produkcji przeciwciał - od dwóch tygodni do sześciu miesięcy. Nie pozwala to na ustalenie infekcji metodą ELISA i rozpoczęcie leczenia na wczesnym etapie.
Czym jest analiza PCR?
PCR jest metodą analizy molekularnej, która pozwala wykryć materiał genetyczny patogenu już w pierwszym tygodniu po zakażeniu za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy. Badanie ma wysoką swoistość, dokładność i pozwala nie tylko określić obecność lub nieobecność wirusa, ale także jego stężenie i genotyp.
Do badania pobierana jest krew pacjenta, w której potencjalnie może znajdować się wirusowy RNA. Startery są dodawane do krwi - sztucznie zsyntetyzowane regiony pożądanego genu o małej długości, a polimeraza RNA jest specjalnym enzymem, który wielokrotnie zwiększa ilość materiału genetycznego patogenu. Za pomocą specjalnego urządzenia przeprowadza się kilka cykli ogrzewania i chłodzenia. Następnie materiał jest analizowany i porównywany ze znanymi genami wirusa, na podstawie których wyciąga się wniosek o obecności lub braku infekcji.
Rodzaje analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C
Istnieją trzy rodzaje analizy PCR:
- Analiza jakościowa PCR. Pierwszy etap badania. Pozwala zidentyfikować materiał genetyczny wirusa we krwi.
Analiza ilościowa PCR. Pozwala określić obciążenie wirusem - stężenie materiału genetycznego patogenu w jednym mililitrze krwi. Badanie to przeprowadza się przed rozpoczęciem terapii, a następnie w pierwszym, czwartym, dwunastym i (jeśli trwa długi) dwudziestym czwartym tygodniu leczenia w celu oceny jego skuteczności.
Wskazania do analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C
Badanie PCR jest zalecane w następujących przypadkach:
- kontakt z chorą osobą, w której może wystąpić zakażenie;
- pozytywny test immunoenzymatyczny;
- objawy marskości wątroby: zmiana wielkości wątroby, powiększenie śledziony, pojawienie się podskórnego splotu żylnego na brzuchu;
- pojawienie się objawów uszkodzenia wątroby: ból prawego brzucha, zażółcenie skóry;
- zwiększona aktywność ALT i AST w biochemicznej analizie krwi;
- przed rozpoczęciem leczenia w celu określenia obciążenia wirusem;
- do monitorowania skuteczności terapii przeciwwirusowej;
- po leczeniu kontrolować nawrót;
- w obecności zdiagnozowanego zapalenia wątroby typu B, aby wykluczyć mieszane uszkodzenie wątroby.
Wyjaśnienie badań PCR na wirusowe zapalenie wątroby typu C
Dekodowanie analizy PCR i testu immunoenzymatycznego na zapalenie wątroby typu C powinno być wykonane przez hepatologa lub specjalistę chorób zakaźnych. Analiza wyników PCR jest konieczna w połączeniu z danymi z analizy biochemicznej krwi, biopsji i ultradźwięków. Tylko wykwalifikowany lekarz będzie w stanie analizować wyniki badań i na ich podstawie przepisać właściwe leczenie.
Dekodowanie analizy jakościowej.
W analizowanym materiale biologicznym znaleziono materiał genetyczny patogenu. Potwierdzona infekcja.
Zakażenie jest nieobecne lub ilość RNA patogenu jest poniżej granicy czułości.
Dekodowanie analizy ilościowej.
Normalna stawka dla zdrowych ludzi. Oznacza to, że badany materiał nie zawiera RNA wirusa zapalenia wątroby typu C lub jego stężenie jest poniżej progu czułości badania.
Stężenie RNA jest poniżej zakresu ilościowego. Wyniki te są interpretowane bardzo ostrożnie, korelują je z danymi z innych badań, często ponownie badanych.
Poziom miana wirusa w danym stężeniu jest uważany za niski. Zwykle zmniejszenie ilości wirusa oznacza, że terapia jest skuteczna.
Więcej niż 8 * 10 ^ 5 IU / ml
Poziom miana wirusa w danym stężeniu jest uważany za wysoki.
Więcej niż 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml
Ilość RNA jest powyżej górnej granicy zakresu kwantyfikacji. Z tym wynikiem nie można wyciągnąć wniosków na temat stopnia wiremii. Zwykle w takich przypadkach test powtarza się z rozcieńczeniem próbki krwi.
Dekodowanie genotypowania.
Wykryto RNA określonego genotypu
W biomateriałie wykryto wirusa zapalenia wątroby typu C o określonym genotypie i podtypie. Wynik jest zakodowany cyframi rzymskimi i literami łacińskimi, na przykład - 1a, 2b. W sumie istnieje siedem genotypów i sześćdziesiąt siedem podtypów, ale w Rosji istnieją tylko trzy pierwsze typy.
Wykryto RNA wirusa zapalenia wątroby typu C
RNA znaleziono we krwi rzadkiego genotypu dla Rosji, którego nie można przypisać pierwszemu, drugiemu lub trzeciemu typowi. Potrzebnych jest więcej badań.
Wynik ten wskazuje, że pacjent jest zdrowy lub że ilość RNA patogenu jest zbyt mała.
Możliwe jest, że analiza PCR dla wirusowego zapalenia wątroby typu C jest ujemna, a test immunoenzymatyczny rozpoznaje przeciwciała przeciwko wirusowi. Oznacza to, że pacjent miał ostre zapalenie wątroby typu C i wyzdrowiał samodzielnie. Około dwudziestu przypadków zakażenia prowadzi do samoistnego powrotu do zdrowia, jeśli ciało pacjenta ma wystarczającą odporność na zakażenie.
Chociaż PCR jest bardzo dokładna, jego wyniki mogą być zniekształcone w następujących sytuacjach:
- krew została przetransportowana do laboratorium w nieodpowiednich warunkach, temperatura została naruszona;
- próbka biomateriału była zanieczyszczona;
- we krwi pozostały śladowe ilości heparyny i innych antykoagulantów;
- Odkryto, że badacze są inhibitorami - substancjami, które spowalniają lub zatrzymują reakcję łańcuchową polimerazy.
Zalety PCR nad innymi metodami
- Diagnoza na wczesnym etapie. PCR wykrywa materiał genetyczny czynnika sprawczego. Za pomocą analizy immunofluorescencyjnej można zidentyfikować tylko immunoglobuliny - substancje wytwarzane przez organizm w odpowiedzi na infekcję. W przypadku zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu C różnica między zakażeniem a początkiem odpowiedzi immunologicznej może wynosić kilka tygodni i miesięcy, w tym czasie test ELISA będzie nieskuteczny. PCR da odpowiedź w pierwszym tygodniu po zakażeniu.
Niskie prawdopodobieństwo błędu. W badanym materiale określ obszar materiału genetycznego, który jest charakterystyczny tylko dla jednego rodzaju patogenów. Eliminuje to fałszywe wyniki. Gdy możliwe są błędy ELISA, ponieważ ten sam typ przeciwciała można uwolnić przeciwko różnym wirusom - takie przeciwciała są nazywane przeciwciałami krzyżowymi.
Jak przygotować się do oddawania krwi do badań PCR
Do analizy PCR zapalenia wątroby typu C zbiera się krew żylną. Zazwyczaj pobiera się dwie porcje krwi z żyły pacjenta: pierwsza jest wysyłana do PCR, a druga przez ELISA. Odbywa się to w celu dokładniejszej oceny, ile pacjent jest zainfekowany wirusem i jak walczy z nim odporność.
Zwykle pacjent musi przestrzegać następujących zasad:
- rano wykonuje się badanie krwi;
- Przerwa między ostatnim posiłkiem a oddaniem krwi powinna wynosić od ośmiu do dziesięciu godzin;
- dwa lub trzy dni przed analizą konieczne jest porzucenie smażonych i tłustych potraw oraz alkoholu;
- przez dwadzieścia cztery godziny przed analizą pacjent powinien unikać wysiłku fizycznego: nie noś ciężarów, nie chodź na siłownię lub basen.